桑白皮多糖调控circDLGAP4/miR-320对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的作用

目的研究表明桑白皮多糖具有抗氧化作用,而其对心肌细胞氧化损伤的影响尚不清楚,文章旨在探讨桑白皮多糖对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的作用及分子机制。方法H9C2细胞缺氧培养6 h后再复氧6 h,作为缺氧/复氧(H/R)组,不做任何处理的细胞作为正常对照组,用0.1、0.2、0.4μg/mL的桑白皮多糖预处理H9C2细胞,而后进行缺氧/复氧处理,作为H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组;将pcDNA、pcDNA-circDLGAP4转染至H9C2细胞后进行缺氧/复氧处理,记为H/R+pcDNA组、H/R+pcDNA-circDLGAP4组;将si-circDLGAP4转染至H9C2细胞后用0.4μg/mL桑白皮多糖处理,再进行缺氧/复氧处理,记为H/R+桑白皮多糖高剂量+si-circDLGAP4组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞术分别检测以上各组细胞活性和凋亡率;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测MDA含量、SOD活性和LDH活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞circDLGAP4和miR-320的表达水平。双荧光素酶报告实验检测circDLGAP4和miR-320的靶向关系。结果与正常对照组相比,H/R组H9C2细胞活性降低,凋亡率升高,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05);与H/R组相比,H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组H9C2细胞活性升高,凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。与正常对照组H9C2细胞MDA[(18.35±1.11)nmL/mL]、LDH(26.81±1.11)U/L,SOD活性[(65.53±2.75)U/L]相比,H/R组H9C2细胞中MDA含量[(95.02±3.67)nmL/mL]及LDH活性[(133.97±5.30)U/L]升高,SOD活性[(11.92±0.63)U/L]降低(P<0.05);与H/R组相比,H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组H9C2细胞中MDA含量[(71.43±3.00)、(53.62±1.69)、(35.81±1.36)nmL/mL]及LDH活性[(106.43±4.00)、(84.50±2.68)、(58.51±1.94)U/L]降低,SOD活性[(24.60±1.14)、(42.37±2.26)、(58.27±2.61)U/L]升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。与正常对照组相比,H/R组H9C2细胞中circDLGAP4表达水平降低,miR-320表达水平升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+桑白皮多糖低、中、高剂量组H9C2细胞中circDLGAP4表达水平升高,miR-320表达水平降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。与pcDNA组相比,pcDNA-circDLGAP41、2、3组circDLGAP4表达水平升高。与H/R+pcDNA组相比,H/R+pcDNA-circDLGAP4组circDLGAP4表达水平升高,miR-320表达水平降低,MDA含量、LDH活性降低,SOD活性升高;H9C2细胞活性升高,H9C2细胞凋亡率及Bax表达水平降低,而Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。与H/R+桑白皮多糖高剂量组相比,H/R+桑白皮多糖高剂量+si-circDLGAP4组circDLGAP4表达水平降低,miR-320表达水平升高,H9C2细胞中MDA含量、LDH活性升高,SOD活性降低,H9C2细胞活性降低,H9C2细胞凋亡率及Bax表达水平升高,而Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。circDLGAP4和miR-320的互补序列。wt-circDLGAP4与miR-320共转染的细胞荧光素酶活性较与miR-NC共转染的降低(0.96±0.08 vs 0.35±0.03,P<0.05)。结论桑白皮多糖通过调控circDLGAP4/miR-320对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤起保护作用。

桑叶多糖的含量测定

用蒽酮-硫酸比色法测定了桑叶中多糖的含量。测定波长620nm,多糖换算因子f=3.07;在10～60μg/ml范围内吸收度与被测物含量呈良好的线性关系,r=0.999005;多糖的平均回收率为98.81%,RSD为2.08%(n=5)。测定结果表明,10月份桑叶中多糖含量最高。本法简便、准确、重现性好,可作为桑叶中多糖的含量测定方法。

