延龄草总皂苷对2-VO模型大鼠认知功能及神经血管单元的作用

目的观察延龄草总皂苷(TST)对大鼠的血管性认知障碍及其神经血管单元(NVU)和神经环路完整性的作用。方法将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TST组及多奈哌齐组,每组12只。除假手术组外,其他3组大鼠均采用双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立脑缺血后认知障碍模型。造模后,TST组给予TST100mg/kg灌胃,多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.45mg/kg灌胃,对照组及模型组给予同体积的生理盐水,1次/d,连续28d。采用水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能;HE、尼氏染色观察大鼠脑组织病理改变;免疫组织化学染色观察大鼠海马突触核蛋白(SYN)的表达情况;高尔基染色观察海马神经元树突棘的变化;Westernblotting检测各组大鼠海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-10、血管内皮生长因子A(VEGFA)、突触后致密蛋白95(PSD95)和生长关联蛋白43(GAP43)表达水平。结果水迷宫实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比均减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比增多(P<0.05)。与假手术组比较,模型组海马CA1区神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量增多(P<0.05)。Westernblotting结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马组织IL-1β、VEGFA表达水平升高(P<0.05),PSD95、GAP43表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组IL-1β表达水平均降低(P<0.05),VEGFA、IL-10、GAP43表达水平均升高(P<0.05)。结论TST可能通过促进突触可塑性和NVU重塑减轻2-VO模型大鼠的认知障碍,有望用于卒中的治疗。

延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。

延龄草总皂苷对D-gal诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(D-gal,皮下注射)、干预组(TST,灌胃给予低、中、高3个剂量),每组10只,连续给药6周。Morris水迷宫评价大鼠认知功能;HE、Nissl染色观察海马及皮质组织形态;免疫组织化学法检测Pink1、Parkin的定位表达;Western blot检测Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62、Beclin1的表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);大鼠海马组织内神经元数量明显减少;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达减少;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显下降,p62的表达明显升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,TST各剂量组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增多、停留在平台所在象限时间增加(P<0.05);海马神经元数量明显增多;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达增多;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显升高,p62的表达明显降低(P<0.05)。结论TST具有明确的神经保护作用,对D-gal所致衰老大鼠的学习记忆降低具有改善作用,其机制可能与Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响

目的探讨延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响及作用机制。方法采用改良线栓法制备卒中后认知障碍大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、延龄草总皂苷组(100 mg/kg)和盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),每组10只,另设假手术组10只,给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,HE和尼氏染色观察脑组织病理变化,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况,高尔基染色观察海马树突棘变化,Western blot检测海马组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、SYN、PSD-95、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著减少(P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元排列紊乱、尼氏体减少,凋亡神经元数量增加,树突棘密度减小(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,延龄草总皂苷组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著减少(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著增加(P<0.05,P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元饱满、尼氏体增多,凋亡神经元数量减少,树突棘密度增加(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论延龄草总皂苷可显著改善卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力,抑制神经元和突触损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制神经元凋亡有关。

延龄草根及根茎的化学成分研究(Ⅳ)

目的：研究延龄草根及根茎中的化学成分。方法：采用硅胶、聚酰胺、反相硅胶C18、Sephadex LH-20柱色谱和制备高效液相色谱等对其85%甲醇洗脱部位进行分离纯化。用MS、1D-NMR及2D-NMR等波谱学方法鉴定化合物的结构。结果：从延龄草的85%甲醇洗脱部位中分离鉴定了10个甾体皂苷类化合物,分别鉴定为：薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→4）-α-L-吡喃鼠李糖基（1→4）-[α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、trikamsteroside E（2）、deoxytrikamsteroside E（3）、（23S,24S,25S）-螺甾-5-烯-1β,3β,21,23,24-五羟基-1β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[O-β-D-吡喃木糖基（1→3）]-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（4）、trikamsteroside B（5）、27-hydroxytrikamsteroside B（6）、3-乙酰基-偏诺皂苷元（7）、dioscoreanoside I（8）、sileneoside G（9）、intergristerone B（10）。结论：其中,化合物8~10为首次从该属植物中分离得到,化合物1、3、4、6、7为首次从该植物中分离得到。

