基于NF-κB信号通路探讨牛膝总皂苷治疗膝骨性关节炎滑膜炎症效果机制

目的基于NF-κB信号通路探讨牛膝总皂苷治疗膝骨性关节炎滑膜炎症的机制。方法选择SPF级SD大鼠60只,随机分成对比组、模型组、牛膝总皂苷低剂量组、牛膝总皂苷中剂量组、牛膝总皂苷高剂量组,每组12只。除对比组外,其他各组大鼠在关节两侧进针,从第1天开始每间隔2 d分别注射0.3 mL 5%木瓜蛋白酶水溶液到大鼠膝关节腔内,比较5组大鼠关节炎症指标。结果与对比组比较,模型组的膝关节肿胀程度较严重,miR-19α的基因表达水平较低,而SOX9、NF-κB的基因水平表达较高,使用牛膝总皂苷的3组,根据剂量的增加肿胀水平依次降低,miR-19α基因表达水平依次增高,而SOX9以及NF-κB的基因表达水平和蛋白表达水平依次降低。结论牛膝总皂苷能减轻骨关节炎的炎症症状,并且能通过上调miR-19α的表达抑制SOX9、NF-κB的表达水平,保护软骨细胞的凋亡。

萆薢总皂苷合用牛膝总皂苷降血尿酸和抗炎作用的组方合理性研究

目的探讨牛膝总皂苷和萆薢总皂苷降低小鼠血尿酸和抗炎作用的组方合理性及剂量配比。方法采用尿酸或酵母膏致小鼠高尿酸血症模型以及二甲苯致小鼠耳肿胀模型,按照Codrug软件,得优化组方。结果萆薢总皂苷组、牛膝总皂苷+萆薢总皂苷组和阳性对照组小鼠血清尿酸水平明显降低(P<0.01),牛膝总皂苷480、240、120mg.kg-1组小鼠血清尿酸水平与模型组比较差异无显著性。牛膝总皂苷、萆薢总皂苷对小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用,两者合用抑制率强于单药组,两药配伍理论优化剂量为牛膝总皂苷为120mg.kg-1,萆薢总皂苷为240mg.kg-1。结论萆薢总皂苷能降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平,而牛膝总皂苷对小鼠血清尿酸水平无明显影响。两者均有较强的抗炎作用,合用抗炎作用增强,优化组方为牛膝总皂苷∶萆薢总皂苷=1∶2。

牛膝总皂甙对早孕小白鼠的繁殖毒性

【目的】研究牛膝总皂甙(TSA)对早孕小白鼠的繁殖毒性与适口性,为进一步开发利用牛膝植物资源、研制开发新型植物源性灭鼠药品奠定基础。【方法】采用1 000,500和250 mg/kg剂量的TSA,对早孕期小鼠连续灌胃处理5 d,然后检查小鼠的妊娠与胚胎发育情况;向饲料中按质量分数0.5%,1%和2%添加TSA,采用饲料混毒法测定TSA对小白鼠的适口性。【结果】在试验期间,早孕小鼠体增重随TSA剂量增加有降低的趋势,甚至出现负增长,但其对试鼠的采食量没有明显影响;TSA中、高剂量组(500和1 000 mg/kg)能够引起小鼠子宫重量降低及肝、肾和脾脏的损伤;随着灌胃剂量的增加,TSA呈现明显的抗早孕作用,最高剂量组抗小鼠早孕活性最好,雌鼠终止妊娠率和死胎率分别为91.75%和89.39%;适口性试验表明,饵料中TSA的质量分数为1%和0.5%时,试鼠的摄食系数分别为0.35和0.47。【结论】TSA对试鼠有较好的抗早孕活性及较好的适口性,可作为一种新的植物源鼠类不育剂加以研究利用。

怀牛膝中总皂苷含量测定

目的建立怀牛膝中总皂苷含量测定方法。方法采用高氯酸-香草醛比色法,其原理是怀牛膝中总皂苷与该显色剂反应后,可在相应波长处(544 nm)进行测量。结果比色法所测定的线形范围为0.2-1.2 mg,相关系数r=0.998 4。平均回收率96.0%,RSD=3.23%。结论本法简便、准确,可用于怀牛膝总皂苷含量测定。

