The Mechanism of Cornus officinalis Total Glycosides and Cornus Polysaccharide on Myocardial Protection in Rats with Acute Myocardial Infarction

Objective: To investigate effects of Cornus officinalis Total Glycosides (COTG) and Cornus Polysaccharide (CP) on myocardial protection and on expression of mitochondria biogenesis related gene of acute myocardial infarction (AMI) rats, Materials and Methods: Ninety-six SD rats of SPF level were randomly divided into 5 groups: sham operation group, model group, preventive treatment group, COTG treatment group, CP treatment group, and there were 12 cases in each one. By legating the left anterior descending branch of coronary artery method, acute myocardial infarction model was established. The rat of sham operation group and model group was intragastric administered with physiological saline;other groups were given with corresponding drugs. The cardiac function, the myocardial infarct area, the expression of mitochondrial biogenesis genes such as PGC-1α, PGC-1β, NRF-1mRNA and GSK-3β mRNA, GSK-3β Protein Expression were analyzed. Results: The results revealed that compared with model group, myocardial infarction size, LVDs, LVDd, LVESV, LVEDP, and -dp/dt decreased;LVSP increased in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05);LVEDV increased in preventive treatment group (p < 0.05), PGC 1 alpha, and PGC 1 beta;the NRF-1 mRNA expression increased in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05). Compared with CP and COTG treatment group, PGClpha, beta PGC 1, the NRF-1 mRNA expression increased in preventive treatment group (p < 0.05). Compared with the sham operation group, GSK-3 beta mRNA and protein expression increased in model group, preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05). Compared with model group, GSK-3 beta mRNA expression reduced in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p Cornus officinalis total glycosides and Cornus polysaccharides can effectively protect myocardial mitochondria of acute myocardial infarction rats by activating GSK-3β signaling pathways, and reduce the myocardial infarct size, which has great significance for improving cardiac function.

Effects of Cornus Officinal Is Total Glycoside on Cardiomyocyte Apoptosis and Calcium Overload after Hypoxia/Reoxygenation Injury in Rats

Objective: To investigate the mechanism of Cornus officinalis Total Glycosides (COTG) on myocardial protection, by studying effects of COTG on cardiomyocyte apoptosis induced by hypoxia/reoxygenation and calcium concentration in rats. Methods: The myocardial cells of born 1-3d SD rats were isolated by enzyme digestion, cultured for 3 days. Cells were divided into five groups: Control group, H/R group, Cornus officinalis Total Glycosides low-dose group (LDG), Cornus officinalis Total Glycosides middle-dose group (MDG) and Cornus officinalis Total Glycosides high-dose group (HDG). Three drug groups were pretreated with different doses of Cornus officinalis Total Glycosides before hypoxia/reoxygenation treatment. The apoptotic rate was determined by flow cytometry assay, the intracellular free calcium concentration was examined by flow cytometry, and the ultrastructure of myocardial cells was observed under transmission electron microscope. Results: The results revealed that Cornus officinalis Total Glycosides pretreatment decreased apoptosis rate, but the effect of lower dosage is not significant. Furthermore, Cornus officinalis Total Glycosides can attenuate mitochondrial calcium overload, improve mitochondrial morphology and inhibit cardiomyocyte apoptosis caused by H/R. Conclusion: Cornus officinalis Total Glycosides pretreatment can inhibit cardiomyocyte apoptosis and calcium overload during H/R injury. However, the underlying mechanisms require us to further study.

