延龄草总皂苷的黑曲霉发酵工艺及提取条件研究

该文对延龄草总皂苷的最佳提取方法进行筛选,并通过紫外分光光度法与高效液相色谱法对发酵前后药液进行对比分析,在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken响应面实验研究了黑曲霉接种量、发酵时间和发酵温度对延龄草中总皂苷提取率的影响。结果表明:延龄草总皂苷最佳提取方法为75%乙醇回流法,其最佳发酵条件为黑曲霉接种量2.25%,发酵时间6d,发酵温度27℃,在此条件下总皂苷提取率为8.620%,与预测结果基本一致。

延龄草总皂苷对2-VO模型大鼠认知功能及神经血管单元的作用

目的观察延龄草总皂苷(TST)对大鼠的血管性认知障碍及其神经血管单元(NVU)和神经环路完整性的作用。方法将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TST组及多奈哌齐组,每组12只。除假手术组外,其他3组大鼠均采用双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立脑缺血后认知障碍模型。造模后,TST组给予TST100mg/kg灌胃,多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.45mg/kg灌胃,对照组及模型组给予同体积的生理盐水,1次/d,连续28d。采用水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能;HE、尼氏染色观察大鼠脑组织病理改变;免疫组织化学染色观察大鼠海马突触核蛋白(SYN)的表达情况;高尔基染色观察海马神经元树突棘的变化;Westernblotting检测各组大鼠海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-10、血管内皮生长因子A(VEGFA)、突触后致密蛋白95(PSD95)和生长关联蛋白43(GAP43)表达水平。结果水迷宫实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比均减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比增多(P<0.05)。与假手术组比较,模型组海马CA1区神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量增多(P<0.05)。Westernblotting结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马组织IL-1β、VEGFA表达水平升高(P<0.05),PSD95、GAP43表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组IL-1β表达水平均降低(P<0.05),VEGFA、IL-10、GAP43表达水平均升高(P<0.05)。结论TST可能通过促进突触可塑性和NVU重塑减轻2-VO模型大鼠的认知障碍,有望用于卒中的治疗。

延龄草总皂苷对脑缺血大鼠皮层微结构及氨基酸类神经递质的影响

目的观察延龄草总皂苷(total saponins of Trillium tschonoskii Maxim.,TSTT)对脑缺血大鼠皮层微结构及氨基酸类神经递质的影响,探讨其抗脑缺血损伤的药理机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组及TSTT低剂量(33 mg/kg)组、TSTT中剂量(65 mg/kg)组、TSTT高剂量(130 mg/kg)组,每组8只。各组大鼠分别进行相应干预,连续干预15天后,采用透射电镜观察皮层组织神经元、线粒体和突触超微结构;OPA-柱前衍生高效液相色谱荧光检测法检测谷氨酸(glutamic acid,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量。结果(1)透射电镜观察结果显示:模型组大鼠神经元及线粒体微结构损伤,突触数量减少,突触间隙模糊不清,突触后致密物(postsynaptic density,PSD)长度变短,厚度变薄;与模型组比较,TSTT中剂量组(P<0.01)显著降低了神经元评分,神经元核膜较为完整。TSTT低、中、高剂量组均显著降低了线粒体评分(P<0.01),减轻了线粒体双层膜破损程度,内部嵴结构仍可见。TSTT高剂量组显著增加了突触数量(P<0.01);TSTT低、中剂量组显著增加了突触数量、PSD长度和厚度(P<0.01)。(2)高效液相色谱检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠皮层Glu/GABA比值明显增高(P<0.05);TSTT中剂量组大鼠皮层GABA含量明显升高,Glu/GABA比值明显降低(P<0.05)。结论TSTT可通过减轻脑缺血大鼠线粒体、神经元和突触等结构损伤,下调Glu和GABA递质氨基酸的比值,提高突触可塑性发挥脑保护作用。

