T2毒素在原位灌流大鼠小肠中的吸收和代谢动力学

应用原位肠灌流标本研究了T2毒素在大鼠小肠中的吸收和代谢功力学,T2毒素对小肠标本进行血管灌流时消除半衰期为46.9 min.主要代谢产物HT2毒素的生成半衰期为12.9 min.当T2毒素由十二指肠注射后再进行灌流时,可同时发生吸收前和吸收后的小肠代谢转化,并主要以HT2,3’-OHHT2等代谢产物的形式吸收,此时毒素在小肠中的吸收和消除半衰期分别为33.0和25.6 min,实验结果表明肠道也是代谢消除T2毒素的主要器官,尤其在消化道中毒时,毒素将经历显著的肠道首过代谢.

T2毒素在灌流大鼠肠肝中的首过效应和代谢动力学

建立并用大鼠在体肠-肝灌流标本研究了T2毒素在大鼠肠肝中的首过效应和代谢转化动力学,T2毒素在大鼠肠肝中的主要代谢产物是HT2,3′-OHHT2和其葡萄糖醛酸结合物,T2毒素具有显著的肠肝首过效应,当毒素(42μg·ml^(-1))由上肠系膜动脉恒速单次灌流(8 ml·min^(-1))肠-肝标本时,穗态肝、肠抽提率分别为0.978和0.454,总有效清除率为7.91 ml·min^(-1),T2毒素在循环灌流大鼠肠-肝标本中的消除半衰期为6.5min,主要代谢产物HT2,3′-OHHT2的生成半衰期分别为8.5和38.5 min,结果表明,T2毒素经消化道中毒后,在肠和肝的首过代谢下能很快地转化为产物,因此,毒素在体内的毒效作用主要由其代谢产物表现出来。

T2毒素对小鼠外周血象和骨髓造血干、祖细胞的作用

T2毒素2.3 mg/kg(相当LD_(30))单次ip后测定小鼠外周血象,BMNC及骨髓CFUs、CFU—GM、CFU—E和BFU—E的改变以了解T2毒素血液毒理的特征.外周血中WBC总数明显减少,RBC和pt无变化.T2毒素虽不影响CFUs的数量,但对CFU—GM、CFU—E和BFU—E均有杀伤作用,中毒后2 h三种细胞存活率达最低值分别为正常的27％、48％和57％,恢复速度甚快,5 d内全部正常.三种细胞的T2毒素剂量活存曲线均为指数坪型.分析了各类造血干细胞对T2毒素敏感性不同的原因可能与各种细胞固有特性和细胞增殖状态有关。

T2毒素对大鼠红细胞膜脂流动性及脂质过氧化的影响

Ｔ２毒素对大鼠红细胞膜脂流动性及脂质过氧化的影响彭双清，杨进生（北京毒物药物研究所，北京１００８５０）Ｔ２毒素是倍半萜类两歧性分子，极易与膜发生作用［１］．它能抑制ＤＮＡ，ＲＮＡ和蛋白质的合成，引起ＤＮＡ单链断裂及多核蛋白体分裂，以及与巯基酶相结合［...