山茱萸总苷抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞系HK-2凋亡和氧化损伤

目的探究山茱萸总苷(COG)调节E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对高糖诱导的人肾小管上皮细胞系HK-2的凋亡和氧化损伤的影响。方法将人肾小管上皮细胞系HK-2分为对照组(control,5.5 mmol/L)、模型组(HG,30 mmol/L)、山茱萸总苷低、中和高剂量组(L-COG、M-COG、H-COG),加入Nrf2通路抑制剂后,HK-2细胞分为H-COG组、ML385组。CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的胱天蛋白酶(cleaved-caspase3)、Nrf2/HO-1通路蛋白表达,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)含量,ELISA法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果与对照组比较,模型组细胞活性、Bcl-2蛋白表达、GSH-Px及SOD活性明显降低,凋亡率、Bax、Nrf2、HO-1及cleaved-caspase3蛋白表达、ROS、IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.05);与模型组比较,L-COG、M-COG、H-COG组细胞活性、Bcl-2蛋白表达、GSH-Px、SOD活性明显增加,凋亡率、Bax、Nrf2、HO-1及cleaved-caspase3蛋白表达、ROS、IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.05)。与H-COG组比较,ML385组细胞活性、Bcl-2蛋白表达、GSH-Px活性、SOD活性明显增加,凋亡率、Bax及cleaved-caspase3蛋白表达、ROS、IL-6、TNF-α含量明显降低(P<0.05)。结论山茱萸总苷可能是通过抑制Nrf2/HO-1通路减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激和炎性反应,进而减轻细胞凋亡。

RP-HPLC法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量

目的建立反相高效液相色谱法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量的方法，为完善山茱萸环烯醚萜总苷的质量评价提供依据。方法色谱柱：Lichrosphere C18柱（4．6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-水梯度洗脱（0～12min，乙腈比例由10％增加到55％）；流速1.0mL／min；柱温30℃；检测波长240nm。结果马钱苷和莫诺苷分别在o．088-0．528μg（r=0.9998）和0.088-0．352μg（r=0．9995）之间范围内线性关系良好；平均回收率（n=6）分别为98．7％（RSD=1．3％）、98．6％（RSD=0.8％）。结论所建立的方法简便、准确、分离效果好、重复性好。可以用干控制山菜萤环烯醚萜总菩的席号．

山茱萸总苷抗类风湿关节炎免疫作用机理的初步研究

目的 :探讨山茱萸总苷抗Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的类风湿关节炎的免疫作用机理。方法 :建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎 (CIA)大鼠模型 ,对山茱萸总苷对大鼠在免疫诱导期、关节炎急性期、慢性缓解期血清中CⅡ抗体的水平、腹股沟引流淋巴结细胞IFN γ的自发分泌和刺激性分泌以及淋巴结细胞的特异增殖能力的影响进行动态观察。结果 :山茱萸总苷对类风湿关节炎有明显的防治作用 ,特异性抑制免疫大鼠抗CⅡ抗体的产生、腹股沟淋巴结Th1型细胞因子IFN γ的分泌及细胞增殖。结论 :山茱萸总苷抗类风湿关节炎的免疫作用机理之一是抑制CⅡ特异性体液免疫和Th1型细胞免疫。

山茱萸总苷对刀豆蛋白A诱导免疫性肝损伤的保护作用

目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将60只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组,每组10只;正常组和模型组以0.2 mL/10 g生理盐水灌胃,阳性对照组给予联苯双酯150 mg/kg灌胃,TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组给予TGCO溶液460、230、115 mg/kg灌胃,1次/d,连续14 d。末次给药后2 h,正常组尾静脉注射生理盐水,其余各组尾静脉注射Con A制备小鼠免疫性肝损伤模型。8 h后称重,处死小鼠,计算各组小鼠肝、脾系数并取肝组织进行HE染色观察病理学变化;检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OTC)含量。结果:与模型组比较,各浓度TGCO组小鼠肝组织的病变程度较轻,血清ALT、AST水平及肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-6、OTC含量均降低,肝组织中SOD水平升高(P<0.05)。结论:TGCO对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低转氨酶,提高抗氧化能力和抑制TNF-α、IFN-r、IL-1、IL-6生成有关。