延龄草多糖水提醇沉工艺研究

目的优选延龄草多糖的水提醇沉工艺条件。方法采用正交实验设计,以多糖得率为综合评价指标,对水提醇沉提取工艺的影响因素即提取温度、料液比、提取时间和醇沉体积分数进行考察和优化。结果最佳工艺条件为料液比1∶15,100℃,提取2h,2次,用体积分数80%乙醇沉淀,可使延龄草多糖得率达到4.96%。结论该提取工艺可行,实验结果为确定延龄草多糖的水提醇沉工艺提供了实验依据。

不同产地延龄草中延龄草总皂苷的含量测定

目的建立延龄草中总皂苷的含量测定方法,比较研究不同产地延龄草中总皂苷的含量。方法以薯蓣皂苷元为对照品,采用分光光度法,高氯酸显色,在410nm处测定吸光度,计算延龄草中总皂苷的含量。结果薯蓣皂苷元在4.12-49.44μg范围内与吸光度值呈良好的线性关系（r=0.9989）,平均回收率为97.3%,RSD为2.5%。结论该方法操作简便、准确、灵敏、重复性好,可用于延龄草样品中总皂苷的含量测定,不同产地样品,总皂苷含量有差异。

延龄草中总皂苷的含量测定

目的：建立延龄草总皂苷的含量测定方法。方法：以薯蓣皂苷元为对照品，采用分光光度法，高氯酸显色，在408nm处测定吸光度，计算延龄草中总皂苷的含量。结果：薯蓣皂苷元在0．01～0．06mg·mL^-1的浓度范围内与吸光度值呈良好线性关系（R^2=0．9996），方法的平均回收率为99．43％，RSD为2．64％。结论：建立了延龄草中总皂苷含量测定方法，该方法操作简便、准确、灵敏、重现性好，可用于延龄草的质量控制。

延龄草甾体皂苷对脑缺血大鼠星形胶质细胞GFAP、Cx43及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响

目的观察延龄草甾体皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、缝隙连接蛋白43(Cx43)及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响,探讨其改善脑缺血的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金纳多组(60 mg/kg)及TSTT低、高剂量组(33、65 mg/kg),每组12只。分别进行相应干预,连续15 d。采用透射电镜观察神经元、星形胶质细胞超微结构,免疫荧光染色检测缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达,RT-PCR检测缺血周围脑组织Wnt3a、Dvl3基因表达。结果透射电镜观察结果显示:模型组大鼠神经元核明显固缩,核仁消失,染色质电子密度增加,细胞质内细胞器明显减少,可见大量空泡,星形胶质细胞肿胀明显,染色质消融,核周围出现空白区,细胞器减少;与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠神经元和星形胶质细胞超微结构损伤明显减轻。免疫荧光染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血周围脑组织Dvl3基因表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,TSTT高剂量组和金纳多组大鼠缺血周围脑组织Wnt3a和Dvl3基因表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论TSTT可通过上调Wnt3a/Dvl3基因表达、下调GFAP和Cx43表达,抑制星形胶质细胞异常活化,减轻脑缺血大鼠神经元、星形胶质细胞超微结构损伤。

延龄草总皂苷抑制结肠癌细胞增殖作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对结肠癌细胞HT-29、SW-620的增殖、环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)表达与功能及β-连环素(β-catenin)表达的影响。方法培养结肠癌细胞HT-29与SW-620,加入不同浓度的延龄草总皂苷(0～300.00mg/L),采用四甲基偶氮唑盐(microculture tetrazolium,MTT)比色法,观察延龄草总皂苷对HT-29、SW-620增殖的影响,以蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中COX-2、COX-1和β-catenin蛋白的表达,以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测细胞培养液中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的浓度。结果延龄草总皂苷可有效抑制HT-29、SW-620的增殖,其IC50分别为:(9.87±1.15)mg/L,(36.63±1.07)mg/L。延龄草总皂苷可剂量依赖性地降低COX-2、β-catenin的表达和PGE2的浓度。结论延龄草总皂苷可有效抑制结肠癌细胞HT-29、SW-620增殖,可能机制为其降低了COX-2的表达及功能与β-catenin的表达。

