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一种PCR产物克隆的新方法——T-A克隆法 被引量:23
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作者 李新波 赵小松 +2 位作者 田德志 朱依纯 姚泰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期187-189,共3页
介绍一种PCR产物克隆的新方法———TA克隆法.用改良碱裂解法抽提pBluescriptSK(+)质粒,用EcoRⅤ将pBluescriptSK(+)质粒切成平端,利用TaqDNA聚合酶及dTTP制备pBluesc... 介绍一种PCR产物克隆的新方法———TA克隆法.用改良碱裂解法抽提pBluescriptSK(+)质粒,用EcoRⅤ将pBluescriptSK(+)质粒切成平端,利用TaqDNA聚合酶及dTTP制备pBluescriptSK(+)TA载体.将βactincDNA片段克隆入自制的pBluescriptSK(+)TA载体,经EcoRⅠ及HindⅢ双酶切得到与设定长度一致的βactincDNA片段. 展开更多
关键词 t-a克隆载体 PCR产物 t-a克隆法
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通过T-A克隆技术构建含免疫刺激序列CpG基序的抗SBR DNA疫苗(英文) 被引量:4
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作者 姜广水 刘贤锡 +4 位作者 杨小青 杨丕山 卞继峰 李静 耿昭 《北京口腔医学》 CAS 2002年第3期109-113,共5页
目的 :构建含免疫刺激序列、能够阻止变形链球菌在牙面粘附的防龋DNA疫苗。方法 :根据原核表达质粒 pS BR CTA2 B基因序列 ,设计针对编码变形链球菌表面蛋白抗原AgⅠ /Ⅱ分子中唾液蛋白结合区段 (SBR)的特异性PCR引物 ,利用PCR技术由质... 目的 :构建含免疫刺激序列、能够阻止变形链球菌在牙面粘附的防龋DNA疫苗。方法 :根据原核表达质粒 pS BR CTA2 B基因序列 ,设计针对编码变形链球菌表面蛋白抗原AgⅠ /Ⅱ分子中唾液蛋白结合区段 (SBR)的特异性PCR引物 ,利用PCR技术由质粒 pSBR CTA2 B扩增目的DNA片断 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于中间载体 pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,选择插入方向正确的克隆 ,将目的DNA从中间载体释放 ,再克隆至含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 1。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 1 SBR进行酶切图谱分析和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒 pcD NA3 1 SBR构建成功、开放阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码SBR的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体 pcDNA3 1的适当部位 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA 3 1 展开更多
关键词 免疫刺激序列 CPG基序 龋病 DNA疫苗 t-a克隆
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恶性疟原虫FCC1/HN(CQS)株Pfmdr1、Cg1基因T-A克隆及序列分析 被引量:1
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作者 马长玲 余新炳 +3 位作者 单志新 卞国武 吴忠道 徐劲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期45-50,54,共7页
目的 将恶性疟原虫FCC1/HN株 (CQS)Pfmdr1和Cg1全基因编码区克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其与疟原虫耐药性的关系奠定基础。方法 利用PCR扩增技术 ,分 3个片段从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中 ,特异扩增Pfmdr1全基因编... 目的 将恶性疟原虫FCC1/HN株 (CQS)Pfmdr1和Cg1全基因编码区克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其与疟原虫耐药性的关系奠定基础。方法 利用PCR扩增技术 ,分 3个片段从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中 ,特异扩增Pfmdr1全基因编码序列 ;分 2个片段特异扩增Cg1全基因编码序列。扩增产物经纯化回收后 ,T -A克隆入测序载体 pMD18-T ,转化大肠杆菌 (E coli)JM 10 9,筛选阳性克隆 ,并进行双酶切及PCR扩增鉴定 ,获得阳性重组质粒 ,用Sanger双脱氧链终止法进行DNA测定。结果 CQSFCC1/HN株Pfmdr1基因序列与CQSFc2 7株同源性高 ,全长 4 2 4 8bp ,编码 14 15个氨基酸 ;测得Cg1基因全长为 2 82 0bp ,编码 939个氨基酸 ,存在串联α重复序列。 结论 恶性疟原虫FCC1/HN(CQS)株Pfmdr1和Cg1全基因编码序列的测定 ,为以后研究耐药性虫株的上述基因以及它们与疟原虫耐药性的关系奠定基础。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 耐药性 t-a克隆 序列分析
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用T-A载体克隆技术构建丙肝病毒C+E1区真核表达质粒pSVL-HCV/C+E1 被引量:3