四川阿坝大骨节病病区粮食和T2毒素对大鼠骨关节发育的影响

目的探讨四川阿坝大骨节病(Kaschin-Beck disease,KBD)病区粮食(病粮)和T2毒素干预对大鼠骨关节发育的影响。方法78只断乳的Wistar大鼠,雌雄各半,体重60～65 g。随机分为3组:A组(24只)为病粮饲料喂养;B组(30只)为普通饲料+T2毒素喂养;C组(24只)为普通饲料喂养。分组喂养4周后,组织标本行HE和Masson染色。结果A组和C组在喂养中无死亡,B组有12只死亡。A组大鼠毛发色泽暗,活动较少,体重每周增加8～12g,平均(10.3±2.1)g;B组大鼠毛发色泽暗,活动少,体重每周增加12～16g,平均(14.3±2.1)g;C组大鼠毛发色泽光亮,活动如常,体重每周增加15～20 g,平均(17.7±3.5)g。A组体重增加较B组和C组少(P<0.05);B组体重增加较C组少(P<0.05)。第1周时,A组和B组的骺板在骺板各细胞带均无坏死;第2周时,A组有1只、B组有2只出现肥大细胞带灶状坏死;第4周时,A组有7只、B组有6只出现肥大细胞带灶状坏死和片状坏死,其中A组有2只、B组有3只出现增殖细胞带灶状坏死。C组在第1～4周均未出现坏死。A组和B组骺板胶原Masson染色较C组明显减弱,染色不均匀,软骨细胞坏死区胶原染色消失。第1、2周时,各组大鼠干骺端骨小梁排列整齐,无明显差异;第4周时,C组干骺端骨小梁排列整齐、紧密,B组和A组干骺端均出现较多的成纤维细胞,骨化线不整齐,A组较B组明显。结论病粮和T2毒素干预下大鼠骺板软骨细胞出现灶状及片状坏死,干骺端均出现较多的成纤维细胞,骨化线不整齐;且病粮较T2毒素干预明显,提示病粮中有其他致病因素存在。

抑制肠道细菌丛和非特异性羧酸酯酶对T2毒素在原位灌流大鼠小肠袢中代谢的影响

预先用新霉素和头孢氨苄抑制肠道细菌丛后，Ｔ２毒素在灌流小肠袢内的代谢速度明显减慢，ｔ１／２β由正常的２６ｍｉｎ延长为１３１ｍｉｎ．主要代谢产物ＨＴ２的生成减少．Ｔ２毒素羟化生成３′－羟基ＨＴ２的反应被抑制．当Ｔ２毒素对预先用二异丙基氟磷酸酯抑制酯酶的小肠袢进行肠系膜一门脉血管灌流时．Ｔ２毒素的ｔ１／２β由正常的４７ｍｉｎ延长至１２０ｍｉｎ，ＨＴ２的生成部分被抑制，而３′－ＯＨＨＴ２的生成量显著增加．同时抑制肠道细菌丛和酯酶．Ｔ２毒素在小肠中的代谢转化基本被阻断．实验结果表明，Ｔ２毒素在大鼠小肠中的代谢转化反应主要在肠道细菌丛酶系统和非特异性羧酸酯酶的共同作用下进行．抑制肠道细菌丛酶系统可同时减少Ｔ２毒素在小肠中的水解和羟化反应．而抑制酯酶仅能减少水解反应．与此同时轻化产物增加．

T2毒素对机体内稳态的影响

通过对小鼠微循环观察和大鼠血液酸碱平衡分析试验,研究了T2毒素对机体内稳态的影响。T2毒素单次ip 3.67 mg/kg可引起小鼠严重的微循环障碍。单次sc 0.6 mg/kg可引起大鼠急性代谢性酸中毒,并出现呼吸代偿,表现为反射性过度换气,代偿程度为非完全性,不是复合性酸碱平衡紊乱。

T2毒素单克隆抗体及试剂盒的制备

制备T2单克隆抗体并确定其基本特性,为后期快速检测方法建立奠定基础。利用自制的多抗血清和单克隆抗体,建立酶联免疫吸附试验(ELISA)快速测定方法。结果显示,该方法灵敏、特异,可为大量样本测定储备条件。

3种真菌毒素(ZEN、DON及T2)完全抗原的合成与鉴定

目的:合成玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和T2 3种真菌毒素的完全抗原。方法:将ZEN半抗原、DON及T2与阳离子化的载体蛋白(BSA和OVA)偶联,制备高特异性的完全抗原。用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)检测偶联物及载体蛋白的分子质量,用商品化的ZEN、DON和T2单克隆抗体对偶联物进行免疫滴定验证。结果:平均每个BSA偶联上的ZEN、DON和T2的分子个数分别为20.81,6.03,4.92个,平均每个OVA偶联上的ZEN、DON和T2分子个数分别为7.17,3.05,2.80个,偶联物与ZEN、DON及T2的抗体呈阳性反应。结论:合成的ZEN、DON及T2完全抗原为3种毒素抗体的制备及免疫学方法的建立奠定了基础。