桑叶多糖的分离纯化及组成研究

本文对桑叶多糖的提取、分离纯化和单糖的组成进行了研究。桑叶经热水提取乙醇沉淀得多糖粗品,经脱蛋白,乙醇分级沉淀、DEAE-纤维素柱和Sephadex G-100柱层析,纯化得MP11、MP12、Mp13三个多糖组分。经糖腈乙酰化处理后进行气相色谱分析得知MP11由Rha、Ara、Xyl、Man、Glu、Gal组成,其比例为21:16:3:3:1:20;MP12由Rha和Glu组成,其比例为3:1;MP13主要由Rha组成。为桑叶多糖的进一步研究提供了基础。

桑枝总黄酮体外抗炎活性及机制研究

目的研究桑枝总黄酮的体外抗炎活性及其作用机制。方法 IFN-γ和LPS协同造成小鼠RAW264.7细胞炎症模型;Griess反应测定细胞上清液中NO产量;FRAP测定细胞总抗氧化能力;RT-PCR检测iNOS、COX-2、HO-1、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达;Western blot检测iNOS、p-ERK蛋白表达水平。结果桑枝总黄酮呈剂量依赖性抑制细胞上清液中NO含量并且无细胞毒性,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、COX-2、IL-1β、IL-6 mRNA和iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1 mRNA表达,但对TNF-α mRNA表达影响不大。结论桑枝总黄酮部分通过MAPK中的ERK信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达从而抑制NO的产量,提高细胞总抗氧化能力,同时下调COX-2、IL-1β、IL-6等炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达而发挥抗炎效果。

桑叶多糖的提取纯化及其含量测定

目的:纯化桑叶多糖并测定其含量。方法:采用10%三氯乙酸、大孔树脂初步纯化桑叶多糖,采用硫酸-蒽酮法对其含量进行测定。结果:用三氯乙酸除蛋白的方法是可行的;桑叶中多糖的平均含量为2.62%,平均回收率为98.81%,RSD为2.08%。结论:该法可作为桑叶中多糖的含量测定方法。

桑叶多糖的研究进展

桑叶多糖是桑叶的一种主要活性成分之一,具有多种药理作用和生物活性功能,是目前的一个研究热点。本文对国内外近年来关于桑叶多糖的提取、分离纯化、化学结构及生物活性等多方面进行了综述,为桑叶资源的深入开发起一定借鉴作用。

桑葚总多糖对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究桑葚总多糖(MFP)对APAP引起的HepG2肝细胞毒性的缓解效应,探讨MFP对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制.方法:采用MTT法检测MFP对细胞活力的影响,将32只小鼠随机分为正常组、模型组、MFP低、高剂量组(50,150 mg·kg^-1),腹腔注射300 mg·kg^-1 APAP建立小鼠急性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)水平;用ELISA测定肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色法观察肝脏组织的病理学变化;用Western blot检测小鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)p65、血红素加氧酶(HO-1)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的表达水平.结果:MFP可剂量依赖性地缓解APAP诱导的HepG2细胞死亡(P<0.01).与模型组相比,MFP能显著地降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,LDH水平(P<0.05或P<0.01),下调肝组织中MDA,TNF-α,IL-1β,IL-6的含量(P<0.05或P<0.01),改善APAP诱导的小鼠肝组织病变.此外,MFP还能明显上调模型小鼠肝组织中GSH,T-SOD,T-AOC水平(P<0.05或P<0.01),明显下调NF-κB p65蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01),上调HO-1和G6PD蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01).结论:MFP能保护APAP诱导的小鼠急性肝损伤,这与增强肝脏抗氧化能力,抑制肝脏炎症反应有关.

