穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型PLA2R和IgG4表达的影响及其机制

目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor, PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那普利组(10 mg/kg)、低和高剂量穿山龙总皂苷组(80 mg/kg、160 mg/kg),每组各8只。除对照组,其余4组采用Border法制备膜性肾病模型,造模成功后,贝那普利组灌胃给予贝那普利10 mg/(kg·d),低和高剂量穿山龙总皂苷组分别灌胃给予穿山龙总皂苷80 mg/(kg·d)、160 mg/(kg·d),对照组、模型组灌胃给予10 ml/(kg·d)生理盐水。连续给药4周后,检测24 h尿蛋白、白蛋白、血肌酐、血尿素氮、尿酸水平,HE染色观察肾脏病理改变,蛋白免疫印迹法检测肾脏中M型PLA2R、IgG4、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated phosphoinositide 3-kinase, p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶(Heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果 与模型组比较,贝那普利组、高剂量穿山龙总皂苷组白蛋白水平明显升高,血肌酐、血尿素氮、尿酸水平明显降低,差异均有统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,贝那普利组、低剂量和高剂量穿山龙总皂苷组肾脏病理改变明显改善,24 h尿蛋白水平及肾脏中M型PLA2R、IgG4、p-PI3K、p-AKT表达水平明显降低,肾脏中Nrf2、HO-1表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与降低PLA2R、IgG4表达,抑制PI3K/AKT通路,激活Nrf2/HO-1通路相关。

穿山龙总皂苷对高尿酸血症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸代谢的影响

目的:探究穿山龙总皂苷对高尿酸血症(HUA)大鼠肠道菌群及短链脂肪酸的影响。方法:30只SD大鼠随机分为3组,分别为空白组(Control)、模型组(Model)、穿山龙总皂苷组(TSRDN),每组10只。空白组正常饲养,其余组连续35 d给予10%酵母饲料和5%氧嗪酸钾溶液进行HUA模型复制,从第15~35天,穿山龙总皂苷组按照480 mg/kg的剂量灌胃给予穿山龙总皂苷溶液。结果:连续造模14 d即可复制HUA模型,SUA、SBUN水平升高(P<0.01)。连续给药干预21 d,穿山龙总皂苷能够显著降低SUA、SBUN水平(P<0.01)。HUA大鼠肠道菌群中的厚壁菌门和拟杆菌门的丰度相对较高(P<0.01)。穿山龙总皂苷能显著升高HUA大鼠肠道菌群厚壁菌门、乳酸杆菌属、梭菌属、瘤胃菌属、鼠李糖乳杆菌种、约氏乳杆菌种、罗伊氏乳杆菌种的丰度(P<0.05,P<0.01)。利用GC-MS技术检测大鼠粪便中SCFA的含量变化,结果显示穿山龙总皂苷能显著提升HUA大鼠粪便中丙酸、丁酸的含量(P<0.01)。结论:穿山龙总皂苷可以调控菌群代谢产物SCFA的含量变化,促进有益菌在肠道内繁殖,同时抑制有害菌的生长。

穿山龙总皂苷通过TGF-β/Smad信号通路减轻类风湿关节炎相关间质性肺病的肺纤维化

目的探讨穿山龙总皂苷(total saponins from rhizoma dioscoreae nipponicae,TSRDN)在类风湿关节炎间质性肺病(rheumatoid arthritis-associated interstitial lung disease,RA-ILD)纤维化发病机制中的治疗可能性和潜在机制。方法在DBA/1小鼠胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型中气管内滴注博来霉素(bleomycin,BLM)建立新的体内RA-ILD模型和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞(HFL1)体外模型中研究穿山龙总皂苷对RA-ILD肺纤维化的药理作用和可能机制。苏木精-伊红染色(HE)观察小鼠踝关节和肺组织的病理变化,Masson染色用于检查肺组织的纤维化程度,MTT法用于检测穿山龙总皂苷对细胞活力的影响,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(WB)、免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光(IF)等方法分析TGF-β/Smad途径的基因和蛋白表达情况。结果穿山龙总皂苷可以改善BLM诱导的RA-ILD小鼠肺功能,减轻肺组织和关节的病理变化。在体外,穿山龙总皂苷抑制TGF-β1诱导的HFL1细胞中I型胶原蛋白(Collagen I)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白和mRNA表达。此外,穿山龙总皂苷在体外和体内降低了由TGF-β1激活的p-Smad2/3的表达。结论穿山龙总皂苷可以减轻RA-ILD的肺纤维化,其机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路实现的。

