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猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达
被引量:
7
1
作者
王大鹏
吴斌
+2 位作者
周锐
唐先春
陈焕春
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期271-274,共4页
皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克...
皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Westernblot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。
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关键词
猪源
d
型产毒素多杀性巴氏杆菌
toxa
基因
克隆
表达
下载PDF
职称材料
猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达
2
作者
黄百花
刘文娟
+5 位作者
李志勇
谭春萍
周松峰
谭颖翌
罗佳
陆芹章
《广西农业科学》
CAS
CSCD
2010年第6期598-601,共4页
根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克...
根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。
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关键词
猪
d
型产毒素多杀巴氏杆菌
毒素基因
分段
原核表达
下载PDF
职称材料
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达
被引量:
1
3
作者
江涛
谭春萍
+3 位作者
任灵芝
黄百花
刘文娟
陆芹章
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2010年第12期64-68,共5页
参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌...
参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌毒素。SDS-PAGE和Western blot分析证实,该表达产物以包涵体形式存在,大小约175 ku。动物试验结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性。通过间接ELISA方法检测抗毒素的猪阳性血清,表达重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性,为多杀性巴氏杆菌毒素进一步应用奠定了基础。
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关键词
猪源
d
-型产毒素多杀巴氏杆菌
毒素基因
原核表达
下载PDF
职称材料
1株藏猪源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性
被引量:
5
4
作者
贡嘎
王一飞
+3 位作者
格桑卓玛
索朗斯珠
尼玛央宗
拉巴次仁
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期611-617,共7页
为了解西藏地区病死藏猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型、毒力基因分布情况,对无菌采集的60份病死猪样品(肺和扁桃体各30份)进行细菌分离纯化后,对菌株进行荚膜分型及常见毒力基因的鉴定。结果表明,从藏猪肺病料中成功获得了1株与伊朗家禽...
为了解西藏地区病死藏猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型、毒力基因分布情况,对无菌采集的60份病死猪样品(肺和扁桃体各30份)进行细菌分离纯化后,对菌株进行荚膜分型及常见毒力基因的鉴定。结果表明,从藏猪肺病料中成功获得了1株与伊朗家禽多杀性巴氏杆菌(AY225343)亲缘关系较近的D型猪源多杀性巴氏杆菌,分离率达3.33%(1/30),但没有在扁桃体中分离到该菌株。经鉴定,该菌株携带16种毒力基因,且对四环素、多西环素、氨苄西林、阿莫西林具有耐药性,对卡那霉素、链霉素、新霉素、大观霉素、环丙沙星、诺氟沙星和恩诺沙星较敏感。本研究结果为西藏猪源多杀性巴氏杆菌病原学和流行病学调查提供了参考依据。
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关键词
多杀性巴氏杆菌
荚膜血清
d
型
分离鉴定
毒力基因
耐药性
藏猪
下载PDF
职称材料
题名
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达
被引量:
7
1
作者
王大鹏
吴斌
周锐
唐先春
陈焕春
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物传染病分室
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期271-274,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30471292)
湖北省科技攻关项目(2001AA201)
文摘
皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Westernblot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。
关键词
猪源
d
型产毒素多杀性巴氏杆菌
toxa
基因
克隆
表达
Keywords
toxigenic pasteurella multocida serotype d from swine
,
toxa
clone
expression
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达
2
作者
黄百花
刘文娟
李志勇
谭春萍
周松峰
谭颖翌
罗佳
陆芹章
机构
广西大学动物科学技术学院
出处
《广西农业科学》
CAS
CSCD
2010年第6期598-601,共4页
基金
广西科技攻关项目(桂科攻0537008-313)
文摘
根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。
关键词
猪
d
型产毒素多杀巴氏杆菌
毒素基因
分段
原核表达
Keywords
toxigenic
pasteurella
multocida
of
swine
serotype
d
sub-
toxa
gene
fragment
prokaryotic expression.
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达
被引量:
1
3
作者
江涛
谭春萍
任灵芝
黄百花
刘文娟
陆芹章
机构
广西大学动物科学技术学院
固始县动物疫病预防控制中心
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2010年第12期64-68,共5页
文摘
参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌毒素。SDS-PAGE和Western blot分析证实,该表达产物以包涵体形式存在,大小约175 ku。动物试验结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性。通过间接ELISA方法检测抗毒素的猪阳性血清,表达重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性,为多杀性巴氏杆菌毒素进一步应用奠定了基础。
关键词
猪源
d
-型产毒素多杀巴氏杆菌
毒素基因
原核表达
Keywords
swine
toxigenic
pasteurella
multocida
serotype
d
toxa
gene
prokaryotic expression
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
1株藏猪源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性
被引量:
5
4
作者
贡嘎
王一飞
格桑卓玛
索朗斯珠
尼玛央宗
拉巴次仁
机构
西藏农牧学院动物科学学院
西藏自治区动物疫病预防控制中心
出处
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期611-617,共7页
基金
元亨基金(2018)
西藏自治区科技厅2020年度重点项目(202005)。
文摘
为了解西藏地区病死藏猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型、毒力基因分布情况,对无菌采集的60份病死猪样品(肺和扁桃体各30份)进行细菌分离纯化后,对菌株进行荚膜分型及常见毒力基因的鉴定。结果表明,从藏猪肺病料中成功获得了1株与伊朗家禽多杀性巴氏杆菌(AY225343)亲缘关系较近的D型猪源多杀性巴氏杆菌,分离率达3.33%(1/30),但没有在扁桃体中分离到该菌株。经鉴定,该菌株携带16种毒力基因,且对四环素、多西环素、氨苄西林、阿莫西林具有耐药性,对卡那霉素、链霉素、新霉素、大观霉素、环丙沙星、诺氟沙星和恩诺沙星较敏感。本研究结果为西藏猪源多杀性巴氏杆菌病原学和流行病学调查提供了参考依据。
关键词
多杀性巴氏杆菌
荚膜血清
d
型
分离鉴定
毒力基因
耐药性
藏猪
Keywords
pasteurella
multocida
capsular
serotype
d
isolation an
d
i
d
entification
virulence gene
d
rug resistance
Tibetan
swine
分类号
S855.12 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达
王大鹏
吴斌
周锐
唐先春
陈焕春
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
7
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职称材料
2
猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达
黄百花
刘文娟
李志勇
谭春萍
周松峰
谭颖翌
罗佳
陆芹章
《广西农业科学》
CAS
CSCD
2010
0
下载PDF
职称材料
3
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达
江涛
谭春萍
任灵芝
黄百花
刘文娟
陆芹章
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
4
1株藏猪源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性
贡嘎
王一飞
格桑卓玛
索朗斯珠
尼玛央宗
拉巴次仁
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2020
5
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职称材料
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