缬草总黄酮超声辅助双水相提取工艺优化及抗氧化活性研究

以缬草为原料,缬草总黄酮得率为指标,采用超声辅助乙醇-硫酸铵双水相体系对缬草总黄酮提取工艺进行单因素及Box-Behnken响应曲面试验优化,并与回流提取所得的总黄酮的还原力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力进行抗氧化能力比较。结果表明:缬草总黄酮超声辅助双水相提取的最佳工艺条件为超声时间35 min、硫酸铵用量0.20g/mL、超声温度51℃、液料比为241(mL/g),在该条件下总黄酮提取率为(6.37±0.08)%。两种提取方法所得的缬草总黄酮对DPPH自由基、羟自由基有较强的清除能力和较高的还原力,且超声辅助双水相提取的缬草总黄酮抗氧化能力显著高于一般回流提取。

星点设计-效应面法优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺

目的:优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺,并对其进行表征。方法:采用逆相蒸发法制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体。采用高效液相色谱法测定山茱萸总环烯醚萜苷脂质体中马钱苷和莫诺苷含量。以总皂苷(以马钱苷和莫诺苷总和计)包封率为指标,通过单因素试验筛选制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的主要工艺因素后,采用星点设计-效应面法优化药物与磷脂的质量比(药脂比)、胆固醇与磷脂的质量比(胆脂比)和水合介质pH值。利用达尔文激光粒径测定仪测定最优处方下所制脂质体的Zeta电位和粒径,并在透射电镜下观察其形态。结果:确定最优处方的药脂比为0.026、胆脂比为0.107、水合介质pH为5.78。所制3批脂质体的平均包封率为11.63%(n=3),与预测值11.48%的相对误差为1.29%;平均粒径为(80.87±0.27)nm,Zeta电位为(-13.60±5.32)mV,脂质体外观呈球形或类球形。结论:优化后山茱萸总环烯醚萜苷脂质体制备工艺简单,所制脂质体粒径较小。

山茱萸中马钱素的提取工艺研究

通过溶剂法和超声波法对山茱萸中马钱素的提取工艺进行了研究,以提取温度、提取时间、95%乙醇用量等为因素,选用L16(43×26)和L9(34)正交表进行试验。结果表明,超声波的提取效率高于溶剂提取,优化工艺条件是:提取温度为75℃,提取时间为240min,95%乙醇用量为50ml。在此条件下,马钱素提取效率较高,可达14.05mg/g。

山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响

目的:观察山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响,探讨其抗心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将原代培养3 d的心肌细胞采用液体石蜡封闭法建立缺氧/复氧模型,分为正常组、缺氧/复氧模型组(缺氧2 h/复氧1 h)及药物干预组(缺氧/复氧前24 h及缺氧同时给予山茱萸总苷预处理),药物浓度分别为0.1、1.0、10 g/L.。电镜下观察各组心肌细胞线粒体的形态。结果:与正常对照组比较,模型组心肌细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴溶解融合或有电子致密颗粒沉积,给予山茱萸总苷干预后,中、高剂量组心肌细胞超微结构损伤程度明显改善,肌纤维排列基本整齐规则、线粒体完整、嵴清晰及未见空泡形成,低剂量组与模型组差异不明显。结论:山茱萸总苷可以抑制缺氧/复氧损伤对乳鼠心肌细胞超微结构的破坏,保护线粒体,可能是通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路去实现对心肌细胞的保护作用。

超声波法提取山茱萸中熊果酸的工艺研究

采用L9(34)正交试验,考察超声功率(A)、时间(B)、溶媒用量(C)和频率(D)四个因素对熊果酸提取的影响.得出超声波法提取山茱萸中熊果酸的最佳工艺参数:用15倍量无水乙醇浸泡24小时在输入功率40%下超声10min.

