辽东楤木叶总皂苷提取工艺研究

以总皂苷提取率、两种质量标志性皂苷成分的提取率为指标探索辽东楤木叶药材中皂苷的提取工艺。分别考察药材浸泡达饱和的时间、回流提取时乙醇溶液用量、提取时间、提取次数以及乙醇溶液浓度对辽东楤木叶皂苷提取率的影响,并采用正交实验法对辽东楤木叶总皂苷的提取工艺进行优化。结果表明,药材经乙醇水溶液浸泡3h以上达到吸收饱和;加8倍量的70%乙醇水溶液回流提取3次,每次2.5h,所得的辽东楤木叶总皂苷提取率及两种指标性皂苷提取率均较高。

辽东楤木总皂苷联合酵母硒对C57小鼠的降血糖作用

[目的]探究辽东楤木总皂苷联合酵母硒对2型糖尿病小鼠血糖的影响,为研制治疗糖尿病的新药物提供参考。[方法]选用60只C57小鼠,10只为对照组(A组),其余采用30 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病模型作为试验组。建模成功后随机分成B、C、D、E、F组,即模型组、二甲双胍组、辽东楤木总皂苷+酵母硒(120 mg/kg+1.5 mg/kg)组、辽东楤木总皂苷+酵母硒(120 mg/kg+1.0 mg/kg)组、辽东楤木总皂苷+酵母硒(120 mg/kg+0.5 mg/kg)组,每组各10只,连续治疗4周,采用血糖仪、全自动糖化血红蛋白分析仪、全自动生化分析仪对C57小鼠尾静脉血液中空腹血糖、糖化血红蛋白、血脂、口服葡萄糖耐量进行检测。[结果]与B组相比,各试验组均有不同程度的变化,C组、D组优于其他各组,且二组之间差异不显著。D组FBG降低了4.86 mmol/L,HbA1c水平下降了3.87%,TC、TG和LDL水平分别下降了1.18、0.02、1.72 mmol/L,而HDL显著升高0.42 mmol/L。口服糖耐量检测2 h恢复至餐前水平。[结论]120 mg/kg辽东楤木总皂苷联合1.5 mg/kg酵母硒降血糖效果最佳。

星点设计-效应面法优化龙芽楤木叶提取工艺

目的:星点设计-效应面法优化龙芽楤木叶的提取工艺。方法:以乙醇体积分数、提取时间、溶媒比为自变量,龙芽楤木叶总皂苷含量得率为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用效应面法选取较佳工艺,并进行预测分析。结果:确定最优提取工艺为20倍量70%乙醇,提取3次,每次2.5 h,提取预测值与理论值偏差为-2.41%,二项式拟合复相关系数r=0.9617。结论:星点设计-效应面法优化的龙芽楤木叶提取工艺,方法简便,精密度更高,可预测性较优。

辽东楤木叶总皂苷抗人乳腺癌作用的研究

目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)抗人乳腺癌的作用及可能机制。方法采用MTT法检测ETS对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。Annexin V-FITC双染法和PI单染法检测ETS对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。建立人乳腺癌荷瘤小鼠模型,验证ETS的体内抗肿瘤作用。结果 ETS对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖有明显的抑制。ETS可诱导MCF-7细胞的凋亡,并呈现明显的量效关系。ETS随剂量的增加,周期阻滞作用逐渐由S期阻滞向G0/G1期阻滞转变。ETS对人乳腺癌细胞体内的增长有明显的抑制作用。结论 ETS体内和体外均具有抗人乳腺癌作用,这些作用可能与诱导细胞凋亡、改变细胞周期分布有关。

闪式提取法提取龙牙楤木中总皂苷的工艺研究

优选龙牙楤木总皂苷的最佳提取工艺。采用闪式提取法提取龙牙楤木总皂苷,运用正交实验法对影响总皂苷提取率的条件进行优化,采用比色法进行含量测定。确定最佳工艺为用70%乙醇,180V提取电压,提取90s。该工艺简单,迅速,提取率高,可用于龙牙楤木中总皂苷的提取。

辽东楤木叶有效部位中楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ及总皂苷质量控制

目的建立HPLC-ELSD法测定辽东楤木叶中楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ量及可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量的方法。方法采用HPLC-ELSD法测定楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ,Diamonsil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,体积流量0.7 mL/min,柱温35℃,漂移管温度115℃,载气体积流量3.2 L/min。采用可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量,检测波长550 nm。结果楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ、辽东楤木叶总皂苷分别在1.253～8.768μg(r=0.999 7),1.251～8.767μg(r=0.999 7),0.1549～1.549 mg(r=0.999 8)呈良好的线性关系;加样回收率分别为99.67%(RSD为1.30%),99.17%(RSD为0.97%),99.57%(RSD为0.53%)。结论本实验采用的方法简便快速、准确、重复性好,可用于辽东楤木叶有效部位中皂苷类成分的质量控制。

