Effect of total isoflavones from pueraria lobata on the expressions of preproenkephalin, prodynorphin and D2 dopamine receptor mRNA in PC12 cells induced by MPP^+

Objective： The aim of the study was to observe the effect of total isoflavones from pueraria Iobata （TIP） on D2 dopamine receptor mRNA, preproenkephalin mRNA and prodynorphin mRNA expressions in Parkinson＇s disease （PD） model cells induced by 1-methyl-4-phenylpyridinium ion （MPP^＋）. Methods： TIP was dissolved in 0.1 M NaOH and added to the culture medium at a final concentrations of 50 mg/L, 100 mg/L and 200 mg/L. Some cells （control） were exposed to 0.001 M NaOH. TIP was added to PC12 cells 30 min prior to the administration of MPP^＋. TIP and MPP^＋ remained in the culture medium for 96 h. D2 dopamine receptor mRNA, preproenkephalin mRNA and prodynorphin mRNA expressions were assayed by real-time quantitative reverse transcription-PCR. Results： The D2 dopamine receptor mRNA and preproenkephalin mRNA expressions were up-regulated in MPP^＋ group compared with the control group, and prodynorphin mRNA expression was down-regulated in that. The D2 dopamine receptor mRNA expression being down-regulated and prodynorphin mRNA expression being up-regulated in TIP group compared with the MPP^＋ group. And there was no effect of TIP on preproenkephalin gene expression in PC12 cells induced by MPP^＋. Conclusion： The results suggest that TIP down-regulates the D2 dopamine receptor mRNA expression, up-regulates prodynorphin mRNA expression and not affects preproenkephalin gene expression in PC12 cells induced by MPP^＋.

葛根的化学成分研究

系统地回顾了近30年来葛根化学成分研究概况,着重介绍了国内外对葛根中异黄酮、三萜及葛酚苷类等具显著生理活性的化学成分研究进展。

蒸汽爆破预处理对粉葛总黄酮及抗氧化性的影响

实验选取爆破压力1.0、2.0 MPa,维持压力时间30、40、60、80 s,对粉葛进行预处理。利用紫外分光光度法表征爆破前后总黄酮的变化,旨在探讨蒸汽爆破预处理对粉葛总黄酮及抗氧化性的影响。抗氧化活性利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)清除率进行评价。结果表明:经过蒸汽爆破预处理后,粉葛的总黄酮提取量、甲醇提取物得率和抗氧化性得到显著提高。在最优处理条件下,总黄酮(以葛根素计)提取量达到5.43 mg/g,是未经预处理粉葛提取量的2.32倍;甲醇提取物得率为16.92%;抗氧化活性得到显著增加,DPPH清除活性的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)由30.65 g/L降低至10.10 g/L。将蒸汽爆破预处理应用于粉葛活性物质的提取,可实现提取量和抗氧化能力的有效提高。

葛根总黄酮提取新工艺的研究

采用微波辅助浸取新工艺从葛根中提取总黄酮.通过单因素和正交实验相结合的方法,研究了新工艺的实验条件.结果表明:在常压下,当微波功率为700 W,葛根粒度为80目,预泡1 h,固液比为1:25,乙醇溶剂浓度为60%,微波辐射40 s,间歇辐射3次,可得到最佳提取率83.92%,比传统回流浸取和超声浸取葛根总黄酮工艺具有快速、节能和浸取率高等优点.