超声波和溶剂法提取山茱萸中总皂甙的工艺研究

本文通过溶剂法和超声法对山茱萸中总皂甙的提取工艺进行了研究,以提取温度、提取时间、95%乙醇用量等为因素,选用L16(43×26)和L9(34)正交表进行试验。结果表明,超声波的提取效率高于溶剂提取,大大缩短提取时间,优化工艺条件是:提取温度为85℃,提取时间为120min,95%乙醇用量为50ml。在此条件下,总皂甙的提取效率较高,其水解产物人参二醇含量可达5.16mg/g。

不同产地山茱萸总皂苷及总环烯醚萜苷的地理变异分析

目的:对不同产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷进行含量测定,研究不同产地地理因子对其含量影响及之间的相关性,为山茱萸优良产区筛选及质量控制提供相关的理论依据。方法:采用分光光度法和高效液相色谱法对15个产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷含量进行测定,并利用SPSS 19.0软件分别对其含量与产地地理因子进行相关性分析和聚类分析。结果:15个产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷含量变化幅度分别为13.55 mg/g~26.65 mg/g、23.05 mg/g~32.68 mg/g,不同产地之间的活性成分含量差异显著,其中河南西峡样品中总皂苷和浙江淳安样品中总环烯醚萜苷含量高;相关性分析发现总皂苷的含量和产地与海拔呈现极显著的正相关,和经度呈现显著的负相关,环烯醚萜苷含量与环境因子的相关性不显著;聚类分析结果显示,总皂苷与总环烯醚萜苷在东西部产地含量存在明显差异,表现为西高东低的趋势。结论:不同产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷含量不同,存在明显的区域特征、与海拔和经纬度呈现相关性,本研究为山茱萸选择优良的种植产地提供理论支持。

山茱萸分离提取物对脾淋巴细胞增殖的影响

观察山茱萸提取物总甙、第一部分多酚、第二部分多酚等对脾淋巴细胞增殖的影响 ,寻找山茱萸总甙中抑制免疫的有效成分 ,并初步探讨山茱萸总甙抗类风湿关节炎的作用机理。采用 3H TdR参入法测定各种提取物对鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果提示各部分对鼠脾淋巴细胞增殖皆有抑制作用 ,第二部分多酚作用最强。山茱萸总甙的抗类风湿关节炎作用可能与它抑制抗原特异刺激的T淋巴细胞增殖有关。

山茱萸总甙对正常小鼠T淋巴细胞免疫功能影响的实验研究

研究了从山茱萸中提取的山茱萸总甙对正常小鼠T淋巴细胞及其亚群和产生IL 2的影响 ,以期探讨山茱萸总甙的免疫抑制机理。结果表明 :山茱萸总甙不同剂量均可抑制T淋巴细胞增殖(P <0 0 1)、T淋巴细胞膜表面CD3的表达 (P <0 0 1)和抑制T淋巴细胞膜表面CD4、CD8的表达(P <0 0 5或P <0 0 1) ,中大剂量还可以提高CD4 /CD8的比值 ,说明山茱萸总甙抑制CD8的作用比抑制CD4的作用更明显。不同剂量的山茱萸总甙还可以抑制T淋巴细胞产生IL 2 (P <0 0 5或P <0 0 1)。抑制IL 2的产生可能是山茱萸总甙抑制机体免疫功能的主要机理之一。

山茱萸总苷对关节炎大鼠原代滑膜细胞培养上清趋化能力的影响

探讨山茱萸总苷抗类风湿关节炎的作用机理。采用改良的Boyden小室前导法检测CⅡ诱导的关节炎大鼠山茱萸总苷治疗组和模型组的原代滑膜细胞培养上清对关节浸润炎性细胞如中性粒细胞、骨髓巨噬细胞和淋巴细胞趋化能力,结果以实验组穿膜细胞数减去对照组穿膜细胞数表示。结果发现:山茱萸总苷治疗组的原代滑膜细胞培养上清对上述三种炎性细胞的趋化能力（穿膜细胞数）均显著低于模型组（P<0.01）。说明山茱萸总苷抑制关节滑膜细胞对炎性细胞的趋化,减少炎性细胞向关节滑膜的浸润是其抗关节炎作用的机理之一。