辽东楤木叶总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200 mg/kg)ETS培养的结肠癌HT-29细胞增殖率,Hoechst33258染色和激光共聚焦成像检测细胞凋亡,并观察凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 ETS可诱导HT-29细胞发生凋亡,且凋亡作用在一定范围内呈剂量依赖性;ETS可使HT-29细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高(P<0.05,P<0.01),且呈明显的量效关系。结论 ETS可诱导HT-29细胞凋亡,其凋亡机制可能与降低Bcl-2、升高Bax的表达相关。

龙牙楤木总皂苷通过调控AMPK/Nrf2信号抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究龙牙楤木总皂苷对AMPK/Nrf2信号通路的影响。方法:将人心肌细胞AC16进行体外培养,分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、铁离子螯合剂对照组,铁离子螯合剂组、龙牙楤木总皂苷低(0.02μg/mL)浓度组、龙牙楤木总皂苷中(0.1μg/mL)浓度组、龙牙楤木总皂苷高(0.5μg/mL)浓度组,丹参滴丸(50μg/mL)阳性对照组,AMPK抑制剂Compound C(5μg/mL)+龙牙楤木总皂苷(0.5μg/mL)组,Nrf2抑制剂ML385(2μg/mL)+龙牙楤木总皂苷(0.5μg/mL)组。MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞内Fe^(2+)、ROS水平;免疫荧光法检测脂质过氧化物及GPX4、ACSL4蛋白表达;qRT-PCR检测GPX4、ACSL4 mRNA表达,Western Blot检测GPX4、ACSL4、p-AMPK、Nrf2蛋白表达;结果:与空白对照组比较,模型组细胞存活率、GPX4 mRNA表达显著降低,Fe^(2+)含量、ROS和脂质过氧化水平、ACSL4 mRNA表达显著升高,p-AMPK、Nrf2蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,铁离子螯合剂组细胞存活率、GPX4 mRNA表达显著升高,Fe^(2+)、ROS、脂质过氧化水平及ACSL4 mRNA表达显著降低(P<0.01);龙牙楤木总皂苷各组和丹参滴丸组细胞存活率及GPX4、p-AMPK、Nrf2蛋白表达显著升高,心肌细胞中Fe^(2+)、ROS、脂质过氧化水平及ACSL4蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与龙牙楤木总皂苷组比较,Compound C+龙牙楤木总皂苷组和ML385+龙牙楤木总皂苷组细胞存活率显著降低,Fe^(2+)含量显著升高,Nrf2蛋白表达显著降低,Compound C+龙牙楤木总皂苷组ROS和脂质过氧化水平显著升高,p-AMPK蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:龙牙楤木总皂苷可通过激活AMPK/Nrf2信号通路,抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡。

辽东楤木叶中一个三萜皂苷

经过乙醇溶液提取、正丁醇萃取、硅胶柱色谱分离,从辽东楤木(Aralia elata)的叶中分离得到2个三萜皂苷化合物。利用化学显色法、HPLC谱、核磁共振谱方法鉴定,确定其中一个化合物为辽东楤木叶中首次分得的化合物,该化合物名称为3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齐墩果酸。

辽东楤木叶中齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯的分离与鉴定

经过乙醇溶液提取、正丁醇萃取、色谱法分离,从辽东楤木(Aralia elata)的叶中分离并鉴定了1个三萜皂苷化合物。利用化学显色法、HPLC谱、核磁共振谱和质谱方法鉴定,确定该化合物为齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯,是第一次从成熟的辽东楤木叶中分离得到。

辽东楤木叶总皂苷胶囊对心血管系统和呼吸功能的影响

目的评价辽东楤木叶总皂苷胶囊对心血管系统和呼吸功能的影响。方法 Beagle犬24只,设空心胶囊组、辽东楤木叶总皂苷胶囊低剂量组(20 mg/kg)、中剂量组(60 mg/kg)、高剂量组(162 mg/kg),每组6只,雌雄各半,单次口服给药,空心胶囊组给药剂量同高剂量组。监测给药前后体温、血压、呼吸频率、呼吸强度、心电指标的变化。结果 Beagle犬体温、平均动脉压、舒张压、收缩压、呼吸频率、呼吸强度、RR间期、心率、PR间期、P波时程、QRS时程、QT间期、QTc F在给药前后比较无统计学意义(P> 0.05)。结论辽东楤木叶总皂苷胶囊对心血管系统和呼吸功能没有影响。