牛膝总皂苷干预兔膝骨关节炎滑膜液来源细胞因子的表达

背景:既往研究表明,滑膜液中细胞因子是引起膝关节疼痛的重要因素。牛膝能够促进膝关节软骨细胞修复, 降低膝关节炎症水平,减轻膝关节疼痛。牛膝能否调控膝关节炎滑膜液内细胞因子水平,目前尚不清楚。 目的:探讨牛膝总皂苷对实验兔膝骨关节炎滑膜液来源细胞因子谱的影响。 方法:8 只新西兰兔随机分为实验组和对照组,每组4 只,均采用石膏外固定的方法构建右膝关节炎模型, 造模后第2 天开始给予牛膝总皂苷及蒸馏水灌服,灌服2 周后测定关节活动度,抽取膝关节滑膜液,采用 Luminex 法测定炎性细胞因子和趋化因子水平,采用ELISA 法检测基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶2、 基质金属蛋白酶3 水平。实验经广州中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号:2018-31)。 结果与结论:①治疗后,实验组膝关节活动度明显大于对照组(P < 0.05);②与对照组相比,实验组治疗后炎 性因子白细胞介素1α、白细胞介素1β、白细胞介素10、肿瘤坏死因子α,趋化因子CCL3、CXCL8、CXCL9, 基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3 的表达水平均降低,差异有显著性意义(P < 0.05);③结果表明,牛膝总皂苷能够缓解骨关节炎兔膝关节活动障碍,降低膝关节滑膜液中细胞因子水平,从而起 到减轻炎症和保护软骨的作用。

牛膝总皂苷治疗膝骨关节炎的药理研究进展

膝骨关节炎是关节组织降解和修复失衡,最终导致软骨退化、软骨下骨硬化、滑膜炎症的过程。现代医学的常用药物如止痛药、非甾体抗炎药、硫酸氨基葡萄糖和糖皮质激素类等只能暂时缓解膝骨关节炎的疼痛,但无法阻止关节炎的进展。牛膝是中医治疗膝骨关节炎的常见药物,牛膝总皂苷是其主要活性成分。近年研究发现牛膝总皂苷具有抗炎,抑制软骨基质降解等作用。该文对牛膝总皂苷治疗膝骨关节炎的药理研究成果作一综述,为临床治疗膝骨关节炎提供参考。

牛膝总皂苷体外干预膝关节炎软骨细胞增殖与凋亡的研究

目的观察不同浓度牛膝总皂苷对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法实验分为空白组、牛膝总皂苷0.01 mg/mL组、牛膝总皂苷0.05 mg/mL组、牛膝总皂苷0.1 mg/mL组、牛膝总皂苷0.5 mg/mL组、牛膝总皂苷1 mg/mL组。取第3代人膝骨关节炎软骨细胞,空白组常规培养,牛膝总皂苷各组加入相应浓度牛膝总皂苷D/F12培养,采用CCK-8法及Annexin V-FITC/PI检测细胞增殖和凋亡情况,应用放射免疫分析法检测IL-1β水平,应用ELISA法检测TNF-α水平。结果牛膝总皂苷各组培养第3天细胞增殖达到高峰(空白组第5天达到高峰),之后呈下降趋势,牛膝总皂苷0.5 mg/mL组各时间点细胞增殖OD值均明显高于其他组(P均<0.05)。培养3 d后,牛膝总皂苷0.01 mg/mL和0.05 mg/mL组早期和晚期细胞凋亡率及总凋亡率与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);牛膝总皂苷0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL组早期和晚期细胞凋亡率及总凋亡率均明显低于空白组(P均<0.05),且牛膝总皂苷0.5 mg/mL组细胞总凋亡率明显低于牛膝总皂苷0.1 mg/mL和1 mg/mL组(P均<0.05)。干预72 h,牛膝总皂苷各组IL-1β、TNF-α水平均明显低于空白组(P均<0.05),且牛膝总皂苷浓度越高,IL-1β、TNF-α水平越低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论牛膝总皂苷体外能有效促进人膝骨关节炎软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡及软骨细胞中IL-1β、TNF-α的表达。

