金属离子对Trichoderma longibrachiatum UN32石斛碱型生物碱产量的影响

石斛碱是传统植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的特征药用活性成分,结构上属于石斛型生物碱(dendrobine-type total alkaloids,DTTAs)。石斛碱的积累受周期和环境的影响,仅从植物中获取难以满足需求。该研究的对象Trichoderma longibrachiatum UN32是实验室前期通过复合诱变获得的产DTTAs的正突变株。为提高UN32的生物碱产量,使产物表达水平趋于稳定,该研究从UN32发酵培养基中无机盐的添加量出发,利用响应面法确定金属离子的最优配比。根据Plackett-Burman法设计筛选出对响应结果影响程度最显著的3个因素分别为Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+),其最佳添加时间和添加浓度分别是Cu^(2+)0.5 mmol/L(第6天)、Fe^(2+)0.4 mmol/L(第6天)和Zn^(2+)0.7 mmol/L(第3天)。响应面统计的结果显示,当模型响应值生物碱量达最大值时,Cu^(2+)、Zn^(2+)和Fe^(2+)的浓度分别为0.54、0.69、0.39 mmol/L,此时生物碱产量达到(317.36±6.48)μg,比初始培养基提高了72.68%。综上,金属离子及其不同组合对菌株UN32生物碱的积累具有促进作用,该方法具有较好的开发价值和应用前景。

板栗花抑制植物病原真菌成分提取及活性研究

为促进板栗花资源的充分利用,本研究优化了板栗花中有效成分的提取条件,并评价了其对植物病原真菌的抑制活性。采用菌丝生长速率法比较板栗花提取物对3种不同植物病原体的作用,包括小麦赤霉病菌(FG)、油菜菌核病菌(SS)和黄瓜枯萎病菌(FO),结合单因素试验和响应面曲线法优化板栗花抑菌活性成分的提取工艺,并通过萃取分相探究不同相的抑菌活性成分含量及抑菌活性。结果表明,板栗花抑菌活性成分对3种植物病原真菌均有明显的抑制作用,其中对FG的抑制作用最为明显。经过严格的试验和优化,确定最佳提取条件为乙醇体积分数55.00%(V/V)、提取时间50.00 min、提取温度65.00℃、液料比15.00∶1 mL·g^(-1),该优化条件下提取物中的活性成分抑菌率达到了45.27%。乙酸乙酯相总酚、总黄酮含量最高,其抑制中浓度值(EC50)为2.51 mg·mL^(-1)。本研究结果可为开发新型植物源抗菌剂提供理论依据。

四种食药菌固体发酵菌质活性物质及其抗氧化能力研究

以灵芝、猴头菇、平菇、杏鲍菇为出发菌种,研究培养时间和不同食药菌对固体发酵菌质中总黄酮、总酚、DPPH·清除力和总抗氧化力的影响,为产品开发奠定基础。培养时间对菌质的总黄酮、总酚、DPPH·清除力和总抗氧化力的影响不同,且各指标的最大值出现时间各异。培养时间对平菇菌质的总酚及对灵芝、猴头菇和平菇菌质的DPPH·清除力和总抗氧化力产生显著影响,平菇菌质总酚的最大值出现在24 d,灵芝、猴头菇和平菇菌质的DPPH·清除力和总抗氧化力的最大值出现在24 d、14 d和14 d。培养时间对杏鲍菇菌质的总黄酮、总酚、DPPH·清除力和总抗氧化力产生显著影响,总黄酮、总酚和总抗氧化力的最大值出现在19 d,DPPH·清除力的最大值出现在24 d。不同菌种对菌质的总黄酮、总酚、DPPH·清除力和总抗氧化力产生显著影响。灵芝的总黄酮均值最高,猴头菇的总酚、DPPH·清除力和总抗氧化力的均值最高。研究发现菌质的活性物质与总抗氧化力之间的相关性因菌种而各异。综合考虑,猴头菇在固态发酵14 d菌质的各指标表现优异。

