威灵仙总皂苷通过miR-410-3p介导调控胶质瘤细胞的生物学活性

目的探讨威灵仙总皂苷通过调控微小RNA(miRNA)-410-3p对胶质瘤细胞生物学活性的影响以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PTEN/Akt/mTOR)信号通路的调节作用。方法用不同浓度威灵仙总皂苷处理U87细胞后,用CCK-8法检测细胞存活率。将对数生长期U87细胞随机分为对照组、NC组(转染miR-410-3p NC)、inhibitor组(转染miR-410-3p inhibitor)以及inhibitor联合威灵仙总皂苷组(转染miR-410-3p inhibitor 24 h后,40μmol·L^(-1)威灵仙总皂苷处理),依次检测miR-410-3p表达水平、细胞存活率、细胞迁移和侵袭力,miR-410-3p与PTEN的靶向关系和PTEN、p-Akt、Akt、p-mTOR以及mTOR蛋白的相对表达量。结果细胞存活率随威灵仙总皂苷浓度的升高而降低(P<0.05);与NC组比较,inhibitor组划痕愈合率、侵袭细胞数量、p-Akt和p-mTOR蛋白的相对表达量升高,miR-410-3p表达水平以及PTEN蛋白的相对表达量降低(P<0.05);与inhibitor组比较,inhibitor联合威灵仙总皂苷组细胞存活率、划痕愈合率、侵袭细胞数量、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量降低,miR-410-3p表达水平以及PTEN蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论威灵仙总皂苷可抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为,其可能是通过上调miR-410-3p表达,进而调控PTEN/Akt/mTOR信号通路发挥作用。

威灵仙总皂苷抗类风湿性关节炎的作用机制

目的:对威灵仙总皂苷(TSRC)抗类风湿关节炎的作用机制进行研究。方法:利用刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T淋巴细胞增殖模型;利用大鼠IL-1β、IL-2、TNF-α定量酶联检测试剂盒测定原发性佐剂性关节炎大鼠血清中IL-1β、IL-2、TNF-α的含量;利用氢氧化钾-甲醇溶液法测定原发性佐剂性关节炎大鼠肿胀足前列腺素E2(PEG2)的含量。结果:TSRC能抑制ConA诱导小鼠T淋巴细胞的增殖;降低大鼠佐剂性关节炎细胞因子(IL-1β、IL-2、TNF-α)的含量;降低佐剂性关节炎大鼠炎性肿胀足PGE2的含量。结论:TSRC可能是通过抑制T淋巴细胞的过度增殖、抑制细胞因子和PEG2来发挥抗类风湿性关节炎作用。

大孔吸附树脂分离纯化威灵仙总皂苷的工艺研究

目的研究大孔吸附树脂分离纯化威灵仙总皂苷的工艺条件。方法威灵仙用70%乙醇回流提取后,上D101型大孔树脂,水洗后分别用30%,50%,70%乙醇洗脱,以威灵仙总皂苷的洗脱率为指标,考察大孔树脂分离纯化威灵仙总皂苷的吸附性能和洗脱参数。结果威灵仙总皂苷主要富集于50%乙醇洗脱液部分,大孔吸附树脂的吸附容量为53.36mg/g,洗脱率达71.26%。结论采用大孔吸附树脂分离纯化威灵仙总皂苷是可行的,优选洗脱条件为用水洗去水溶性杂质,50%乙醇洗脱总皂苷。

正交实验优选威灵仙总皂苷提取工艺

目的建立威灵仙总皂苷的提取工艺。方法以齐墩果酸为对照,以总皂苷含量为指标,设计L9(34)正交实验,确定合理的提取工艺。结果8倍量70%乙醇提取2次,每次1.5 h为优化提取方案。结论本工艺条件对威灵仙总皂苷的提取收率高且稳定,为威灵仙总皂苷的工业化生产和新药开发提供了依据。