穿山龙总皂苷通过JAK2/STAT3通路对哮喘大鼠肺功能及肺组织炎症和气道重塑的影响

[目的]探讨穿山龙总皂苷对哮喘大鼠气道上皮细胞损伤的影响及对Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路的调节作用。[方法]采用卵清蛋白诱导建立哮喘大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、穿山龙总皂苷低剂量组、穿山龙总皂苷中剂量组和穿山龙总皂苷高剂量组,另设正常对照组,支气管插管测定大鼠肺顺应性和肺弹性阻力,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺泡灌洗液中白介素(IL)-4、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察支气管病理损伤,实时荧光定量(qRT-PCR)法检测支气管组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad2 mRNA水平,蛋白印迹法检测p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量。[结果]正常组大鼠肺组织结构正常完整,无炎性细胞浸润;模型组大鼠肺组织炎症中性粒细胞浸润、间质水肿、肺泡间隔增厚、肺泡内及间质斑片状出血;穿山龙低、中和高剂量组大鼠肺组织病理损伤减轻。与正常对照组比较,模型组大鼠肺顺应性降低,肺弹性阻力、IL-4、IL-6和IFN-γ水平、TGF-β1和Smad2 mRNA水平升高以及p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3升高(P<0.05);与模型组比较,穿山龙总皂苷低、中和高剂量组大鼠肺顺应性升高,肺弹性阻力,IL-4、IL-6和IFN-γ水平,TGF-β1和Smad2 m RNA水平降低以及p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3降低(P<0.05),其中各指标以穿山龙总皂苷高剂量组变化最为显著,其次为穿山龙中剂量组和穿山龙低剂量组(P<0.05)。[结论]穿山龙总皂苷可减轻哮喘大鼠气道上皮细胞损伤,降低炎症反应,改善气道重塑,增强肺顺应性,降低肺弹性阻力,其可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路发挥作用。

穿龙薯蓣总皂苷中甾体皂苷的分离与鉴定

目的 研究穿龙薯蓣总皂苷中水溶性甾体皂苷 ,寻找新的生物活性化合物。方法 用硅胶柱色谱、薄层色谱及高效液相色谱等进行分离 ,通过酸水解、理化常数和波谱学分析 (IR ,NMR ,MS ,HMQC ,HMBC)鉴定化合物结构。结果 从穿龙薯蓣总皂苷中分得 2个甾体皂苷 ( 1个水难溶性皂苷和 1个水溶性皂苷 ) ,其化学结构分别鉴定为薯蓣皂苷元 3 O {α L 鼠李糖 ( 1→ 2 ) [β D 葡萄糖 ( 1→ 3 ) ]} β D 葡糖皂苷 (I) ,薯蓣皂苷元 3 O [α L 鼠李糖 ( 1→ 3 ) α L 鼠李糖 ( 1→ 4 ) α L 鼠李糖 ( 1→ 4 ) ] β D 葡糖皂苷 (II)。 结论 II为首次从穿龙薯蓣中分离得到的新化合物 ,命名为穿龙薯蓣皂苷Dc。

穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元含量的毛细管气相色谱法研究

目的 :建立毛细管气相色谱法测定穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元的含量。方法 :采用HP - 1(Methylsiloxane)不锈钢毛细管柱 ,柱箱温度 2 70℃ ,柱头压 12 3 7kPa ,汽化室温度 330℃ ,检测器温度 310℃ ,载气 (N2 )流速 2 0mL·min- 1 ,分流比 40∶1,对穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元含量进行测定。结果 :能将薯蓣皂苷元及其主要杂质进行分离 ,薯蓣皂苷元在 35 2～ 175 8ng范围内峰面积与其浓度线性关系良好 (r=0 9996 ) ,样品平均回收率为 95 6 5 % ,精密度RSD为 1 0 % (n=5 )。结论 :该法测定样品无需衍生化 ,分离效果好 ,分析快速准确。