我国候车室环境微生物污染现状及影响因素分析

目的了解我国火车和长途汽车候车室室内环境微生物污染现状,探讨候车室室内空气及物体表面微生物污染的主要影响因素。方法利用2021年度“全国公共场所健康危害因素监测项目”中177家汽车站候车室,89家火车站候车室的监测数据。采用Mann-Whitney U检验和χ2检验比较不同分组之间空气菌落总数、空气真菌总数、物体表面菌落总数及超标率的差异。采用Logistic回归分析微生物污染水平的主要影响因素。结果南方长途汽车站候车室室内空气菌落总数及超标率均低于北方,空气真菌总数和座椅扶手表面菌落总数超标率高于北方;南方火车站候车室室内空气真菌总数及超标率均高于北方(P<0.05)。未发现候车室室内空气菌落总数、空气真菌总数和物体表面菌落总数存在季节差异。多因素Logistic回归分析结果显示:汽车站候车室室内空气真菌总数、座椅扶手菌落总数分别与温度和相对湿度均呈正相关,OR(95%CI)值分别为1.05(1.01~1.10)和1.03(1.02~1.06)、1.10(1.03~1.17)和1.02(1.01~1.04);火车站候车室室内空气真菌总数与相对湿度呈正相关,OR(95%CI)值为1.04(1.02~1.07)。结论我国火车和长途汽车站候车室室内微生物水平存在较大的南北差异,室内环境微生物的增加与温度和相对湿度增加有关。

几种市售野生食用菌中3种活性物质含量的测定

以市售11种野生食用菌为研究对象,采用分光光度法测定粗多糖、总三萜含量,高效液相色谱法测定腺苷含量。结果表明,11种野生食用菌的粗多糖含量为1.44~5.27 g·100-1·g^(-1),总三萜含量为0.75%~1.60%,腺苷含量为657~3349 mg·kg^(-1)。其中,白牛肝菌(Boletus bainiugan)的粗多糖和腺苷含量最高,香肉齿菌(Sarcodon aspratus)的总三萜含量最高。3种活性物质的变异系数从高到低依次为腺苷、粗多糖、总三萜。

灌溉、磷肥及AM真菌互作对紫花苜蓿地土壤养分的影响

土壤养分是影响紫花苜蓿(Medicago sativa)优质高产的重要因素。为探究灌溉、磷肥和丛枝菌根(AM)真菌对紫花苜蓿土壤养分的影响,本研究设置调亏灌溉(RDI)和定额灌溉(QI)两个灌溉处理,磷肥0(P0)、60(P1)、120(P2)和180 kg·hm^(−2)(P3)4个肥力梯度,以及AM(土壤不灭AM真菌)和–AM(土壤灭AM真菌)两种处理。结果表明:定额灌溉处理提高了根际土壤和非根际土壤有效磷含量,施磷肥和AM处理均显著增加了土壤中全磷和有效磷含量;在0-20、20-40和40-60 cm土层紫花苜蓿根际土壤有效磷含量均大于土壤有效磷含量,说明丛枝菌根真菌对紫花苜蓿根际土壤和非根际土壤有效磷含量有重要贡献。

土壤全磷和有效磷对土壤真菌功能类群的影响

为了探究土壤全磷和有效磷对不同真菌功能类群的影响,于2018年,在浙江百山祖国家级自然保护区亚热带森林动态监测样地(25 hm 2)进行土壤样品采集,采用Illumina高通量测序技术测定土壤真菌群落组成,结合土壤理化性质,分析土壤全磷和有效磷对丛枝菌根真菌、外生菌根真菌、植物病原菌和土壤腐生菌的影响,并构建土壤全磷和有效磷与真菌功能类群的共线性网络。结果表明,土壤全磷和有效磷能显著提高外生菌根真菌和植物病原菌的丰富度;同时,土壤全磷还能显著提高土壤腐生菌的丰富度,土壤有效磷还能显著降低丛枝菌根真菌的丰富度。此外,土壤全磷和有效磷通过影响不同真菌功能类群间接驱动真菌群落结构变化并显著预测功能类群的群落变异。综上结果表明,土壤全磷和有效磷可以驱动不同真菌功能类群的群落变化。

中国食用菌产业现状及预测

为了明确我国食用菌产业现状及未来发展环境,基于2007~2014年全国食用菌总产量、总产值、进出口和国内需求量数据,分析我国食用菌产业发展现状,利用弹性系数法预测未来5年全国食用菌市场总体情况,得出了食用菌产业需大于供的现状,在2020年全国食用菌供需状况将达到平衡。

南宁轨道交通2号线地铁站运营前集中空调通风系统的卫生状况

目的 调查南宁轨道交通2号线地铁站运营前集中空调通风系统的卫生状况。方法 在南宁轨道交通2号线运营前,根据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》要求,在16个车站同类型的集中空调通风系统中随机抽取1套,检测其送风、风管内表面、新风量、冷凝水和冷却水的卫生状况。结果 16个车站中,集中空调通风系统送风中可吸入颗粒物(PM10)、β-溶血性链球菌、人均新风量、风管内表面积尘量、细菌总数、真菌总数、集中空调系统冷凝水和冷却水中嗜肺军团菌指标均符合卫生标准要求,但其中13个车站(81.3%)集中空调通风系统送风中细菌总数和真菌总数均不符合卫生标准要求。结论 南宁轨道交通2号线地铁站运营前集中空调系统卫生状况不佳,存在微生物污染的风险。

