乌骨藤总苷抑制肝癌细胞增殖和AFP分泌

目的研究乌骨藤总苷对肝癌细胞增殖的作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT比色法)或移植瘤小鼠模型,观察不同浓度乌骨藤总苷对人肝癌Bel-7404、HepG2细胞和小鼠肝癌Hepl-6细胞生长的影响;研究乌骨藤总苷抑制HepG2细胞生长与调控甲胎蛋白AFP分泌的关系。结果乌骨藤总苷对人肝癌Bel-7404、HepG2细胞和小鼠肝癌Hepl-6细胞生长有显著的抑制作用,能显著降低AFP的分泌。结论乌骨藤总苷抑制肝癌细胞增殖其机制可能与抑制AFP分泌有关。

乌骨藤总苷对SGC-7901、S_(180)、P_(388)肿瘤细胞的抑制作用研究

目的研究乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901、肉瘤S180、淋巴白血病细胞P388的抑制作用。方法采用MTT比色法观察乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的影响;采用瘤体移植法将BALB/c裸鼠接种人胃癌细胞SGC-7901,通过计算肿瘤抑制率评价乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901体内肿瘤生长抑制作用;采用腋窝皮下接种将昆明小鼠接种肉瘤S180,通过计算抑瘤率评价乌骨藤总苷对肉瘤S180体内肿瘤生长抑制作用;DBA/2小鼠腹腔接种淋巴白血病细胞P388,通过计算生命延长率评价乌骨藤总苷对淋巴白血病细胞P388体内生长抑制作用。结果乌骨藤总苷对人胃癌细胞SGC-7901有显著的体外抑制作用,并能显著抑制小鼠人胃癌细胞SGC-7901、小鼠移植S180、小鼠移植P388肿瘤生长。结论乌骨藤总苷具有一定抗癌活性,有望开发成抗癌的中药有效部位新药。

乌骨藤C_(21)甾体苷对唾液腺腺样囊性癌荷瘤小鼠的抑制作用及机制研究

目的探讨乌骨藤C_(21)甾体苷对唾液腺腺样囊性癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及机制。方法建立SACC-83细胞和SACC-LM细胞荷瘤模型鼠,给药组C_(21)甾体苷(10mg·kg-1·d-1)连续注射4周,模型组注射等量生理盐水,30天后取材。称瘤重,计算抑瘤率,各组裸鼠肿瘤、癌旁组织和肺组织HE染色观察病理改变,Western blot和qPCR分别检测C_(21)甾体苷对各组瘤体组织caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白和mRNA表达影响。结果 C_(21)甾体苷给药4周后,SACC-83 C_(21)甾体苷组的肿瘤体积与SACC-83模型组相比明显减小[(232.6±32.8)mm^3比(317.7±58.6)mm^3,P<0.05],抑瘤率为26.8%;SACC-LM C_(21)甾体苷组的肿瘤体积与SACC-LM模型组相比明显减小[(296.5±38.8)mm^3比(394.1±28.9)mm^3,P<0.05],抑瘤率为24.8%。病理学结果显示,C_(21)甾体苷药物治疗后能抑制肿瘤的增殖和转移。Western blot结果显示,对于Bcl-2的蛋白水平,SACC-83 C_(21)甾体苷组和SACC-LM C_(21)甾体苷组相较于各自的模型组均显著下调且差异显著[(0.563±0.072)比(1.000±0.069),P<0.01;(0.664±0.061)比(1.155±0.071),P<0.01];对于Bax和caspases-3的蛋白水平,SACC-83 C_(21)甾体苷组和SACC-LM C_(21)甾体苷组相较于各自的模型组均显著上调且差异显著[Bax:(1.969±0.181)比(1.000±0.072),P<0.01;(1.521±0.120)比(0.844±0.062),P <0.01;caspases-3:(3.028±0.256)比(1.000±0.093),P<0.01;(1.934±0.188)比(0.890±0.036),P<0.01]。qPCR结果同样表明C_(21)甾体苷治疗后能显著抑制Bcl-2 mRNA表达水平[(0.563±0.014)比(1.002±0.072),P<0.01;(0.649±0.065)比(1.172±0.133),P<0.01],上调Bax和caspases-3的mRNA表达水平[Bax:(1.660±0.227)比(1.005±0.122),P <0.01;(1.313±0.115)比(0.817±0.071),P <0.01;caspases-3:(2.604±0.174)比(1.001±0.0403),P<0.01;(1.746±0.080)比(0.886±0.087),P<0.01]。结论乌骨藤C_(21)甾体苷可抑制唾液腺腺样囊性癌在裸鼠体内的增殖,其机制可能是通过促进细胞凋亡而发挥对肿瘤的抑制作用。

乌骨藤总苷对肺腺癌NCI-H1299细胞糖酵解、凋亡和自噬作用的影响

目的探讨乌骨藤总苷通过Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)对肺腺癌细胞糖酵解、凋亡和自噬的影响。方法体外培养NCI-H1299细胞,分为对照组、乌骨藤总苷低剂量组、乌骨藤总苷高剂量组、乌骨藤总苷+Vector组和乌骨藤总苷+KRAS组。对照组用正常培养基作用于细胞,乌骨藤低剂量组用终浓度为5 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤高剂量组用终浓度为20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤总苷+Vector组先在细胞内转染入阴性对照载体,再用20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤总苷+KRAS组转染入KRAS过表达载体后,用20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞。用qRT-PCR法检测各组细胞中KRAS mRNA的表达情况,用Western blot法检测各组细胞中KRAS蛋白的表达情况,用MTT法检测细胞增殖抑制率,用试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和乳酸含量,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot法检测各组细胞中凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。结果乌骨藤总苷低剂量组和乌骨藤总苷高剂量组KRAS表达水平、葡萄糖消耗量、乳酸含量、Bcl-2蛋白水平低于对照组,细胞增殖抑制率和凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin-1蛋白和Bax蛋白水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷+KRAS组细胞中KRAS水平、葡萄糖消耗量和乳酸含量、Bcl-2蛋白表达水平均高于乌骨藤总苷+Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷+KRAS组细胞增殖抑制、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Bax蛋白和beclin-1蛋白水平低于乌骨藤总苷+Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷高剂量组和乌骨藤总苷+Vector的各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乌骨藤总苷可以通过抑制KRAS的表达,抑制肺腺癌细胞的糖酵解过程,促进肺腺癌细胞凋亡和自噬,从而对肺腺癌细胞起到抑制作用。