穿山龙中甾体皂苷的分离鉴定

目的分离、鉴定穿山龙即穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)根茎中的甾体皂苷类化合物。方法采用溶剂提取、硅胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离,通过化学和光谱学方法鉴定化合物的结构。结果分离得到4种甾体皂苷类化合物,其化学结构分别鉴定为:薯蓣皂苷(Ⅰ),纤细薯蓣皂苷(Ⅱ),26-O-β-D-吡喃葡萄糖基25(R)-22-羟基-呋甾-△^(5(6))-烯- 3β,26-二羟基-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)}-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ),26-O-β-D-吡喃葡萄糖基25(R)-22-羟基-呋甾-△^(5(6))-烯-3β,26-二羟基-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)}-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)。结论化合物Ⅲ,Ⅳ为首次从穿龙薯蓣中分离得到的呋喃甾烷型皂苷。

RP-HPLC法测定穿龙薯蓣总皂甙中薯蓣皂甙元的含量

目的 :建立反相高效液相色谱法测定穿龙薯蓣总皂甙中薯蓣皂甙元的含量。方法 :采用 μBondapakC1 8柱 ,甲醇为流动相 ,流速 1 .0 ml/min,996二极管阵列检测器 ( DAD) ,检测波长为 2 0 8nm,对穿龙薯蓣总皂甙中薯蓣皂甙元含量进行测定。结果 :能将薯蓣皂甙元与其主要杂质分离开来 ,薯蓣皂甙元在 1 .90～ 9.51 μg范围内峰面积与其浓度线性关系良好 ( r=0 .9985) ,样品平均回收率为 96.1 5% ,精密度 RSD为 1 .72 % ( n=5)。结论 :该法测定样品无需要衍生化 ,分离效果好 ,分析快速准确。

穿龙薯蓣总皂甙水解条件的优化

目的 :优化穿龙薯蓣总皂甙水解条件 ,以提高薯蓣皂甙元的含量与得率。方法 :以薯蓣皂甙元的含量为指标 ,应用L9(34 )正交试验设计筛选穿龙薯蓣总皂甙水解条件。结果 :影响水解的主次因素为 :D >A >B >C(A为硫酸浓度 ;B为稀硫酸用量 ;C为回流时间 ;D为与水不相溶的溶剂用量 )。最佳水解条件为 :各加 2 %硫酸和石油醚 (6 0～ 90°C) 10 0ml,回流 4h。结论 :采用优化后的水解条件明显提高薯蓣皂甙元的含量 。

穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364NF-κB p65活性、STAT3及VEGF mRNA表达的影响

目的观察穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 NF-κB p65活性、STAT3表达及VEGF mRNA表达水平的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生的作用机制。方法制备穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)含药血清;取大鼠滑膜细胞株RSC-364经IL-17(10μg/L)和TNF-α(10μg/L)、穿山龙总皂苷含药血清、雷公藤多甙片含药血清单独或联合应用孵育,孵育24 h,提取各组细胞核蛋白用于TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性;提取各组细胞总蛋白后应用Western blot方法观察STAT3蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA的表达情况。结果 IL-17+TNF-α诱导的细胞模型组中NF-κB p65的DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGFmRNA表达水平均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);与细胞模型组相比,雷公藤含药血清组、穿山龙总皂苷含药血清组的NF-κB p65 DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且2组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论本研究证实穿山龙总皂苷含药血清可以抑制NF-κB p65的DNA结合活性及STAT3蛋白的表达,考虑穿山龙总皂苷通过上述信号转导途径来调控血管新生关键因子VEGF的产生,进而抑制RA血管新生。