延龄草甾体皂苷类成分对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨延龄草中4个甾体皂苷类单体对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法将96只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(I/R组),尼莫地平片组(Contrast 1组),银杏叶片组(Contrast 2组),偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y2T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(简称Y3T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y4T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元(YP组)中、高剂量组。采用改良Zea Longa线栓法构建局灶性脑I/R损伤动物模型,Sham组不插入线栓,其余操作同I/R组,各给药组在造模手术前连续给药8 d,造模后各组进行神经功能缺陷评分,然后麻醉处死,取材检测。干湿称重法检测大鼠脑指数,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死体积,试剂盒法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷氨酸的活性和一氧化氮(NO)、Ca^2+的含量,酶联免疫吸附试验检测大鼠脑组织中炎症介质肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察海马CAI区和皮质层区病理学改变。结果与I/R组比较,给药各组能明显降低脑I/R大鼠翻正反射恢复时间、减轻I/R部位的病理损伤,降低脑组织含水量、减少脑梗死体积,提高SOD活性,降低MDA、谷氨酸、NO和Ca^2+含量,抑制激活小胶质细胞释放TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子,病理形态学有明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。结论延龄草中4个甾体皂苷类单体对局灶性脑I/R损伤具有明显保护作用,其机制可能与抗炎及抗氧化应激有关。

延龄草总皂苷提取纯化工艺及其抗炎活性研究

目的:优选延龄草总皂苷提取纯化工艺,并对其纯化前后的抗炎活性进行对比。方法:以延龄草总皂苷提取率为考察指标,采用正交试验优化提取工艺;应用大孔吸附树脂技术,通过静、动态吸附和解吸附实验,确定最佳纯化工艺;为了证实工艺的合理性,对纯化后的总皂苷抗炎活性进行验证。结果:最佳提取工艺为乙醇体积分数75%,料液比1∶10,加热回流提取2次,每次1.5 h。纯化工艺为HPD400大孔树脂,以质量浓度为0.1 g·mL^(-1)的药液上样,上样量为折合生药(g)∶树脂(mL)=1∶2,以1 BV·h^(-1)流速上样,然后依次以水2 BV、20%乙醇水3 BV洗脱除杂,收集70%乙醇水洗脱液(5 BV),经浓缩、干燥即得延龄草总皂苷收率为7.42%,总皂苷质量分数为34.29%。该总皂苷在质量浓度为5.00、1.00μg·mL^(-1)时对脂多糖诱导RAW264.7细胞释放一氧化氮有明显的抑制作用,其半数抑制浓度(IC_(50))值为3.79μg·mL^(-1),而其醇提物的IC_(50)值为20.68μg·mL^(-1),说明精制过程实现了药效成分的富集。结论:该提取纯化工艺稳定、可行,所得到的延龄草总皂苷与其醇提物相比具有更好的抗炎活性。