葛根异黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响

通过对3月龄Wister大鼠,手术切除双侧卵巢后7天,每天灌胃TIP40mg/kg和10mg/kg,并设去卵巢组(OVX)、假手术组(Sham)和尼尔雌醇阳性对照组(OVX-E2),在给药3个月时,测定大鼠股骨骨矿密度(BMD)、骨钙及血清钙水平等,研究葛根异黄酮(TIP)对由雌激素缺乏引起的骨质疏松症的防治作用。结果TIP40mg/kg的BMD比去卵巢组显著提高了18.1%;使胫骨和血清钙含量显著增加;使去卵巢大鼠的脾脏重量系数和胸腺重量系数明显恢复;并可明显控制大鼠的体重。葛根异黄酮可能具有雌激素样活性,并有改善骨质疏松症的生物学活性。

葛根异黄酮对MPP＋诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根异黄酮(Total isoflavones from puerarialobata,TIP)对甲基-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyr-idinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法用不同浓度TIP预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP+诱导多巴胺能神经损伤模型,用MTT法检测PC12细胞活力,采用实时定量RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平。结果MPP+处理48~96 h,细胞活力较空白对照组降低,阴性对照组Bax 2-ΔΔCt升高,而Bcl-22-ΔΔCt降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,葛根异黄酮组Bax 2-ΔΔCt降低,而Bcl-2 2-ΔΔCt升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论葛根异黄酮对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,下调Bax和上调Bcl-2 mRNA表达可能是其作用的机制之一。

蔗糖和光对三裂叶野葛毛状根生长及次生物质产生的影响

研究了蔗糖浓度和光对固体培养的三裂叶野葛毛状根生长及其总异黄酮和葛根素产生的影响。结果表明:在供试的分别添加1%、3%、5%、7%和9%蔗糖的MS固体培养基中,3%蔗糖能促进三裂叶野葛毛状根的生长及其异黄酮类化合物和葛根素的积累;培养20d后,其生物量达到0.48g(DW,干重)瓶,总异黄酮和葛根素含量分别为25.44mgg(DW)和11.64mgg(DW)。与添加3%蔗糖的MS培养基培养的三裂叶野葛毛状根相比,含5%蔗糖的培养基培养的毛状根干重增殖倍数提高了7.0%,而含1%、7%和9%蔗糖的培养基培养的毛状根干重增殖倍数分别下降62.4%、42.8%和65.3%;其总异黄酮含量分别降低57.4%、13%和33.4%,葛根素含量分别下降47.9%、15.8%和35.1%,但其毛状根培养物的可溶性糖含量则分别增加了0.52、1.45和1.54倍。暗培养30d的毛状根的生物量达到0.83g(DW)瓶,分别比蓝光和白光培养的毛状根提高37.1%和23.3%。在蓝光和白光下培养的部分毛状根的表面呈淡绿色;但白光处理的毛状根中总异黄酮含量比蓝光和暗培养处理的分别提高了14.7%和19.2%;蓝光抑制毛状根中葛根素含量的积累,白光和暗培养的毛状根培养物中的葛根素含量分别是蓝光处理的1.61倍和1.52倍。

葛根总黄酮的分离与纯化

通过静态和动态吸附与脱附的比较,从5种国产大孔树脂中优选了AB-8型大孔树脂对微波辅助萃取的葛根总黄酮粗液进一步分离纯化研究。考察了进液浓度、进液量、进液流速和pH值对吸附的影响,确定了它们的适宜工艺条件分别为6.693 1 mg.mL-1、3 BV、1.0 mL.min-1和pH7。考察了洗脱液乙醇浓度、洗脱液流速和洗脱液量对脱附的影响,确定了它们的适宜工艺条件分别为70%、1.0 mL.min-1和5 BV。在适宜工艺条件下分离纯化后的葛根总黄酮产品纯度可达70%。建立了Langmuir等温吸附方程,该模型与实验值吻合较好。实验还进行了脱附葛根素的研究,结果表明,用浓度为10%的乙醇水溶液脱附的葛根素浓度可高达40%。

微波辅助加压浸取枳椇中总黄酮

采用单因素实验和正交实验进行了微波辅助加压浸取枳椇中总黄酮的研究。获得的最优工艺条件为:微波功率700 W、乙醇水溶液质量分数50%、压强131.733 kPa和液固比10 mL/g,在此条件下,总黄酮提取率高达97.28%,比常压浸取装置的提取率提高了22%。自行设计和制造的微波辅助加压浸取装置具有结构简单、操作方便、制造成本低、节约能耗、加热速率快和提取率高等优点。