延龄草总皂苷对缺血卒中后认知障碍大鼠Tau蛋白磷酸化及p38MAPK/NF-κB通路的影响

目的基于Tau蛋白磷酸化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/核因子-κB(NF-κB)通路探讨延龄草总皂苷对缺血卒中后认知障碍大鼠的神经保护作用。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和延龄草总皂苷低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余组大鼠均采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立缺血卒中后认知障碍模型。术后延龄草总皂苷低、中、高剂量分别给予延龄草总皂苷50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg灌胃(灌胃量5 mL/kg),假手术组、模型组给予等量双蒸水灌胃,均1次/d,连续灌胃8周。末次灌胃结束后,采用Zausinger六分法对大鼠进行神经功能缺损程度评分,Morris水迷宫试验评估大鼠的认知功能情况,尼氏染色观察海马神经元损伤情况,RT-qPCR技术检测海马组织中桥接整合因子1(Bin1)mRNA表达情况,Western blot法检测海马组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Tau、磷酸化Tau(p-Tau)、p38MAPK、NF-κB蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠出现明显神经功能缺损和认知功能障碍,海马皮质区及CA1区神经元数量较少,尼氏小体数量明显减少(P<0.05),海马组织中Bin1 mRNA相对表达量和NLRP3、Tau、p-Tau、p38MAPK、NF-κB蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,延龄草总皂苷各组大鼠神经功能缺损评分均明显降低(P均<0.05),逃避潜伏期均明显缩短(P均<0.05),穿越平台次数均明显增加(P均<0.05),海马CA1区尼氏小体数量明显增多(P均<0.05),海马组织中Bin1 mRNA相对表达量和NLRP3、Tau、p-Tau、p38MAPK、NF-κB蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论延龄草总皂苷对缺血卒中后认知障碍大鼠具有神经保护作用,可改善大鼠的认知功能,机制可能与其抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,下调NLRP3、Tau、p-Tau、p38MAPK、NF-κB蛋白表达有关。

延龄草总皂苷通过抑制Keap-1/Nrf2/HO-1、Nrf2/SLC7A11/GPX4通路介导的铁死亡减轻脑缺血/再灌注损伤

目的观察延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对大鼠脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)的神经保护作用,并探讨铁死亡相关机制。方法建立CIRI模型后,将雄性SD大鼠分为TST(0.1 g·kg^(-1))组、盐酸多奈哌齐(0.45 mg·kg^(-1))组、模型组以及假手术组。通过Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆能力,利用Zea-Longa法评估神经功能变化,同时,使用TTC染色观察脑梗死面积,利用HE和Nissl染色检查脑组织的病理变化;为了进一步阐明其作用机制,我们利用透射电子显微镜观察线粒体结构的变化,并测定GSH-PX、SOD、MDA的含量。最后,通过免疫组化、免疫荧光法检测GPX4、Nrf2蛋白的表达。并采用Western blot检测大鼠Keap1/Nrf2/HO-1、Nrf2/SLC7A11/GPX4通路蛋白的表达。结果与假手术组大鼠相比,模型组表现出学习记忆能力下降,脑梗死面积明显增大,神经功能评分较高(P<0.01),神经元排列松散紊乱,尼氏小体减少。同时,线粒体呈现铁死亡状态。铁死亡相关:SOD、GSH-PX活力降低(P<0.01),MDA升高(P<0.01)。GPX4、Nrf2阳性细胞的表达明显减少,GPX4荧光强度降低。此外,海马的Keap1、Nrf2、HO-1、SLC7A11、GPX4的蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。给予TST后得到改善。结论TST具有神经保护作用,提升了学习记忆能力,降低了氧化应激水平,其机制可能与抑制Keap-1/Nrf2/HO-1、Nrf2/SLC7A11/GPX4通路介导的铁死亡有关。

延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。

延龄草总皂苷对D-gal诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(D-gal,皮下注射)、干预组(TST,灌胃给予低、中、高3个剂量),每组10只,连续给药6周。Morris水迷宫评价大鼠认知功能;HE、Nissl染色观察海马及皮质组织形态;免疫组织化学法检测Pink1、Parkin的定位表达;Western blot检测Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62、Beclin1的表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);大鼠海马组织内神经元数量明显减少;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达减少;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显下降,p62的表达明显升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,TST各剂量组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增多、停留在平台所在象限时间增加(P<0.05);海马神经元数量明显增多;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达增多;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显升高,p62的表达明显降低(P<0.05)。结论TST具有明确的神经保护作用,对D-gal所致衰老大鼠的学习记忆降低具有改善作用,其机制可能与Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响

目的探讨延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响及作用机制。方法采用改良线栓法制备卒中后认知障碍大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、延龄草总皂苷组(100 mg/kg)和盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),每组10只,另设假手术组10只,给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,HE和尼氏染色观察脑组织病理变化,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况,高尔基染色观察海马树突棘变化,Western blot检测海马组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、SYN、PSD-95、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著减少(P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元排列紊乱、尼氏体减少,凋亡神经元数量增加,树突棘密度减小(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,延龄草总皂苷组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著减少(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著增加(P<0.05,P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元饱满、尼氏体增多,凋亡神经元数量减少,树突棘密度增加(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论延龄草总皂苷可显著改善卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力,抑制神经元和突触损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制神经元凋亡有关。

不同产地延龄草中延龄草总皂苷的含量测定

目的建立延龄草中总皂苷的含量测定方法,比较研究不同产地延龄草中总皂苷的含量。方法以薯蓣皂苷元为对照品,采用分光光度法,高氯酸显色,在410nm处测定吸光度,计算延龄草中总皂苷的含量。结果薯蓣皂苷元在4.12-49.44μg范围内与吸光度值呈良好的线性关系（r=0.9989）,平均回收率为97.3%,RSD为2.5%。结论该方法操作简便、准确、灵敏、重复性好,可用于延龄草样品中总皂苷的含量测定,不同产地样品,总皂苷含量有差异。