陕西病区粮食真菌及其毒素在克山病、大骨节病病因中作用的比较研究

目的 克山病 (KSD)和大骨节病 (KBD)两病病因至今尚未明了 ,特调查病区粮食真菌及其毒素在两病病因中的作用。方法 用病例对照研究结合实验病理学验证以探索粮食内可疑致病真菌及其相关毒素质量与两病发病的关系。结果 ① 40 2份小麦内培养出的优势菌为链格孢霉 ,其检出率与两病发病之间未见统计学联系 ,未培养出镰刀菌 ;② 2 4份小麦和 2 3份小麦面粉样品内未检出 1 1种镰刀菌毒素中的任一毒素 ,1 4 3份小麦、玉米样品内未检出AOH、AME和ZEN ;③化学纯品T 2毒素 (1 0 0 μg·kg- 1BW·d)致雏鸡KBD模型实验和链格孢霉培养粮 (含AOH 6 5 1 9μg/ g饲料 )致雏鸡KSD、KBD模型实验 ,均未见动物心肌损害和软骨损害等 ;④T 2毒素和MON实验组内 ,检出小型猪关节软骨OC—Ⅲ型损害 ,后一结果对KBD病因研究的参考价值需待更多工作之后才好判定。结论 病例对照研究和实验病理学综合结果不支持两病病因镰刀菌毒素中毒说和链格孢霉毒素中毒说。建议多家协作 ,重复粮食真菌及其毒素的检测 ,以便对两病真菌毒素病因说作出最终评价。

T-2毒素对小鼠骨髓红细胞微核率的影响

ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠随机分成２组，实验组和对照组。实验组小鼠隔日Ｔ２毒素灌胃，持续６周后，观察毒素在体内诱导骨髓嗜多染红细胞（ＰＣＥ）出现微核的情况。实验结果表明，给予１０ｍｇ／ｋｇ体重的Ｔ２毒素可诱导小鼠骨髓微核试验阳性，并且实验组微核率明显高于对照组，差异有显著性（Ｐ＜００５），提示Ｔ２毒素可引起小鼠染色体畸变，具有致畸潜力。

T-2毒素对小鼠致癌作用的病理形态学观察

241只小鼠分别饮用不同浓度的 T-2毒素水溶液7～18个月。病理形态学观察结果表明,T-2毒素有诱发小鼠发生肿瘤的作用。饮水中含T-2毒素0.05mg/kg 可诱发雌性小鼠乳腺癌,发生率达35%,而对照小鼠仅为4%。饮水中含 T-2毒素0.1mg/kg,可诱发雌性小鼠黄体瘤,发生率达10%,而对照小鼠为0%。

镰刀菌毒素急性中毒与急型克山病死亡病因比较

目的 :为急型克山病患者的暴死病因提供一个科学假设。方法 :将文献中报道急型克山病患者发病过程的主要症状与体征 ,与动物镰刀菌毒素急性中毒实验结果进行比较 ,了解两者的异同点。结果 :动物镰刀菌毒素 (T 2毒素为代表 )急性中毒的主要表现有 :小肠粘膜上皮隐窝细胞分裂相减少或消失 ,小肠粘膜上皮细胞计数下降 ,部分绒毛缺上皮细胞覆盖而裸露 ,小肠内含水量增加 ,血容量减少 ,红细胞压积增加 ,血压下降 ,实验动物当天即可死亡 ,而输液抗休克治疗有效。猴中毒实验中亦可见有明显呕吐、稀便、血压下降、周围血管塌陷等表现。结论 :急型克山病患者与镰刀菌毒素急性中毒者临床表现相似点很多。作者提出一个假设 ,即 :急型克山病患者暴死原因很可能是摄入霉变粮食中污染的镰刀菌毒素 ,导致小肠粘膜表皮损伤 ,从而不断引发了呕吐及大量血浆通过小肠内壁渗漏丢失 ,继发低血容性内休克 ,重症患者可暴死。