辽宁楤木嫩叶中三萜皂苷的分离与结构鉴定

目的:对辽宁楤木Aralia elata(Miq.)Seem.嫩叶中的三萜皂苷类成分进行分离与鉴定。方法:通过乙醇回流提取,运用硅胶、AB-8型大孔吸附树脂、ODS柱、制备HPLC进行分离纯化,利用NMR和MS谱进行化合物的结构鉴定。结果:从辽宁楤木嫩叶中分离得到15个化合物,分别鉴定为:常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(1)、楤木皂苷A(2)、刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(3)、齐墩果酸-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、anchusosid 2(6)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、竹节参皂苷Ⅳa(9)、randianin(10)、macranthoside A(11)、常春藤苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(12)、齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(13)、常春藤皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(14)、刺囊酸-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(15)。结论:其中,化合物4、8、11、13、14为首次从该属植物中分离得到。

龙牙楤木体细胞胚发生及植株再生过程中主要药用成分的累积

目的研究龙牙楤木体细胞胚发生、发育及植株再生过程中,胚性愈伤组织、球形胚、子叶胚、体胚苗的生长和其主要药用成分总皂苷、齐墩果酸、总黄酮的累积情况。方法采用组织培养诱导体细胞胚发生,测量体细胞胚发育过程中各发育时期的生物生长量,并用分光光度法分析其中的总皂苷和总黄酮的量,采用高效液相法测定齐墩果酸的量。结果随着胚性愈伤组织的分化、发育,其生长速率由胚性愈伤组织的每周0.09 g,递增到体细胞胚苗的每周0.32 g。胚性愈伤组织和各不同发育时期体胚中总皂苷和齐墩果酸量的趋势相同,即体胚苗>球形体胚>胚性愈伤组织>子叶体细胞胚;与总黄酮的量不同,即体胚苗>子叶体细胞胚>胚性愈伤组织>球形体胚。结论胚性愈伤组织和各不同发育时期体胚中,总皂苷、齐墩果酸、总黄酮的生长速率最高的是体胚苗,分别为每周6.72、3.42、7.36 mg。

辽东楤木叶总皂苷的HPLC及抗肿瘤作用谱效关系分析

目的:对辽东楤木叶总皂苷进行HPLC分析并确定不同的极性部位,利用C18反相硅胶(ODS)柱分离获得不同极性部位,比较不同部位的体外抗肿瘤作用效果。方法:辽东楤木叶经70%乙醇提取后通过AB-8型大孔树脂柱,获得总皂苷,用不同体积分数甲醇经ODS柱洗脱分离获得经HPLC确定的不同部位。利用噻唑蓝(MTT)比色法测试不同部位对人肺腺癌细胞株(A549),人宫颈癌细胞株(He La)和人结肠癌细胞株(HT-29)的体外生长抑制作用。结果:由总皂苷HPLC的保留时间确定了5个极性部位,分别为A(保留时间20 min以前的部位,ODS柱上0~25%甲醇洗脱组分),B(保留时间20~45 min,ODS柱上30%~45%甲醇洗脱组分),C(保留时间50~75 min,ODS柱上50%~65%甲醇洗脱组分),D(保留时间80~110 min,ODS柱上70%~75%甲醇洗脱组分)和E(保留时间>110 min,ODS柱上80%~100%甲醇洗脱组分)。5个部位给药48 h后对3种细胞的抑制作用明显不同,A部位对3种癌细胞均无抑制作用;B部位对3种癌细胞抑制作用微弱;C,D,E部位对3种癌细胞表现出较强的抑制作用,且明显强于总皂苷,最佳的D部位对A549,Hella和HT-29抑制作用的半抑制浓度分别为4.06,4.29,3.60 mg·L^(-1)。结论:辽东楤木叶总皂苷经HPLC分析后,利用ODS柱进行分离,可获得其抗肿瘤作用的有效部位及最佳部位。

龙牙楤木总皂苷含量测定及其抗炎镇痛活性评价

建立了一种龙牙楤木中总皂苷的含量测定方法,比较了龙牙楤木根皮和茎皮中总皂苷含量,并研究了龙牙愡木的抗炎镇痛作用。采用超声辅助提取,用紫外-可见分光光度法,以齐墩果酸为对照品建立标准曲线;以5%香草醛-冰醋酸为显色剂,检测波长550nm,用比色法测定总皂苷含量。结果显示所建立的方法稳定可靠,龙牙楤木不同部位皂苷含量差异较大,根皮总皂苷含量为43.50mg/g,而茎皮为24.38mg/g。总皂苷在0.02~0.10mg/mL(R^2=0.999 6)质量浓度范围内呈良好线性关系,根皮和茎皮的平均回收率分别为100.12%(RSD=1.10%)和99.84%(RSD=1.77%)。采用醋酸致小鼠扭体试验和耳廓肿胀试验研究龙牙楤木总皂苷抗炎镇痛活性,结果表明龙牙楤木总皂苷能显著减轻醋酸对试验小鼠内脏所致的疼痛(P<0.05)和降低由二甲苯所致实验小鼠耳廓的肿胀程度(P<0.05),显示出较强的抗炎镇痛作用,且根皮的作用效果比茎皮好。龙牙愡木抗炎镇痛活性可能与其总皂苷含量呈正相关。建立的总皂苷含量测定方法简便、准确、重现性好,可作为龙牙楤木根皮与茎皮中总皂苷的含量测定方法。