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作者 李益民 周旭 白植生 《微生物学免疫学进展》 1997年第4期25-27,共3页
用BamHI和HindII将丙肝病毒C+E1DNA片段从其克隆载体pGEM3zf-HCV/C+E1上切下,经Taq酶补齐3’末端后插入到载体pSVL-T中,构建成丙肝病毒C+E1真核表达载体pSVL-HCV/C+E1... 用BamHI和HindII将丙肝病毒C+E1DNA片段从其克隆载体pGEM3zf-HCV/C+E1上切下,经Taq酶补齐3’末端后插入到载体pSVL-T中,构建成丙肝病毒C+E1真核表达载体pSVL-HCV/C+E1。本实验中重组效率达64.7%(11/17),正向插入为50%(2/4)。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 t-a载体技术 质粒
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用pB1uescript SK(+)质粒自制T-A载体对DD RT-PCR产物进行克隆
5
作者 李新波 周清平 +4 位作者 赵小松 田德志 丁滢炯 朱依纯 姚泰 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1999年第10期1-2,共2页
mRNA差异显示技术可以显示mRwa表达水平的差异。为了对用mnwA差异显示技术得到的差异条带进行研究,该文用改良碱裂解法抽提pBS质粒,用ECORV将pBS切成平头,利用TaqDNa聚合酶的非模板依赖性,在dryP... mRNA差异显示技术可以显示mRwa表达水平的差异。为了对用mnwA差异显示技术得到的差异条带进行研究,该文用改良碱裂解法抽提pBS质粒,用ECORV将pBS切成平头,利用TaqDNa聚合酶的非模板依赖性,在dryP存在的条件下,用切成平头的PBS质粒自制了T—A克隆载体,对用mRNA差异显示方法得到的差异条带进行了重组,结果表明:用自制T一A克隆载体对PCR产物进行克隆的连接率较高,自制T一A载体进行PCR产物克隆是一简便可行的方法。 展开更多
关键词 t-a克隆 PCR产物 载体 PBS质粒
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高效PCR产物T-A克隆法及影响因素分析
6
作者 孙奋勇 万大方 顾健人 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期293-294,共2页
关键词 聚合酶链反应 分子克隆 t-a克隆法
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Characterization of a novel toxin-antitoxin module,VapBC,encoded by Leptospira interrogans chromosome 被引量:6
7
作者 YiXuanZHANG XiaoKuiGUO +4 位作者 ChuanWU BoBI ShuangXiREN ChunFuWU GuoPingZHAO 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2004年第3期208-216,共9页
Comparative genomic analysis of the coding sequences (CDSs) of Leptospira interrogans revealed a pair of closely linked genes homologous to the vapBC loci of many other bacteria with respect to both deduced amino acid... Comparative genomic analysis of the coding sequences (CDSs) of Leptospira interrogans revealed a pair of closely linked genes homologous to the vapBC loci of many other bacteria with respect to both deduced amino acid sequences and operon organizations. Expression of single vapC gene in Escherichia coli resulted in inhibition of bacterial growth,whereas co-expression of vapBC restored the growth effectively. This phenotype is typical for three other characterized toxin-antitoxin systems of bacteria, i.e., mazEF[1], relBE[2] and chpIK[3]. The VapC proteins of bacteria and a thermophilic archeae, Solfolobus tokodaii, form a structurally distinguished group of toxin different from the other known toxins of bacteria. Phylogenetic analysis of both toxins and antitoxins of all categories indicated that although toxins were evolved from divergent sources and may or may not follow their speciation paths (as indicated by their 16s RNA sequences), co-evolution with their antitoxins was obvious. 展开更多
关键词 Leptospria toxin-antitoxin system VapBC CO-EVOLUTION speciation.