桑白皮多糖对呼吸道合胞病毒肺炎小鼠肺组织病理和外周血T细胞亚群的影响

目的通过研究桑白皮多糖对呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎BALB/c小鼠肺组织病理形态和外周血T细胞亚群的影响,探讨桑白皮多糖对BALB/c小鼠RSV肺炎的干预机制。方法 BALB/c小鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组10只;除正常组外,用RSV(long株)经鼻腔接种,建立小鼠RSV肺炎模型。于感染当天,高、中、低剂量组分别给予桑白皮多糖182、91、45.5 mg·kg-1·d-1灌胃,正常组与模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次,于感染第7天取外周血进行T细胞亚群的检测及肺组织进行HE染色。结果桑白皮多糖能有效地减少肺泡壁炎细胞的浸润,改善肺组织的炎症状况。高、中、低剂量组与模型组比较,高剂量组CD3+T细胞百分率为(50.35±8.97)%、CD4+T/CD8+T为(3.52±0.79),差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组CD3+T细胞百分率为(55.05±5.94)%、CD4+T细胞百分率为(20.39±5.56)%、CD4+T/CD8+T为(2.88±0.56),差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组只有CD4+T/CD8+T为(3.49±0.45),差异有统计学意义(P<0.05)。结论桑白皮多糖可以改善肺炎小鼠肺组织病理变化,能够调节机体细胞免疫。

大孔吸附树脂分离纯化桑叶总黄酮及其动力学研究

目的:研究桑叶总黄酮(MTF)的分离纯化工艺,并探索其动力学过程。方法:考察3种大孔吸附树脂对MTF的吸附分离性能,以饱和吸附量、总黄酮回收率及纯度为考察指标综合评价,绘制渗漏曲线和洗脱曲线并用数学方程来描述其动力学过程。结果:NKA-9型树脂对MTF的吸附分离性能最好,饱和吸附量为43.4 m g.-g 1,洗脱率为98.2%;分离纯化MTF的最优工艺条件为:上样浓度20 m g.m-l 1,6倍量洗脱用水,70%乙醇洗脱,总黄酮纯度达58.2%;树脂可重复使用4次;动态吸附-洗脱过程的动力学方程为:y=u(1--e kx)。结论:NKA-9型树脂适用于MTF的分离纯化。

响应面法优化微波辅助提取桑叶多糖的工艺研究

利用微波辅助技术进行桑叶多糖提取,通过单因素实验确定因素与水平,应用Box-Behnken设计3因素3水平的试验,依据回归分析确定最优的提取工艺条件.结果表明,微波辅助提取桑叶多糖的优化提取工艺条件为:温度88℃、时间11 min和液固比18∶1,提取的多糖含量为15.20 mg/g.微波辅助提取的多糖含量分别比传统水提法提取10 min和60 min高2.18倍和0.23倍.

桑叶多糖的提取工艺研究

研究了水浸提法提取桑叶多糖的工艺条件,比较了超声法、酶法和微波法等不同的前处理方法对桑叶多糖提取效率的影响.结果表明:(1)水浸提法提取桑叶多糖的较优方案为:温度80℃、时间1 h、料液比1∶40,桑叶多糖的得率约为11.50%.(2)超声法辅助提取桑叶多糖的较优方案为:超声功率300 W,超声处理10 min,之后水浸提多糖的得率为12.25%.(3)纤维素酶为桑叶多糖的最佳酶提取剂,其酶解的较优方案为:酶用量为桑叶量的1.5%,酶解时间2 h,酶解温度50℃,酶处理后水提多糖得率为12.49%.(4)微波辐射时间以8 min为宜,微波法辅助提取多糖得率为11.68%.(5)比较4种处理方法提取桑叶多糖的得率,依次为:酶辅助法>超声辅助法>微波辅助法>水浸提法,综合考虑成本、工作效率等因素,以超声法前处理、水浸提桑叶多糖得率较高.