激光针刀配合穴位注射威灵仙总皂苷对膝骨关节炎模型大鼠RF及PGE_2的影响

目的:观察激光针刀配合穴位注射威灵仙总皂苷对膝骨关节炎模型大鼠血清类风湿因子(RF)及前列腺素E_2(PGE_2)的影响,探讨其作用机制。方法:大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、激光针刀组、穴位注射组及综合治疗组,除空白对照组外其它4组动物于左前侧膝关节腔内注射弗氏完全佐剂(0.1 ml)造模。在造模成功后,模型组腹腔注射生理盐水;激光针刀组取左前肢循经取穴为主穴激光针刀治疗,辅以电针刺激关元、足三里、脾俞、气海、阳陵泉、肾俞、肝俞等配穴20 min;穴位注射组于左前侧膝骨关节腔内每日穴位注射威灵仙总皂苷(50 mg/kg);综合治疗组治疗方法为穴位注射组加综合治疗组。以上各组均连续治疗14天。测定动物关节腔积液中透明质酸(HA)、白介素IL-6、前列腺素E_2(PGE_2)、血清类风湿因子(RF)Ig M-RF、Ig A-RF阳性率,病理检查关节软骨MMP-1细胞阳性表达率。结果:激光针刀配合穴位注射威灵仙总皂苷显著降低模型大鼠IL-6、PGE_2、Ig M-RF、IgA-RF及MMP-1等指标,升高HA,与本组治疗前、模型组、激光针刀组及穴位注射组比较(P<0.05),差异有统计学意义。结论:激光针刀配合穴位注射威灵仙总皂苷能有效治疗实验性大鼠膝骨关节炎,其作用机制可能为激光针刀松解膝关节粘连的炎症组织,电针刺激激发经气,威灵仙总皂苷降低IL-6及PGE_2等炎性因子刺激,提高关节腔内HA含量,阻断类风湿因子与抗原IgM、IgA结合,降低IgM-RF、IgA-RF合成,减轻变态反应发生而起到协同治疗作用。

威灵仙总皂苷对实验性非酒精性脂肪性肝炎大鼠氧化应激的干预作用

目的:观察威灵仙总皂苷干预实验性非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠模型氧化应激的疗效,为临床应用威灵仙总皂苷防治NASH提供科学依据.方法:采用高脂饲料饲养SD大鼠建立实验性NASH大鼠模型,并给予威灵仙总皂苷灌胃干预,通过检测空白组、模型组、威灵仙总皂苷组和易善复组下腔静脉血清中总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量以及肝组织上清液中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,并分别统计分析各组间氧化能力的差异和抗氧化能力的差异,观察威灵仙总皂苷干预实验性NASH大鼠模型氧化应激的疗效.结果:威灵仙总皂苷组NASH大鼠与模型组相比,血清和肝组织MDA含量均明显降低(均P<0.01),血清T-AOC和肝组织GSH-Px、CAT、SOD含量均明显升高(均P<0.01);威灵仙总皂苷组NASH大鼠与易善复组相比,血清MDA、T-AOC和肝组织MDA、GSH-Px、CAT、SOD含量均相当(均P>0.05).结论:威灵仙总皂苷可有效改善NASH大鼠的氧化应激,疗效与易善复相当.

威灵仙总皂苷的分离纯化

目的:研究用大孔树脂分离纯化技术从威灵仙中提取分离有效部位威灵仙总皂苷。方法:将威灵仙粉粹后用70%乙醇渗滤提取,收集浓缩提取液后,上D101型大孔树脂,依次用10%氨水、水、20%乙醇洗脱杂质,最后以70%乙醇洗脱有效部位,得总皂苷提取物,用齐墩果酸作对照,检测其含量。结果:威灵仙总皂苷主要富集于70%乙醇洗脱液部分,总皂苷含量达23.14%。结论:采用大孔吸附树脂分离纯化威灵仙总皂苷是可行的,可用于其他应用方面的研究。

基于GC-TOF-MS研究威灵仙总皂苷对佐剂性关节炎大鼠血清代谢谱的影响

观察威灵仙总皂苷(TSCR)对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清代谢谱的变化,探讨其治疗AA可能的作用机制。采用弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,观察大鼠的组织病理学变化。利用气相色谱-飞行时间质谱(GC-TOF-MS)结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),对正常组、AA模型组和TSCR组3组之间的代谢谱进行分析,通过变量重要性投影(VIP)>1结合P<0.05筛选血清中潜在的生物标志物。与正常组相比,模型组大鼠血清中发现并鉴定出天冬氨酸、肌醇、苯乙醛等17个潜在生物标志物;与模型组相比,给予威灵仙总皂苷治疗16 d后,上述潜在生物标志物均有向正常水平回归的趋势。代谢组学分析揭示威灵仙总皂苷对AA大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与调节脂代谢、氨基酸代谢和能量代谢等有关。

威灵仙总皂苷对HL60细胞株体外作用的研究

目的:提取威灵仙总皂苷(TSRC),体外作用于急性早幼粒细胞白血病HL60细胞,研究TSRC对HL60细胞的作用机制。方法:将25～400 mg·L-1的TSRC在体外与HL60细胞共同培养,WST-1法检测TSRC对HL60细胞的增殖抑制作用;采用细胞形态学、透射电镜观察细胞、AnnexinV/PI双染色研究TSRC诱导HL60细胞凋亡作用;采用Wright’s-Giemsa染色细胞形态学观察、硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验、细胞免疫表型CD11b检测等方法研究TSRC诱导HL60细胞分化作用。结果:50～400 mg·L-1TSRC在体外对HL60细胞增殖有明显抑制作用,呈现剂量和时间的量效关系;不同浓度TSRC作用24 h后均能显著促进HL60细胞凋亡;但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。结论:TSRC在体外可有效抑制HL60细胞增殖,并诱导HL60细胞凋亡,但对HL60细胞无明显的诱导分化作用。