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用3T-A系统更新早期进口数控车床
8
作者 傅师陶 《机床》 CSCD 1990年第9期44-45,50,共3页
本文以北京数控设备厂生产的 FANAUC- BESK3T-A数控系统,更新早期进口的数控车床获得成功。
关键词 3t-a数控系统 数控车床
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CSC9000T-A Gospel for All?
9
《China Textile》 2006年第1期98-99,共2页
关键词 CSC9000t-a Gospel for All OFFICE
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Microchip MXT1665T-A系列汽车级触摸屏控制器
10
《世界电子元器件》 2017年第5期31-31,共1页
Microchip Technology Inc.(美国微芯科技公司)日前推出全新的ma XTouch触摸屏控制器系列。MXT1665T-A系列汽车级触摸屏控制器专门针对汽车大屏幕人机界面(HMI)应用而设计。新器件为汽车驾驶员和乘客带来了与手机多点触摸HMI相同的用户... Microchip Technology Inc.(美国微芯科技公司)日前推出全新的ma XTouch触摸屏控制器系列。MXT1665T-A系列汽车级触摸屏控制器专门针对汽车大屏幕人机界面(HMI)应用而设计。新器件为汽车驾驶员和乘客带来了与手机多点触摸HMI相同的用户体验,适用于8至15英寸大小的屏幕。 展开更多
关键词 触摸屏控制器 Microchip MXT1665t-a 汽车
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闪耀你的尊荣 ECS GF9300T-A
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作者 桃子 《大众硬件》 2008年第10期31-31,共1页
精英GF9300T-A作为黑尊龙家族中的一员,供电电路却是2+1相,但作为A790GXM-A的强劲对手,价格方面应该更具诱惑力。
关键词 精英GF9300t-a 电脑 主板 产品介绍 供电电路
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T-a曲线法求承压含水层参数
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作者 李兴祥 《浙江地质》 2001年第2期44-49,共6页
针对承压含水层抽水试验数据 ,本文提出一种新方法求含水层水文地质参数。并附上有关计算程序。
关键词 t-a曲线法 抽水试验 泰斯公式 承压含水层 水文地质参数
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款款而行的福雅——大福DF 100T-A摩托车
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作者 佩凌 《摩托车信息》 2007年第15期19-19,共1页
在大福2007年的多款新品摩托中.DF100T—A福雅踏板车如同一位送福的仙女。曼妙轻盈,默默地为你送上一份惊喜后又悄然离去,使你有了一种想抓住她的欲望。
关键词 大福DF100t-a摩托车 技术参数 发动机 前照灯 减震器
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金城欧宝路JC150T-A
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作者 付明 《摩托车》 2007年第6期48-48,共1页
外观评价: 意大利设计师设计的欧宝路外观豪华、大气.尽显欧陆情调.在国产车中具有独一无二的外型,看外观欧宝路是一款高挡踏板车。整车外壳质量很好.喷漆亮丽.前大灯有股英气.后尾灯采用LED发光二极管.夜间骑行安全,而且灯... 外观评价: 意大利设计师设计的欧宝路外观豪华、大气.尽显欧陆情调.在国产车中具有独一无二的外型,看外观欧宝路是一款高挡踏板车。整车外壳质量很好.喷漆亮丽.前大灯有股英气.后尾灯采用LED发光二极管.夜间骑行安全,而且灯光很亮。 展开更多
关键词 金城欧宝路JC150t-a LED发光二极管 设计师 外观 意大利 国产车 踏板车
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红颜知己——厦杏三阳迪爵XS100T-A摩托车