大孔树脂纯化桑叶总黄酮的工艺条件研究

[目的]为桑叶总黄酮的开发利用提供依据。[方法]选取7种型号的大孔树脂进行纯化试验，利用静态吸附和动态吸附的方法，研究大孔树脂纯化桑叶总黄酮的工艺条件。[结果]D140型大孔树脂能更有效地纯化桑叶总黄酮。当上样浓度在1．041～3．122mg／ml范围内时，桑叶总黄酮的回收率较高。上样速率为1、2BV／h时，总黄酮回收率较高。上样体积为4．5BV时，树脂基本达到动态饱和吸附。当乙醇浓度为70％、洗脱速率为1BV／h时，洗脱率最大，产物纯度最高。[结论]D140型大孔树脂纯化桑叶总黄酮的最佳工艺为：以浓度约为3mg／ml的桑叶总黄酮上样，上样速率控制在2BV／h左右，上样体积为4．5BV，再用3BV、70％乙醇，以1BV／h的速率洗脱，获得的桑叶总黄酮的纯度为41．1％。

药桑叶多糖的体外抗氧化活性研究

目的研究药桑叶多糖的体外抗氧化活性。方法采用水提醇沉法(热水)提取药桑叶水溶性多糖并测定多糖含量。利用二苯代苦味酰基(DPPH·)、二铵盐自由基(ABTS·)、羟自由基(·OH)以及超氧阴离子自由基(O_2^-·)清除试验综合评价药桑叶多糖的体外抗氧化活性。结果药桑叶多糖在质量浓度0.2~1.2mg/mL范围内对DPPH·、ABTS·、·OH、O_2^-·的最高清除率分别为21.77%、25.16%、91.3%和85.94%。结论药桑叶多糖对4种自由基均具有一定的清除能力,其呈现一定剂量关系。

响应面优化酶解—微波辅助提取桑叶多糖的工艺研究

采用响应面优化酶解——微波辅助法从桑叶中提取桑叶多糖的提取工艺。在单因素试验的基础上通过采用Box-Behnken方法,研究液固比、提取时间、提取温度对桑叶多糖提取率的影响。结果显示,拟合方程显著,最终确定桑叶多糖的最优提取条件为:酶含量2%、酶解pH6、酶解温度50℃、酶解时间20 min、液固比15 mL·g-1、提取时间13 min、提取温度76℃,该条件下桑叶多糖的实际提取率为15.23%,与理论模拟值15.12%接近,建立的模型真实可靠。该方法用于提取桑叶中的多糖类成分,工艺简单、成本低,具有有较高的应用价值。

桑白皮多糖对小鼠实验性肝损伤的保护作用

目的研究桑白皮多糖(PCM)对小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法采用四氯化碳(CCl4)、扑热息痛(AAP)、硫代乙酰胺(TAA)致小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清ALT、AST活性。结果 PCM对CCl4、AAP所致小鼠实验性肝损伤有明显保护作用。但PCM对TAA所致小鼠实验性肝损伤无明显的保护作用。结论 PCM可明显降低CCl4、AAP致小鼠急性肝损伤模型血清ALT、AST活性,而对TAA致小鼠急性肝损伤模型血清ALT、AST活性无明显作用。

响应面法优化桑根多糖的提取工艺

为探究桑根多糖的最佳提取工艺,在提取时间、提取温度、液料比单因素试验的基础上,使用响应面法中的Box-Behnken中心组合试验设计建立二次回归模型,对提取时间、提取温度、液料比进行优化组合,确定最优提取工艺。结果表明,在提取时间2 h,提取温度60℃,液料比13∶1(m L/g)的条件下,桑根多糖提取效果最佳。该工艺参数条件下提取率预测值为5.474%,实际值为5.436%,两者相差较小,说明该工艺条件较好。

桑叶化学成分与药理作用研究进展及其质量标志物预测分析

传统大宗中药材桑叶具有多种药用价值及保健功效,是我国首批认定的药食同源品种。其量产区主要于广东、广西、安徽、重庆、云南等地,国内外学者对桑叶的化学成分、药理机制等分别开展了大量的研究。传统上桑叶的功效包括疏散风热、清肺润燥、平肝明目、凉血止血;现代研究显示其主要药效包括抗炎镇痛、调节血糖等,主要效应成分有生物碱、黄酮、多糖类等化合物。从桑叶资源分布、化学成分、药理机制等分析近10年研究成果,对其质量标志物进行预测分析,探讨可表征其质量的成分指标与药理作用的内在关联性,为桑叶饮片的质量评价及临床应用研究提供科学依据。