萆薢牛膝总皂苷对尿酸钠诱导的大鼠急性痛风性关节炎的防治作用

目的:研究萆薢牛膝总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用及机制。方法:大鼠ig总皂苷高、中、低剂量(200、60、20mg/kg)、吲哚美辛组(5mg/kg),每天1次,连续5天。采用微晶型尿酸钠关节腔内注射诱导大鼠急性痛风性关节炎,测定关节肿胀度、关节浸出液中炎症因子、细胞因子水平,并进行病理学检查。结果:模型组大鼠关节明显肿胀,活动减少,右后肢弯曲或抬起,肿胀关节浸出液中NO、TNF-α、PGE2、IL-1β、IL-6和IL-8水平显著增高,关节滑膜多核白细胞、单核细胞浸润,并可见针状尿酸盐结晶沉着。总皂苷200、60mg/kg组大鼠关节肿胀度明显降低,关节及周围组织病理学病变显著减轻。200mg/kg组大鼠步态明显好转,关节浸出液中NO、TNF-α、PGE2和IL-6、IL-1β均显著降低,60mg/kg组大鼠肿胀关节浸出液中TNF-α、PGE2显著降低。结论:总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎有明显的防治作用,其机制可能是抑制炎症细胞趋化和激活,抑制炎症因子与细胞因子的合成与释放。

牛膝总皂苷对实验兔膝骨关节炎滑膜组织的影响

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)对兔膝骨关节炎(OA)模型滑膜组织的影响。方法:将40只实验兔分为正常组8只、OA模型组32只,OA造模成功后将OA模型组分为OA模型阳性对照组、OA模型空白组、OA模型TSA低剂量组、OA模型TSA中剂量组、OA模型TSA高剂量组,各6只,分别予硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水、TSA低剂量、TSA中剂量、TSA高剂量灌胃2个月后进行关节粘连改善度测定、滑膜组织病理HE染色、滑膜炎KRENN评分、β-catenin蛋白免疫组化检测,及关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3含量检测。结果:实验兔OA模型造模成功后灌胃2个月,与OA模型空白组关节粘改善度比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA低、中、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.01);滑膜HE染色和滑膜炎评分比较,OA模型空白组见大量滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列紊乱,滑膜组织周边可见较多毛细血管增生,呈重度滑膜炎表现,OA模型阳性对照组见中度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列不规则,滑膜组织周边可见少量毛细血管增生,呈中度滑膜炎表现,OA模型TSA高剂量组见轻度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列尚规则,滑膜组织周边可见微量毛细血管增生,呈轻度滑膜炎表现;β-catenin蛋白免疫组化比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA高剂量组与OA模型空白组比较,差异有统计学意义(P<0.01),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05);各组与正常组比较TNF-1,IL-1β,MMP-3指标差异有统计学意义(P<0.05),OA模型TSA高剂量组与OA模型阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),两者与OA模型空白组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:牛膝总皂苷能有效抑制OA滑膜炎症,改善关节粘连度,降低滑膜组织β-catenin蛋白表达以及减少关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3因子含量,其作用机理有待进一步探索。

牛膝总皂苷含药关节液对骨关节炎体外软骨细胞增殖及凋亡的实验研究

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)含药关节液对兔骨关节炎(OA)体外软骨细胞增殖及凋亡的影响。方法:将30只兔分为TSA组、硫酸氨基葡萄糖组、空白对照组,每组10只,分别予TSA、硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水灌胃7d后制备含药关节液;进行OA造模,鉴定OA造模成功后体外提取关节软骨细胞进行培养、鉴定。将P3代软骨细胞分为TSA组、硫酸氨基葡萄糖组、空白对照组、经典软骨增殖组,分别用10%TSA含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%硫酸氨基葡萄糖含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%空白含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液进行培养,对培养后的软骨细胞进行细胞形态学观察,用CCK-8法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白表达,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:OA软骨细胞体外分离成功,经甲苯胺蓝染色鉴定细胞为软骨细胞来源;CCK-8法观察四组细胞生长曲线,绘制的生长曲线符合Logistic生长曲线规律,TSA组在第2～7天细胞增殖速度明显高于其它3组,差异有统计学意义(P<0.05);连续培养7d后,与空白对照组比较,TSA组Ⅱ型胶原蛋白表达显著,差异有统计学意义(P<0.01),硫酸氨基葡萄糖组、经典软骨增殖组Ⅱ型胶原蛋白表达明显,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测显示,与空白对照组(总凋亡率为17.61%±1.19%)比较,经典软骨增殖组(总凋亡率为16.50%±1.42%)细胞凋亡减少不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,TSA组(总凋亡率为5.15%±1.96%)、硫酸氨基葡萄糖组(总凋亡率为7.76%±1.72%)细胞凋亡减少明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:TSA含药关节液能有效提高细胞活力、促进软骨细胞增殖、提高Ⅱ型胶原蛋白表达,且降低软骨细胞早期、晚期凋亡率,对证实TSA是牛膝作用于软骨细胞的主要物质基础具有重要意义。