穿山龙地上部分和根茎总皂苷抗炎活性比较

目的：比较分析穿山龙地上部分和根茎总皂苷抗炎活性,为穿山龙地上部分的开发利用提供实验依据。方法：采用小鼠耳廓肿胀实验、小鼠棉球肉芽肿法和小鼠腹腔液渗出法对同时、同地采收的穿山龙地上部分和根茎水提取物的抗炎作用进行比较研究。结果：穿山龙地上部分总皂苷（to-tal saponins of aerial part of Dioscorea nipponica Makino,TSAPDN）可明显减轻小鼠耳肿胀,降低肉芽肿的重量,减少小鼠腹腔液的渗出,与空白对照组比较差异有显著性（P〈0.05-0.001）;与根茎总皂苷（total saponins of the radicular of Dioscorea nipponica Makino,TSRDN）比较差异无显著性（P〉0.05）。结论：TSAPDN有显著的抗炎作用,其抗炎活性与根茎相近。

穿山龙总皂苷对胶原性关节炎大鼠炎性细胞因子的影响

目的观察穿山龙总皂苷(total saponin from Rhizoma Dioscorea nipponica,TSRDN)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清中炎性细胞因子的影响,初步探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)可能的作用机制。方法建立CIA大鼠模型。于初次免疫后第14天,将造模成功的大鼠随机分为CIA模型组,穿山龙总皂苷高、中、低剂量组,雷公藤组。其中穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别经胃灌服100 mg.kg-1.d-1,50 mg.kg-1.d-1、25 mg.kg-1.d-1剂量的穿山龙总皂苷,雷公藤组灌服12 mg.kg-1.d-1剂量的雷公藤多苷,正常对照组、CIA模型组灌服等体积溶媒。用药后21 d,记录各组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数;测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;观察关节滑膜病理变化。结果经穿山龙总皂苷灌胃治疗21 d后,与模型组相比,治疗组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数有降低趋势(P>0.05),大鼠滑膜增生减轻,炎细胞浸润减少,软骨及骨组织侵蚀破坏减轻,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.01)。结论穿山龙总皂苷能明显降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平,减轻滑膜组织的病理损伤,表明其对治疗类风湿关节炎有一定作用。

穿山龙水溶性总皂苷对类风湿患者成纤维样滑膜细胞核因子κB p65的抑制作用

【目的】观察穿山龙水溶性总皂苷对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞核因子κB(NF-κB)p65及其抑制因子IκB-α蛋白水平和mRNA含量的影响。【方法】培养类风湿患者成纤维样滑膜细胞,分为穿山龙水溶性总皂苷低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组,10、20、30 mg/L),模型组,同时设立空白对照组;经药物干预后,采用Western blot法测定NF-κB和IκB-α蛋白水平,采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测成纤维细胞中NF-κB和IκB-αmRNA的表达。【结果】经穿山龙干预后的关节炎患者成纤维样滑膜细胞的NF-κB活化受到显著抑制,蛋白及基因表达水平较模型组显著下降(P<0.05),IκB-α蛋白及基因表达显著提升(P<0.05)。【结论】穿山龙水溶性总皂苷可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的核转录因子的表达,这可能是穿山龙治疗类风湿关节炎的机理之一。

正交试验法优选穿山龙总皂苷的提取工艺

目的 优选穿山龙总皂苷的提取工艺。方法 采用正交试验法 ,以总皂苷提取率和总皂苷中薯蓣皂苷元的含量为指标进行试验。结果 加入碱的量对指标均具有非常显著性差异 ,而浸渍时间均无显著性差异。优选的最优工艺为 :加入 5 %的碱 ,密闭 12h ,浸渍 2 4h。结论 该工艺简单 。