延龄草中总皂苷的含量测定

目的：建立延龄草总皂苷的含量测定方法。方法：以薯蓣皂苷元为对照品，采用分光光度法，高氯酸显色，在408nm处测定吸光度，计算延龄草中总皂苷的含量。结果：薯蓣皂苷元在0．01～0．06mg·mL^-1的浓度范围内与吸光度值呈良好线性关系（R^2=0．9996），方法的平均回收率为99．43％，RSD为2．64％。结论：建立了延龄草中总皂苷含量测定方法，该方法操作简便、准确、灵敏、重现性好，可用于延龄草的质量控制。

延龄草甾体皂苷对脑缺血大鼠星形胶质细胞GFAP、Cx43及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响

目的观察延龄草甾体皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、缝隙连接蛋白43(Cx43)及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响,探讨其改善脑缺血的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金纳多组(60 mg/kg)及TSTT低、高剂量组(33、65 mg/kg),每组12只。分别进行相应干预,连续15 d。采用透射电镜观察神经元、星形胶质细胞超微结构,免疫荧光染色检测缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达,RT-PCR检测缺血周围脑组织Wnt3a、Dvl3基因表达。结果透射电镜观察结果显示:模型组大鼠神经元核明显固缩,核仁消失,染色质电子密度增加,细胞质内细胞器明显减少,可见大量空泡,星形胶质细胞肿胀明显,染色质消融,核周围出现空白区,细胞器减少;与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠神经元和星形胶质细胞超微结构损伤明显减轻。免疫荧光染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血周围脑组织Dvl3基因表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,TSTT高剂量组和金纳多组大鼠缺血周围脑组织Wnt3a和Dvl3基因表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论TSTT可通过上调Wnt3a/Dvl3基因表达、下调GFAP和Cx43表达,抑制星形胶质细胞异常活化,减轻脑缺血大鼠神经元、星形胶质细胞超微结构损伤。

延龄草总皂苷对佐剂性关节炎模型大鼠的改善作用及机制

目的:研究延龄草总皂苷(TTM)对佐剂性关节炎模型大鼠的改善作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为造模组(n=44)和空白组(n=6),造模组大鼠注射完全弗氏佐剂以复制佐剂性关节炎模型,空白组大鼠同法注射等体积生理盐水。将造模成功的大鼠分为模型组、雷公藤多苷片组(40mg/kg)和TTM低、中、高剂量组(50、100、200mg/kg),每组6只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃生理盐水,每天1次,连续9d。末次灌胃后,测定大鼠体质量、足肿胀度(双侧),并进行关节炎性评分;测定大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量;观察大鼠踝关节病理形态学变化;检测大鼠膝关节组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)的蛋白表达水平;检测大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠双侧足肿胀度,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,膝关节组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达水平,踝关节滑膜组织中NLRP3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);体质量显著降低(P<0.05);滑膜细胞增生明显,可见滑膜组织充血、炎性细胞浸润等。与模型组比较,TTM各剂量组大鼠上述指标水平大部分均显著逆转(P<0.05或P<0.01);滑膜细胞增生、滑膜组织充血及软骨细胞破坏等病理改变均减轻,炎症细胞浸润减少。结论:TTM可改善大鼠类风湿性关节炎;其作用机制可能与抑制NLRP3/caspase-1信号通路的活性,降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达有关。

延龄草总皂苷对D-半乳糖诱导的SD大鼠心肌线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草苷(TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的大鼠心肌组织保护作用及其对心肌线粒体自噬的影响。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、D-gal模型组(200 mg·kg^(-1),sc)和D-gal+TST 50,100和200 mg·kg^(-1)组(ig给予TST,2 h后sc给予D-gal),连续给药7周。心脏取血检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBD)和谷草转氨酶(GOT)水平;HE染色法观察大鼠心肌组织病理变化;免疫组织化学染色检测线粒体外膜结构域包含蛋白FUN141(FUNDC1)和线粒体BNIP3L膜蛋白(NIX)的定位和表达;Western印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链LC3Ⅱ/Ⅰ比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、Beclin1、P62、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、E3泛素-连接酶活性帕金森病蛋白2(Parkin)、FUNDC1和NIX蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组大鼠血清CK,CK-MB,LDH,HBD和GOT水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示,D-gal模型组大鼠心肌细胞明显萎缩并伴脂肪变性;免疫组化结果显示,FUNDC1和NIX蛋白表达降低(P<0.01);Western印迹结果显示,LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1、PINK1、Parkin、FUNDC1和NIX蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),P62表达升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,D-gal+TST 50,100和200 mg·kg^(-1)组大鼠血清总心肌酶谱各项指标均显著下降(P<0.05,P<0.01),心肌损伤明显改善,LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1、PINK1、Parkin、FUNDC1和NIX蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),D-gal+TST 200 mg·kg^(-1)组P62蛋白表达水平无显著性差异。结论TST对D-gal诱导的大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与PINK1,Parkin,FUNDC1和NIX蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷提取纯化工艺及其抗肿瘤活性