从葛根中提取和纯化药用成分——总黄酮

采用微波辅助萃取和AB-8型大孔树脂从葛根中提取和纯化总黄酮。分别考察了乙醇浓度、固液比、微波功率和辐射时间对提取率的影响;吸附柱类型、进液浓度、进液量、进液流速和pH值对吸附的影响和洗脱剂乙醇浓度、洗脱剂流速和洗脱剂体积量对脱附的影响,并分别确定了它们适宜的工艺条件。在适宜工艺条件下,微波辅萃总黄酮提取率为83.94%,纯化后产品总黄酮纯度达70%。建立了AB-8型大孔树脂吸附葛根总黄酮的Freundlich等温吸附方程,模型与实验值基本相符。

微波辅助萃取葛根总异黄酮的工艺研究

[目的]为葛根总异黄酮的工业化萃取提供理论依据。[方法]研究了微波功率、乙醇浓度、微波处理时间、微波间歇处理次数等因素对葛根总异黄酮萃取的影响,比较了它们对总异黄酮浸出率的影响。[结果]微波功率、乙醇浓度、微波处理时间对总异黄酮的萃取均具有显著影响,且影响顺序为：乙醇浓度〉微波功率〉微波处理时间,总异黄酮在质量浓度0.01-0.05 mg/ml范围内与吸光度线性关系良好;标准曲线的回归方程为A=10.980 0C-0.028 2,相关系数为0.999 7。微波处理样品中,乙醇用量分别为1001、25和150 ml时,浸出率升高不显著。[结论]微波功率750 W、乙醇浓度90%、微波处理时间50 s为最佳组合,浸出率高达95.17%,随着间歇处理次数的增多,浸出率逐渐增高。

葛叶总黄酮提取工艺的初步研究

采用分光光度法,三氯化铝作显色剂,测定不同提取工艺条件下葛叶总黄酮含量,并对乙醇浓度、提取温度及用石油醚预提等条件进行了分析。结果表明:用石油醚预提、70％乙醇、80℃温度可以得到较高的提取率,在此条件下总黄酮的含量为4.05mg/g。

葛根中总异黄酮的微波辅助萃取研究

通过正交试验,对微波辅助萃取葛根总异黄酮的工艺条件进行了研究,结果表明:用90%的乙醇,葛根粒度为40目,固液比为1:15,预浸泡1～2h,微波辐射40s,葛根总黄酮的浸出率达96%以上,与传统的热浸提相比,不仅产率高,而且速度快、节能。

乙醇水溶液微波辅助浸取枳椇总黄酮

采用自行设计制造的萃取装置进行了乙醇水溶液常压微波辅助浸取枳椇总黄酮的单因素实验研究,获得的最适宜工艺条件为:微波功率700 W、辐射(时间)至溶液沸腾,辐射1次;乙醇的质量分数50%;固液比1:10;预泡时间1 h和颗粒尺寸60目,在此条件下,总黄酮提取率高达为80%左右。

超声波辅助提取葛花总异黄酮及体外抗氧化活性研究

以葛花为原料,总异黄酮得率为响应值,利用超声波辅助法,通过单因素和响应面法优化葛花总异黄酮提取工艺,并评价其体外抗氧化活性。结果显示,葛花总异黄酮超声波辅助提取的最佳条件为:超声时间40 min,超声功率260 W,乙醇浓度74%,超声温度76℃,固液比1∶16(g/mL),总异黄酮得率最高达到(12.35±0.37)mg/g。精制后的葛花总异黄酮对DPPH·、ABTS+·和O2^-·清除率可达到100%,同时具有一定的还原能力。葛花总异黄酮具有较强的体外抗氧化活性。