穿山龙总皂苷对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨穿山龙总皂苷对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆能力的影响及其作用机制。方法:昆明种小鼠70只随机分成5组,分别为假手术组,模型组,穿山龙总皂苷高、中、低剂量组(100、50、25 mg·kg-1·d-1),灌胃给药连续15 d。给药12 d采用双侧颈总动脉夹闭,建立反复脑缺血再灌注致小鼠学习记忆障碍模型,术后24 h和48 h通过跳台、Y型电迷宫实验,观察穿山龙总皂苷对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆能力的影响,同时对脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量进行检测。结果:与模型组比较,穿山龙总皂苷可明显改善反复脑缺血再灌注小鼠的学习记忆能力(P<0.05或P<0.01),增强脑组织中SOD活性(P<0.05或P<0.01),降低MDA和NO含量(P<0.05或P<0.01)。结论:穿山龙总皂苷对反复脑缺血再灌注损伤小鼠的学习记忆功能具有改善作用,其机制可能与增强脑组织中SOD活力,降低MDA和NO含量有关。

大孔吸附树脂法富集纯化穿山龙总皂苷工艺研究

目的:探讨大孔吸附树脂法富集纯化穿山龙总皂苷的工艺。方法:以洗脱所得总固物的量及总固物中穿山龙总皂苷的含量为考察指标,考察树脂型号、洗脱溶剂用量等工艺条件与药材-树脂比例、色谱柱径高比、洗脱流速、收集洗脱液的量等工艺参数。结果:最佳工艺为药材-树脂(1:2),色谱柱径高比1:13,收集8BV洗脱液的量。总固物得率为5.79%～6.27%,穿山龙总皂苷的含量为55.08%～57.79%。结论:方法操作简单、安全、稳定,适合广泛应用推广。

穿龙薯蓣皂素的清洁生产工艺

以穿龙薯蓣为实验材料,首先将纤维素、淀粉和皂苷复合物分离,然后对皂苷复合物酸水解获取皂素。结果表明,在1 mol.L-1硫酸溶液酸水解150 min、水解物中和水洗至近中性、20 min.次-1的回流速率下提取4 h的条件下,可获得最佳皂素提取率0.837%、纤维提取率13.86%、淀粉提取率12.34%。本工艺酸用量减少了80%、废水量减少了75%,废水COD值只有传统工艺废水的56%,大幅降低了污染程度,为实现穿龙薯蓣的资源化利用和皂素的清洁化生产提供技术支持。

穿龙薯蓣皂苷的提取及其副产物的分离

采用改进后的"分离法加工薯蓣植物"分别得到穿龙薯蓣水溶性皂苷及水不溶性皂苷,同时分离出淀粉及其纤维素,并水解制备微晶纤维素.经大孔树脂法精制得到穿龙薯蓣水溶性皂苷提取率为0.33%,ZTC澄清剂精制得到水不溶性皂苷提取率为1.02%,淀粉提取率为16.46%,微晶纤维素提取率为18.95%.通过与对照品微晶纤维素对比发现,实验制得的微晶纤维素各项参数基本达到商品级要求,为根茎类药材中有效成分的分离提取及副产物的综合利用提供基础数据.

不同性别及去花对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和总皂苷含量的影响

目的:探讨不同性别及去花对薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷含量的影响。方法:采用高效液相色谱法和比色法,测定不同时期穿龙薯蓣根茎中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和总皂苷的含量。结果:雌性植株薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和总皂苷的含量显著高于雄性,雌性去花后含量明显降低,与雄性植株接近。结论:三者具有相似的季节积累规律,各发育时期含量变化不大。

大孔吸附树脂富集穿龙薯蓣水溶性皂苷工艺研究

以穿龙薯蓣水溶性皂苷的洗脱率、精制度为指标,考察大孔吸附树脂对穿龙薯蓣水溶性皂苷的吸附性能和洗脱参数。实验结果表明:经ZTC澄清剂澄清后的穿龙薯蓣水溶性皂苷提取液40 mL(6.57 mg/mL)上大孔树脂柱(R25 mm×H100 mm,干重6.0 g),用蒸馏水80 mL、50%乙醇100 mL依次洗脱。穿龙薯蓣水溶性皂苷富集于50%乙醇洗脱液部位,洗脱率达80%以上,干燥后总固物中穿龙薯蓣水溶性皂苷纯度可达26.1%,达到较好的纯化目的。