山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死大鼠心肌保护作用的影响

目的观察山茱萸总苷及山茱萸多糖对急性心肌梗死(acute coronary infarction,AMI)心肌线粒体保护作用及对糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支制备AMI大鼠模型,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、山茱萸总苷预防给药组(总苷预防组)、山茱萸多糖治疗组(多糖治疗组)和山茱萸总苷治疗组(总苷治疗组),每组12只,除正常组和模型组给予生理盐水灌胃外,其余各给药组分别灌胃给予对应的药物治疗。进行超声心动图及血流动力学检测评价心功能;Masson三色染色法进行心肌梗死面积测定;荧光实时定量PCR法检测心肌组织线粒体发生相关基因过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(αsubunit of peroxisome proliferators-activated receptor-γcoactivator-1,PGC-1α)、PGC-1β、心肌细胞核呼吸因子(nuclear respiratory factor-1,NRF-1)和GSK-3βmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组心肌梗死面积增大,心功能下降,PGC-1α、PGC-1β和NRF-1 mRNA表达降低,GSK-3βm RNA表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,总苷预防组、总苷治疗组和多糖治疗组心肌梗死面积缩小,心功能改善,NRF-1 mRNA表达升高,总苷预防组和多糖治疗组PGC-1α和PGC-1βmRNA表达升高,多糖治疗组GSK-3βmRNA表达降低(均P<0.05)。与总苷预防组比较,总苷治疗组短轴缩短率(fractional shortening,FS)、主动脉收缩压(aortic systolic blood pressure,SBP)升高,多糖治疗组射血分数(ejection fraction,EF)降低,总苷治疗组和多糖治疗组PGC-1α、PGC-1β及NRF-1 mRNA表达下降,多糖治疗组GSK-3βmRNA表达下降(均P<0.05)。与总苷治疗组比较,多糖治疗组FS、EF、左室收缩末压(left ventricular end systolic pressure,LVESP)、SBP、GSK-3βmRNA降低(P<0.05)。结论山茱萸总苷及山茱萸多糖具有改善AMI大鼠心功能、缩小心肌梗死面积、促进心肌线粒体生物合成的作用;山茱萸总苷及多糖对AMI大鼠心肌细胞线粒体保护作用可能是通过GSK-3β信号通路实现。

山茱萸总苷分散片的处方工艺研究

目的:研究山茱萸总苷分散片的处方工艺。方法:以分散均匀性和硬度为综合指标,筛选山茱萸总苷分散片最佳的制备工艺,并测定莫诺苷和马钱苷的溶出度。结果:最佳制备工艺为浸膏:淀粉:微晶纤维素=1:1:0.4,加4%交联聚维酮和0.2%硬脂酸镁;制得的分散片的分散时间<3min,硬度为40～60N;莫诺苷和马钱苷的的平均溶出度在45min时分别为111.65%和101.81%。结论:该处方工艺简单、经济,所制成的分散片崩解迅速、药物溶出快。

山茱萸提取、纯化工艺考察

目的:优选山茱萸的提取工艺及大孔树脂纯化工艺。方法:以莫诺苷含量为指标,选择乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数为考察因素,采用单因素试验和正交试验优选提取工艺。选取上样量、洗脱速度、洗脱剂浓度及用量为考察因素,采用单因素试验考察HPD-300型大孔吸附树脂纯化工艺。结果:山茱萸最佳提取工艺为加8倍量50%乙醇提取3次,每次3 h。纯化工艺为3 BV 30%乙醇以1.5 BV·h-1洗脱,洗脱率达94.9%。结论:优选的提取工艺稳定可行;HPD-300型大孔吸附树脂可较好地纯化山茱萸总苷。

山茱萸总苷对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的初步观察

目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的影响。方法:Wistar大鼠24只随机分为3组:正常对照组、EAE组和TGCO组。采用动物行为学、常规苏木精-伊红染色和LFB髓鞘染色观察大鼠的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化。结果:EAE组7/8只大鼠出现典型的EAE行为学改变、CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失。TGCO组有3/8只大鼠出现EAE行为学改变,评分最高为2分,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润和髓鞘脱失明显减轻。对照组未见动物行为学和CNS病理学改变。结论:TGCO能减轻EAE大鼠的临床症状、延长潜伏期和降低发病率。