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作者 封庆伟 《摩托车信息》 2002年第7期16-16,共1页
1998年以来,由于女性踏板车市场以前所未有的速度发展,女性踏板车的生产也因此逐渐受到各厂家的重视,全力开发适合女性消费者的车款已是当前时势所趋。顺应这一市场需要的变化,厦门厦杏摩托有限公司推出了一款专为都市女性量身打造的迪... 1998年以来,由于女性踏板车市场以前所未有的速度发展,女性踏板车的生产也因此逐渐受到各厂家的重视,全力开发适合女性消费者的车款已是当前时势所趋。顺应这一市场需要的变化,厦门厦杏摩托有限公司推出了一款专为都市女性量身打造的迪爵XS100T-A踏板车,该车各项配备都是针对年轻女性车主的需求和习惯而设计,高科技含量使该车具有不逊于125级踏板车的性能,而且其“缩水”版车身更轻巧、造型更时髦前卫,让都市小姐们每天都能感受到与众不同的生活情趣。为了能让小姐们把车骑到哪儿都能成为众人的目光焦点。 展开更多
关键词 三阳迪爵XS100t-a摩托车 踏板车 厦杏摩托有限公司 设计特点 技术参数
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六通道高温超导导体载流性能和交流损耗特性的仿真研究
16
作者 穆永春 张莉莉 +2 位作者 刘继伟 羊新胜 蒋婧 《核聚变与等离子体物理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期43-50,共8页
为了满足未来聚变装置磁体系统大电流、强磁场以及优良机械特性的要求,提出一种六通道TSTC-CICC高温超导导体,并采用自洽模型和T-A法,对三种结构的六通道高温超导导体的载流性能和交流损耗特性进行了二维有限元仿真研究,其中结构1中带... 为了满足未来聚变装置磁体系统大电流、强磁场以及优良机械特性的要求,提出一种六通道TSTC-CICC高温超导导体,并采用自洽模型和T-A法,对三种结构的六通道高温超导导体的载流性能和交流损耗特性进行了二维有限元仿真研究,其中结构1中带材堆叠方向垂直于径向方向,结构2中带材堆叠方向平行于径向方向,结构3中带材堆叠方式既有垂直于径向又有平行于径向两种方式。由研究结果可知,结构1导体的临界电流最大,结构2导体的最小,结构3导体的介于两者之间。结构1和结构3导体在低磁场下具有较好的临界电流各向同性特性。三种结构导体的临界电流随外磁场角度及磁场强度的变化各不相同。结构1导体的传输交流(AC)损耗最小,结构2导体的传输AC损耗最大,结构3导体的AC传输损耗介于两者之间。在不同角度的外磁场中,三种结构的导体表现出的AC损耗各不相同。 展开更多
关键词 自洽模型 t-a 六通道TSTC-CICC 高温超导导体 载流性能 交流损耗 仿真研究
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利用AFLP进行榧树雌雄株鉴定的初步研究 被引量:6
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作者 梁丹 周秦 +2 位作者 殳燕 曾燕如 喻卫武 《浙江林学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期63-67,共5页
为了解决榧树Torreya grandis苗期雌雄株鉴别的问题,利用已建立的扩增片断长度多态(AFLP)体系及T-A克隆测序,就榧树的雌雄株开展了研究。结果从15对引物中用引物对E-AGC/M-CAT得到了一条雌性榧树特异的条带。这条榧树雌性性别特异条带,... 为了解决榧树Torreya grandis苗期雌雄株鉴别的问题,利用已建立的扩增片断长度多态(AFLP)体系及T-A克隆测序,就榧树的雌雄株开展了研究。结果从15对引物中用引物对E-AGC/M-CAT得到了一条雌性榧树特异的条带。这条榧树雌性性别特异条带,仅在雌株、雌雄同株的个体中有,雄株中没有,推测榧树雌雄同株由雌性榧树变异而来。GenBank序列比对结果发现,数据库没有与此特异条带相匹配的序列。 展开更多
关键词 经济林学 榧树 扩增长度多态 t-a克隆测序
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实时定量PCR检测骨髓间质干细胞及肿瘤细胞BMI-1基因 被引量:3
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作者 姜润秋 许文荣 +5 位作者 朱伟 钱晖 曹维克 韩崇旭 毛飞 严永敏 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期114-116,共3页