延龄草总皂苷对D-半乳糖诱导的SD大鼠心肌线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草苷(TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的大鼠心肌组织保护作用及其对心肌线粒体自噬的影响。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、D-gal模型组(200 mg·kg^(-1),sc)和D-gal+TST 50,100和200 mg·kg^(-1)组(ig给予TST,2 h后sc给予D-gal),连续给药7周。心脏取血检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBD)和谷草转氨酶(GOT)水平;HE染色法观察大鼠心肌组织病理变化;免疫组织化学染色检测线粒体外膜结构域包含蛋白FUN141(FUNDC1)和线粒体BNIP3L膜蛋白(NIX)的定位和表达;Western印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链LC3Ⅱ/Ⅰ比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、Beclin1、P62、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、E3泛素-连接酶活性帕金森病蛋白2(Parkin)、FUNDC1和NIX蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组大鼠血清CK,CK-MB,LDH,HBD和GOT水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示,D-gal模型组大鼠心肌细胞明显萎缩并伴脂肪变性;免疫组化结果显示,FUNDC1和NIX蛋白表达降低(P<0.01);Western印迹结果显示,LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1、PINK1、Parkin、FUNDC1和NIX蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),P62表达升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,D-gal+TST 50,100和200 mg·kg^(-1)组大鼠血清总心肌酶谱各项指标均显著下降(P<0.05,P<0.01),心肌损伤明显改善,LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1、PINK1、Parkin、FUNDC1和NIX蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),D-gal+TST 200 mg·kg^(-1)组P62蛋白表达水平无显著性差异。结论TST对D-gal诱导的大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与PINK1,Parkin,FUNDC1和NIX蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷提取纯化工艺及其抗肿瘤活性

目的优选延龄草总皂苷提取纯化工艺,并考察其体内外抗肿瘤活性。方法以出膏率和延龄草总皂苷提取率为指标,单因素、正交实验优化提取工艺;采用大孔吸附树脂技术,通过静、动态吸附与解吸实验,优选最佳纯化工艺;噻唑蓝(MTT)法测定总皂苷对3种肿瘤细胞株MCF-7、HeLa、A549的抑制作用,并研究其对S180小鼠移植瘤的作用。结果最佳提取工艺条件为乙醇体积分数80%,超声时间40 min,料液比1:50,提取温度60℃;纯化工艺为D101大孔树脂,最大上样量为80 mL,洗脱剂为75%乙醇,洗脱体积4 BV,收集洗脱液,纯化得到的固形物中总皂苷含量为61.45%;延龄草总皂苷体外对3种肿瘤细胞均有一定的抑制作用,IC50分别为(7.89±1.13),(8.18±1.04),(28.5±3.16)μg·mL-1,体内对S180荷瘤小鼠的抑制率为12.6%~58.0%。结论该工艺稳定、可行,所得到的总皂苷具有较好的抗肿瘤活性。

延龄草总皂苷对佐剂性关节炎模型大鼠的改善作用及机制

目的:研究延龄草总皂苷(TTM)对佐剂性关节炎模型大鼠的改善作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为造模组(n=44)和空白组(n=6),造模组大鼠注射完全弗氏佐剂以复制佐剂性关节炎模型,空白组大鼠同法注射等体积生理盐水。将造模成功的大鼠分为模型组、雷公藤多苷片组(40mg/kg)和TTM低、中、高剂量组(50、100、200mg/kg),每组6只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃生理盐水,每天1次,连续9d。末次灌胃后,测定大鼠体质量、足肿胀度(双侧),并进行关节炎性评分;测定大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量;观察大鼠踝关节病理形态学变化;检测大鼠膝关节组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)的蛋白表达水平;检测大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠双侧足肿胀度,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,膝关节组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达水平,踝关节滑膜组织中NLRP3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);体质量显著降低(P<0.05);滑膜细胞增生明显,可见滑膜组织充血、炎性细胞浸润等。与模型组比较,TTM各剂量组大鼠上述指标水平大部分均显著逆转(P<0.05或P<0.01);滑膜细胞增生、滑膜组织充血及软骨细胞破坏等病理改变均减轻,炎症细胞浸润减少。结论:TTM可改善大鼠类风湿性关节炎;其作用机制可能与抑制NLRP3/caspase-1信号通路的活性,降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达有关。