云南省野生食用菌中总砷含量调查

目的全面了解云南省野生食用菌中总砷污染水平,为开展云南省野生食用菌中砷污染状况的评价和预警提供基础数据。方法收集30种野生食用菌品种,按GB/T 5009.11-2003《食品卫生检验方法理化部分总砷及无机砷的测定》,用原子荧光光谱法测定所采集的野生食用菌中的总砷,根据GB 2762-2012《食品安全国家标准食品中污染物限量》进行评价。结果 30种171件新鲜野生食用菌中总砷含量范围为<0.05～4.91mg/kg,其中楚雄松茸的总砷含量最高,为4.91 mg/kg;野生食用菌的平均超标率为11.1%,而松茸超标率为100%。结论本次调查选取的野生食用菌中大部分样品的总砷含量达到国家标准要求,应加强对超标野生食用菌的监测,同时也要开展对野生食用菌干制品中污染物的检测,以确保食品安全。

蒺藜内生真菌抗氧化活性菌株的筛选

为研究21株蒺藜内生真菌的抗氧化活性及筛选出一株抗氧化活性较好的菌株,本实验首先以总抗氧化能力为指标评价PDB培养基和察氏培养基发酵条件下所有菌株的抗氧化活性,选出总抗氧化能力都较强的前9株菌株测定其对DPPH·自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用,发现JL13、JL14和JL17菌株发酵产物的清除效果最为明显,因此对三株菌株发酵产物乙酸乙酯萃取部位清除自由基的活性进一步评价,结果显示:JL13菌株发酵产物清除DPPH·自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的能力都是最强的,EC50依次为149.67、439.91和514.77μg/mL。该结果表明,蒺藜内生真菌具有较好的抗氧化潜力,具有一定的开发利用价值,尤其是JL13菌株,可以作为进一步实验研究的对象。

盘锦芦苇湿地土壤微生物特征分析

基于盘锦湿地生态系统野外观测站芦苇群落生长季6-9月的定位观测资料，分析了芦苇湿地土壤微生物季节动态及其与环境因子的关系。结果表明：盘锦芦苇湿地的土壤细菌、放线菌、真菌以及微生物的总数在生长季节呈现出先减少、后增加的变化趋势。湿地的土壤细菌、放线菌以及微生物的总数在8月达到最小，而真菌数量在7月达到最小。湿地土壤中，细菌数量最大，其次是放线菌，最少的是真菌。对细菌、放线菌、真菌以及微生物总数与环境因子的相关分析表明，细菌、放线菌与微生物总数主要受水分影响，而真菌则受水分与气温的协同作用影响。

简便高质量的食用菌总RNA提取方法

STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料,采用STE法提取其总RNA,同时以Trizol法作对照。结果表明:采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260/A280比值在1.80～2.10范围内,A260/A230略大于2.00;而Trizol法提取的总RNAA260/A280比值小于1.80,A260/A230小于1.90,明显比STE法效果差;总RNA电泳检测表明:STE法的3条带(28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA)清晰,无拖尾,无杂带,效果比Trizol法好;将STE法提取的总RNA进行反转录后合成双链cDNA,进行预扩增,电泳显示呈弥散状;再进行选择性扩增,有相同或相异的条带。进一步表明STE法提取的总RNA质量较高,可以满足后续分子生物学研究的要求。

青木香发酵后总马兜铃酸和马兜铃酸Ⅰ的含量测定

以灵芝、槐耳等20个真菌为菌种、青木香药材为基质,运用固体发酵技术,在一定的条件下进行发酵试验,筛选出13个菌种能在青木香药材上生长良好,表明这些菌种能与药材形成较好的发酵组合形成发酵品。采用反相HPLC二元梯度洗脱法测定13种青木香发酵品中马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)的含量及紫外分光光度法(UV)测定这些发酵品中总马兜铃酸(TAA)含量。HPLC测定表明,13种青木香发酵品主要肾毒性成分马兜铃酸Ⅰ均有不同程度的下降,其中有6种发酵品的马兜铃酸Ⅰ的下降率在50%以上;UV测定发现,这些发酵品中总马兜铃酸含量均有所下降,下降率最高者为46.76%,最低者为7.61%;HPLC和UV综合(加权)分析表明,13种真菌(均以代号表示)对青木香肾毒性成分的降解能力由大至小依次排列如下:F-1>F-2>F-5>F-6>F-8>F-13>F-4>F-11>F-3>F-9>F-10>F-12>F-7。提示不同真菌发酵可在不同程度上降低中药青木香中肾毒性成分马兜铃酸Ⅰ和总马兜铃酸的含量。