黑龙江凤凰山不同海拔及不同采收期辽东楤木叶中2种皂苷类成分含量的比较

目的:比较黑龙江凤凰山地带不同海拔及不同采收期辽东楤木叶中三萜皂苷3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)][β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-刺囊酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(简写为ECA)和3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(以下简称为OLA)的含量,了解这一区域采收辽东楤木叶的最佳时间和海拔高度。方法:用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测试,色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃;流动相为乙腈、水二元梯度系统;进样量10μL,流速1.0 m L·min^(-1);载气流速3.2 L·min^(-1);漂移管温度110℃。结果:两种三萜皂苷在各自测定的范围内均呈良好线性关系(r均为0.999 8),平均加样回收率分别为97.71%,98.06%。各批次供试品中OLA的含量都远高于ECA。从6月初至9月初,两种皂苷含量几乎都呈递增趋势,6月至8月增幅很大,差别显著,8月至9月增幅较小,甚至略减;不同海拔高度条件下同时期的叶中两种皂苷含量没有显著性差异。结论:所用测试方法简单、快捷、重复性好,可为凤凰山地带辽东楤木叶的质量控制提供依据。

辽东楤木叶总皂苷对荷结肠癌细胞裸鼠移植瘤TLR-4/NF-κB信号通路及炎性因子的影响

目的:观察辽东楤木叶总皂苷(ETS)对荷瘤裸鼠人结肠癌HT-29移植瘤Toll样受体-4/核转录因子-κB(TLR-4/NF-κB)信号通路及血清中炎性因子的影响,从而探讨其抑瘤机制。方法:将人结肠癌HT-29细胞株接种于50只裸鼠的右腋部皮下,建立人结肠癌异位皮下移植瘤的动物模型。将接种后的裸鼠随机分为5组,每组10只,即模型组,ETS低、中、高剂量组(37. 5,75,150 mg·kg-1),5-氟尿嘧啶组(20 mg·kg-1)。分组后2 d进行给药,5-氟尿嘧啶组腹腔注射给药,隔日1次; ETS低、中、高组给药;模型组给灌胃等体积的生理盐水;连续给药8周。眼眶取血,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中TLR-4,NF-κB mRNA表达水平;光学显微镜和透射电子显微镜下观察ETS对荷瘤裸鼠人结肠癌HT-29移植瘤形态学方面的影响。结果:病理组织学和超微病理学实验显示各给药组肿瘤组织均有不同程度的损伤,与模型组比较,ETS低、中、高剂量组及5-氟脲嘧啶组对荷瘤裸鼠人结肠癌移植瘤均有不同程度的抑制作用(P <0. 05,P <0. 01),4组抑瘤率分别是20. 14%,32. 43%,59. 56%,63. 58%;与模型组比较,ETS各剂量组TLR-4,NF-κB mRNA及TNF-α,IL-1水平表达明显降低(P <0. 05)。结论:ETS可有效抑制结肠癌肿瘤的生长,其机制可能与调控TLR-4/NF-κB信号通路,减少炎性因子表达有关。

辽东楤木叶总皂苷高效薄层色谱指纹图谱分析

目的:建立辽东楤木叶总皂苷高效薄层色谱指纹图谱,并分析不同产地不同采收期的辽东楤木叶成分的差别。方法:采用高效硅胶G薄层板(20 cm×20 cm)载样,以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸-水(9. 5∶10∶20∶0. 5∶5)为展开剂,以10%浓硫酸乙醇溶液为显色剂,于恒温鼓风干燥箱里100℃条件下加热至斑点清晰,置于365 nm紫外光下照射获得其显色后的荧光高效薄层色谱图,经软件组合处理生成斑点灰度峰曲线,建立共有模式,并进行相似度分析及聚类分析。结果:获得分离度良好、斑点清晰的高效薄层色谱指纹图谱,建立了辽东楤木叶总皂苷薄层色谱指纹图谱共有模式,由10个共有斑点峰组成,并指认了其中的4个斑点峰代表的具体成分。分析表明不同地区8月初至9月中旬的辽东楤木叶相似度较高;聚类分析将11个不同批次的样品聚为一大类。结论:建立的薄层色谱指纹图谱方法简单、快速、可靠,可用于辽东楤木叶药材的鉴定和质量控制评价。确定东北地区8月采收的辽东楤木叶药材均符合质量要求,可作为以总皂苷为主要药效部位的药材使用。