桑白皮有效成分分离纯化的工艺研究

目的:优化桑白皮有效成分的分离纯化工艺。方法:用大孔树脂静、动态吸附解吸法,以吸附率、解吸率等为指标,优选总黄酮分离纯化工艺中大孔树脂类型、上样液量、洗脱剂体积分数、洗脱剂用量;采用水提醇沉法,以多糖得率和纯度为指标,优选总多糖分离纯化工艺中沉淀多糖所用乙醇体积分数;用离子交换法,以总生物碱吸光度为指标,优选总生物碱分离纯化工艺中上样液量、洗脱剂用量;并进行验证试验。结果:桑白皮总黄酮最优工艺为D101大孔树脂为吸附剂,上样液质量浓度为0.1 g(生药)/ml,上样液量为9倍柱体积(BV),用5 BV 70%的乙醇洗脱;总多糖最优工艺中沉淀多糖的乙醇体积分数为80%;总生物碱最优工艺为上样液量3 BV,用8 BV 0.5 mol/L的氨水洗脱。分离纯化后桑白皮总黄酮、总多糖、总生物碱平均纯度分别为35.68%、47.14%、55.79%,RSD分别为1.28%、1.61%、1.14%(n=3)。结论:优选的工艺条件稳定,适合桑白皮有效成分的分离纯化。

桑白皮水提取多糖组分的分离纯化和结构特征

桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮,是临床上常用的中药.采用沸水提取获得桑白皮中的多糖,用乙醇沉淀、阴离子交换柱层析、凝胶过滤层析等方法进行分离和纯化,从水提粗多糖中得到均一多糖CMA-a-1,CMA-a-5和CMA-b1-1.应用糖组成分析、甲基化分析及IR,NMR等光谱学方法研究桑白皮多糖的结构及性质.结果表明,CMA-a-1,CMA-a-5均为淀粉类多糖,前者结构类似于支链淀粉,但O-6位上取代的支链中含有1,6-连接葡萄糖,平均链长为23;而后者更接近于直链淀粉,平均链长为30.CMA-b1-1为以1,2-连接的鼠李糖及1,4-连接的半乳糖醛酸为主链的RG-I型果胶类多糖,具有多种形式的由阿拉伯糖、半乳糖、木糖等构成的支链.CMA-b1-1对SMMC7721肝癌细胞生长具有抑制作用,对L02正常肝细胞生长则没有抑制作用.本研究表明桑白皮水提多糖中主要是淀粉类和果胶类多糖.

桑叶多糖结合游泳对大鼠骨骼肌以及mTOR信号通路的影响

桑叶是国家药典收录的一味中药材,是桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥叶。桑叶多糖是桑叶提取物中多种生理活性物质之一,本研究试图结合游泳训练探讨桑叶多糖对大鼠骨骼肌mTOR信号通路的影响。研究结果表明:桑叶多糖组大鼠体重较游泳运动模型组有所提高;与模型组相比,桑叶多糖组大鼠趾长伸肌湿重、MHC含量、肌纤维横截面积均显著增加,且与桑叶多糖剂量成正相关;与模型组相比,桑叶多糖组大鼠腓肠肌、股四头肌与体重的比值也显著增加,且与桑叶多糖剂量成正相关;Real-time PCR检测桑叶多糖组大鼠趾长伸肌、大鼠腓肠肌和股四头肌中mTOR mRNA,发现与模型组相比,均显著上调;Western blot检测其蛋白水平,结果与mRNA表达一致。桑叶多糖能够改善大鼠中肌肉结构,影响各肌肉组织中mTOR信号通路,进而调节运动后大鼠状况。