目的优选延龄草总皂苷提取纯化工艺,并考察其体内外抗肿瘤活性。方法以出膏率和延龄草总皂苷提取率为指标,单因素、正交实验优化提取工艺;采用大孔吸附树脂技术,通过静、动态吸附与解吸实验,优选最佳纯化工艺;噻唑蓝(MTT)法测定总皂苷对3种肿瘤细胞株MCF-7、HeLa、A549的抑制作用,并研究其对S180小鼠移植瘤的作用。结果最佳提取工艺条件为乙醇体积分数80%,超声时间40 min,料液比1:50,提取温度60℃;纯化工艺为D101大孔树脂,最大上样量为80 mL,洗脱剂为75%乙醇,洗脱体积4 BV,收集洗脱液,纯化得到的固形物中总皂苷含量为61.45%;延龄草总皂苷体外对3种肿瘤细胞均有一定的抑制作用,IC50分别为(7.89±1.13),(8.18±1.04),(28.5±3.16)μg·mL-1,体内对S180荷瘤小鼠的抑制率为12.6%~58.0%。结论该工艺稳定、可行,所得到的总皂苷具有较好的抗肿瘤活性。

基于AMPK/Sirt1通路延龄草总皂苷对脑缺血再灌注继发肺损伤大鼠的保护作用

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对脑缺血再灌注大鼠肺组织的影响及其可能机制。方法:选取80只雄性大鼠随机分为8组:假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平,200 mg·kg^-1)、TST低(50 mg·kg^-1)、中(100 mg·kg^-1)、高(200 mg·kg^-1)剂量组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(Sirt1)通路抑制剂组(1 mg·kg^-1)、TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组(200 mg·kg^-1+1 mg·kg^-1),每组10只。苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肺组织病理变化;检测各组大鼠氧分压(PaO2);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液中炎性因子水平;检测各组大鼠肺组织氧化应激水平。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、Sirt1蛋白表达水平。结果:模型组大鼠肺损伤评分较假手术组高,而阳性对照组与TST不同剂量组均较模型组低(P<0.05);模型组大鼠PaO2、氧合指数(OI)、超氧化物歧化酶(SOD)、p-AMPK及Sirt1蛋白表达水平均较假手术组低,而阳性对照组与TST组(高剂量)较模型组高,AMPK/Sirt1通路抑制剂组与TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST组低,AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组低(P<0.05);模型组IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6、肺组织湿干质量比、MDA、ROS、Ac-NF-κB p65蛋白表达水平均较假手术组高,而阳性对照组与TST组(高剂量组)较模型组低,AMPK/Sirt1通路抑制剂组与TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST组高,AMPK/Sirt1通路抑制剂组较TST+AMPK/Sirt1通路抑制剂组高(P<0.05);阳性对照组与TST组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TST可通过激活AMPK/Sirt1通路并减轻肺组织炎性反应及氧化应激反应进而减缓脑缺血再灌注继发肺损伤。

延龄草总皂苷对血管性认知障碍的干预作用及其机制

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)通过内质网应激(ERS)调控NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体对血管性认知障碍(VCI)大鼠神经保护作用。方法:将60只雄性SD大鼠分为4组(n=10):假手术组(Sham)、模型组(VCI,双侧颈总动脉结扎(BCCAO)法)、TST干预组(TST,100 mg/kg)以及盐酸多奈哌齐阳性组(Positive,0.45 mg/kg),连续给药4周。Morris水迷宫评价学习记忆能力;HE、Nissl染色观察组织形态变化;Western blot法检测内质网相关蛋白GRP78、IRE1、XBP1;炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1β。结果:与Sham组相比,VCI组大鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数与目标象限停留时间百分比缩短(P<0.01);VCI大鼠海马区细胞损伤,出现明显核固缩现象、神经元数量减少,胞体结构损伤;VCI组内质网、炎症小体相关蛋白上升(P<0.05或P<0.01);与VCI组比较,TST组与Positive组寻台时间减少,穿越平台次数与占目标象限时间比值延长(P<0.05或P<0.01),其中Positive组与VCI组相比穿越平台次数差异不明显(P>0.05);TST组与Positive组细胞损伤、核固缩明显减轻、神经元数量明显增多;TST组与Positive组内质网相关蛋白、炎症小体相关蛋白不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。结论:TST对VCI大鼠具有神经保护作用,其机制可能与ERS参与调控NLRP3炎症小体的途径有关。