葛根异黄酮对MPP^+诱导的PC12细胞P53 mRNA表达的影响

目的观察葛根异黄酮对甲基-苯基-吡啶离子诱导的帕金森病细胞模型P53基因表达的影响。方法将葛根异黄酮溶解在培养基使终浓度为50mg·L-1、100mg·L-1和200mg·L-1。并设不加药物的阴性对照组。PC12细胞与葛根异黄酮共孵育30min后,加入含250μmol·L-1MPP+的DMEM培养基,继续孵育96h。采用实时定量RT-PCR法检测P53基因表达。结果与对照组比较,MPP+组P53 mRNA表达上调(P<0.05),各浓度的葛根异黄酮组P53 mRNA表达下调(P<0.05)。结论葛根异黄酮对甲基-苯基-吡啶离子诱导的帕金森病细胞模型P53 mRNA的表达具有下调作用。

AB-8型树脂分离纯化葛根总黄酮研究

采用AB-8型大孔树脂对从葛根中提取的总黄酮产物进行分离纯化研究。考察了各种因素对树脂吸附和洗脱效果的影响。通过实验，得到了吸附的最佳工艺条件为：葛根黄酮上样液浓度6．6931mg／mL，上样液量为3倍树脂柱体积，PH值为5-6，吸附流速为1．0mL／mira；洗脱工艺条件为：洗脱液（70％乙醇）量为5倍树脂柱体积，流量为1．0mL／min。分离纯化后的葛根总黄酮产品纯度可达70％。

葛根异黄酮联合维生素D对去势大鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的观察葛根异黄酮(TIP)与维生素D(VitD)联合应用对去势大鼠外周血淋巴细胞亚群的影响。方法将3月龄SD雌性大鼠64只,按体重随机分为8组:模型对照组(生理盐水)、高剂量TIP组(TIP 100 mg/kg)、中剂量TIP组(TIP 50 mg/kg)、低剂量TIP组(TIP 25 mg/kg)、VitD组(VitD 0.2μg/kg)、低剂量联合组(TIP25mg/kg+VitD 0.2μg/kg)、中剂量联合组(TIP50 mg/kg+VitD 0.2μg/kg)、高剂量联合组(TIP100 mg/kg+VitD0.2μg/kg),切除双侧卵巢建立去势模型,再行不同剂量的TIP及VitD灌胃3个月,流式细胞术测定外周血淋巴细胞亚群。结果除低剂量TIP组外,其它各组去势大鼠CD4+T细胞均高于对照组(P<0.05),CD8+T细胞均低于对照组(P<0.05),CD4+/CD8+比值均高于对照组(P<0.05),且呈明显的剂量效应关系。结论适宜剂量葛根异黄酮和维生素D均可增强去势大鼠细胞免疫功能。

Box-Behnken响应面法优化秦巴山区粉葛中总异黄酮的提取工艺

目的:优化秦巴山区粉葛总异黄酮的提取工艺。方法:采用超声波辅助乙醇提取法提取总异黄酮,用紫外分光光度计测定其含量,在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken响应面法对工艺进行优化。结果:超声波辅助乙醇提取粉葛中总异黄酮的最佳条件是乙醇浓度为41%、料液比1∶47、超声温度45℃,在该条件下总异黄酮的提取得率为0.68%。结论:响应面法优化秦巴山区粉葛中总异黄酮的提取工艺具有可行性,为粉葛的综合利用及产品的开发提供技术参考。

微波辅助萃取枳椇总黄酮研究

[目的]研究从枳椇中提取总黄酮。[方法]采用微波辅助萃取技术,应用自制的压力萃取器,通过单因素试验和响应面试验方法优化工艺参数。[结果]确定了最优工艺参数为微波功率840 W、乙醇水溶液浓度52%、萃取时间54 s、液固比9.4 ml/g、浸泡时间1 h和颗粒粒径2.5×10-4m,在此条件下,总黄酮萃取率为98.05%。建立了以萃取率为响应值,微波功率、乙醇水溶液浓度、萃取时间和液固比为影响因素的二次多项回归方程,该模型与试验结果十分吻合。[结论]建立的数学模型和优化的工艺参数可用来预测不同工艺条件下的总黄酮萃取率,为中试和工业化生产提供理论依据。