延龄草甾体皂苷的大孔树脂纯化工艺研究

目的:优选10种大孔树脂富集纯化延龄草中3种甾体皂苷的工艺研究。方法:采用HPLC法,以重楼皂苷Ⅵ、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷、重楼皂苷Ⅶ的含量为指标,考察上样浓度、洗脱溶剂及用量、不同树脂类型对3种甾体皂苷吸附和转移率的影响。结果:优选AB-8型大孔树脂,取14 g延龄草粉末制备上样供试液,流速2 BV/h,蒸馏水洗脱8 BV,30%乙醇洗脱7 BV,60%乙醇2 BV洗脱除杂,85%乙醇6 BV富集甾体皂苷成分。结论:优选工艺可较好地富集延龄草3种甾体皂苷,简单易行,生产成本低。

延龄草中主要化学成分的波谱特征

延龄草为我国传统中药材,甾体皂苷类是其主要活性成分。本文对延龄草中的甾体皂苷的化学结构和波谱学特征进行了归纳,为今后这类化合物的结构鉴定和核磁波谱数据归属提供了参考依据。

延龄草甾体皂苷抗大鼠急性心肌缺血有效成分的研究

目的:探讨延龄草中3个甾体皂苷单体抗急性心肌缺血的生物活性作用。方法:取SD雄性大鼠90只随机分为9组,分别为假手术组、模型组、地奥心血康组(60.0 mg/kg)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷单体高剂量组(Y2TH)29.14 mg/kg、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷单体中剂量组(Y2TM)14.57 mg/kg、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷单体高剂量组(Y3TH)17.14 mg/kg、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷单体中剂量组(Y3TM)8.86 mg/kg、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷单体高剂量组(Y4TH)26.86 mg/kg、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷单体中剂量组(Y4TM)14.28 mg/kg,连续灌胃给予相应剂量药物14 d,于末次给药1 h后,采用冠状动脉结扎法建立急性心肌缺血大鼠模型,探讨延龄草中3个甾体皂苷单体对急性心肌缺血大鼠心电图指标、心肌梗死面积、心肌酶(CK、LDH)的影响。结果:地奥心血康组、Y2T、Y3T、Y4T的高、中剂量组均可显著降低急性心肌缺血模型大鼠ST段、T波(P<0.05或P<0.01),能显著减少心肌梗塞范围(P<0.01),并可使血清中CK、LDH活性显著降低(P<0.01),各给药组与模型组比较差异有统计学意义。结论:延龄草中3个甾体皂苷单体Y2T、Y3T、Y4T对急性心肌缺血大鼠的心肌细胞具有一定的保护作用。

基于AMPK/Sirt1通路延龄草总皂苷对脑缺血再灌注继发肺损伤大鼠的保护作用

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对脑缺血再灌注大鼠肺组织的影响及其可能机制。方法:选取80只雄性大鼠随机分为8组:假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平,200 mg·kg^-1)、TST低(50 mg·kg^-1)、中(100 mg·kg^-1)、高(200 mg·kg^-1)剂量组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(Sirt1)通路抑制剂组(1 mg·kg^-1)、TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组(200 mg·kg^-1+1 mg·kg^-1),每组10只。苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肺组织病理变化;检测各组大鼠氧分压(PaO2);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性因子水平;检测各组大鼠肺组织氧化应激水平。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、Sirt1蛋白表达水平。结果:模型组大鼠肺损伤评分较假手术组高,而阳性对照组与TST不同剂量组均较模型组低(P<0.05);模型组大鼠PaO2、氧合指数(OI)、超氧化物歧化酶(SOD)、p-AMPK及Sirt1蛋白表达水平均较假手术组低,而阳性对照组与TST组(高剂量)较模型组高,AMPK/Sirt1通路抑制剂组与TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST组低,AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组低(P<0.05);模型组IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6、肺组织湿干质量比、MDA、ROS、Ac-NF-κB p65蛋白表达水平均较假手术组高,而阳性对照组与TST组(高剂量组)较模型组低,AMPK/Sirt1通路抑制剂组与TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST组高,AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组高(P<0.05);阳性对照组与TST组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TST可通过激活AMPK/Sirt1通路并减轻肺组织炎性反应及氧化应激反应进而减缓脑缺血再灌注继发肺损伤。