8种食用菌水溶性多糖中β-葡聚糖及单糖组成的分析研究

采用水提醇沉法提取制备了8种不同食用菌子实体水溶性多糖，对8种水溶性多糖进行了多糖含量的测定，用酶法检测了其中葡聚糖和β-葡聚糖的含量，用离子色谱法分析了8种水溶性多糖中单糖组成。通过对8组数值进行比较分析，结果发现，香菇、鸡腿菇和姬松茸水溶性多糖以葡聚糖为主，占总多糖的比例较高，糖组成中以葡萄糖为主。猴头、桑黄、灵芝中届-葡聚糖占总葡聚糖的80％以上。桑黄、灵芝和灰树花中的单糖种类较多，糖组成复杂。

五种破壁方法提取贵阳腐霉Pythiumguiyangense总RNA效果的比较

为了探索提取贵阳腐霉Pythiumguiyangense菌株总RNA简便而有效的方法，我们分别采用石英沙研磨、超声波破碎、液氮研磨、液氮加石英沙研磨和溶菌酶消化5种方法破碎真菌细胞壁，再用市售RNAsimpletotal RNAkit试剂盒提取总RNA，最后通过对提取物进行琼脂糖凝胶电泳定性、紫外比色定量及PCR检测来评价各种破壁方法的优弊。结果显示液氮加石英沙研磨破壁法提取的真菌总RNA在5种方法中效率最高，OD260／OD280=2．093±0．264，RNA浓度为（0．134±0．021）μg／μL，RNA制备效率为（26．76±4．10）μg／g菌丝体，并且该方法操作简便，重复性最好，是制备P．guiyangense菌株总RNA的首选破壁方法。

全封闭一次性小培养基的研制及其在丝状真菌小培养中的应用

目的研制一种安全实用的一次性真菌小培养基。方法参照钢圈小培养法原理。底板选用透明度高的PVC为原材料,同常规使用的载玻片大小(25.2 mm×75.9 mm×1.05 mm),板面两端磨砂设计;圆形培养皿直径19.4 mm,侧面高3.75mm,其上接种孔直径为2.4 mm,可随用户需求灌注PDA琼脂等培养基,加孔塞封闭;上封盖片采用钢化玻璃制成。一次性真菌小培养基用培养湿盒进行保存,两端水槽内加海绵条,加盖密封盖。分别观察临床丝状真菌在该全封闭一次性小培养基中的生长状况、镜下形态及染色效果以及培养基的保存效果。结果该全封闭一次性小培养基实际应用效果良好,真菌生长状况可视、色素明显,镜下可观察到真菌原生态生长形态,可直接进行染料灌注染色,且效果良好。培养基包装后于4℃保存3个月后外观不变,量未见减少。结论成功研制一种操作简单、透明度高、密封效果好、培养性能可靠、生物安全性高的全封闭一次性小培养基。可随时在镜下观察生长状况、适用于油镜下直接观察、可直接进行棉蓝染色,临床试用效果良好,适用于各级实验室的真菌形态学检查。

12种野生食用菌中总糖含量分析

采用苯酚-硫酸法,研究了12种野生食用菌(马勃、绣球菌、大红菇、珊瑚菌、鸡油菌、黑脉羊肚菌、干巴菌、青头菌、红汁乳菇、桃红牛肝菌、松茸、黑牛肝)中的总糖含量。通过测定得出,总糖含量最高的是马勃(3.469%),最低的是黑牛肝(0.719%)。各种食用菌的总糖含量高低顺序是马勃>大红菇>干巴菌>松茸>绣球菌>红汁乳菇>青头菌>珊瑚菌>黑脉羊肚菌>桃红牛肝菌>鸡油菌>黑牛肝。

N95-光触媒抗菌口罩在医院应用的微生物学评价

目的了解经抗菌处理的N95口罩,是否可以降低使用时的病原微生物数量。方法实验室检测光触媒口罩表面材质的抗菌性能后,选择呼吸科病房医护人员分别配戴普通N95口罩或N95-光触媒抗菌口罩各3 d,检测口罩内层、外表面的细菌总数和真菌总数。结果N95-光触媒抗菌口罩表面无纺布对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有较好的抗菌效果;N95-光触媒抗菌口罩外表面的细菌总数和真菌总数均明显少于普通N95口罩(P=0.031,<0.05),差异具有统计学意义。结论研究提示,医疗系统应用N95-光触媒抗菌口罩,能够减少沾染口罩的微生物数量。