目的 建立BMI- 1基因(theBcell specificsmoloneymurineLeukemiaVirusintegrationsite 1)表达的实时荧光定量PCR,利用该方法在基因转录水平上研究BMI- 1在间质干细胞 (MSCs)及肿瘤细胞中的表达水平。方法 通过RT- PCR,T- A克隆,real t... 目的 建立BMI- 1基因(theBcell specificsmoloneymurineLeukemiaVirusintegrationsite 1)表达的实时荧光定量PCR,利用该方法在基因转录水平上研究BMI- 1在间质干细胞 (MSCs)及肿瘤细胞中的表达水平。方法 通过RT- PCR,T- A克隆,real timePCR等方法精确测定并比较BMI 1基因在胚胎MSCs、成人MSCs、A549(人肺腺癌细胞株)、SW 480(人结肠腺癌细胞株)、U937(人髓系白血病细胞株)、健康人外周血淋巴细胞以及白血病细胞中表达水平。结果 测定绘制BMI 1基因的标准曲线(相关系数r=0. 998),胚胎MSCs中BMI- 1的表达水平高于成人MSCs,慢性粒细胞白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中BMI- 1的表达量分别高于急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病,U937和A549中的表达量高于SW 480,健康人外周血淋巴细胞中BMI 1的表达明显低于慢性髓系白血病(P<0. 01)。结论 定量测定BMI -1的real- timePCR方法较稳定、准确。BMI- 1基因可以作为某些肿瘤特别是白血病治疗的靶点,其表达水平可作为判断肿瘤恶性程度的参考指标。 展开更多
关键词 BMI 基因 表达水平 实时定量PCR 健康人 骨髓间质干细胞 人外周血淋巴细胞 表达量 胚胎 t-a克隆
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人TNF-αmRNA实时荧光定量PCR检测标准的构建 被引量:2
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作者 郑晓群 邹立林 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期783-785,共3页
目的 :克隆人TNF αcDNA ,作为人TNF αmRNA定量检测的标准品。方法 :用RT PCR法从人外周血单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增TNF α的cDNA ,将纯化的TNF αcDNA与pUCm T载体进行连接 ,转化宿主菌DH 5α ,然后提取重组质粒DNA ,用限制性... 目的 :克隆人TNF αcDNA ,作为人TNF αmRNA定量检测的标准品。方法 :用RT PCR法从人外周血单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增TNF α的cDNA ,将纯化的TNF αcDNA与pUCm T载体进行连接 ,转化宿主菌DH 5α ,然后提取重组质粒DNA ,用限制性核酸内切酶HindⅢ、EcoRⅠ进行双酶切鉴定并测序分析 ,最后对质粒标准进行实时荧光定量PCR检测。用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并检测λ2 6 0nm吸光度 ,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。结果 :酶切鉴定、PCR扩增及测序分析均证实TNF αcDNA重组到pUCm T载体上。结论 :成功克隆了TNF 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 核糖核酸 信使 逆转录-聚合酶链反应 t-a克隆
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gAd重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 杨泽华 解军 +2 位作者 杨琦 张悦红 牛勃 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期93-97,102,共6页
为了建立人脂联素球状结构域(gAd)原核高效表达体系,分离纯化gAd并检测其生物活性,从淋巴细胞中提取人基因组DNA,PCR扩增出含有脂联素编码序列的片段,通过T-A克隆的方法克隆入pMD18-T载体中,然后设计适当的引物引入起始密码、终止密码... 为了建立人脂联素球状结构域(gAd)原核高效表达体系,分离纯化gAd并检测其生物活性,从淋巴细胞中提取人基因组DNA,PCR扩增出含有脂联素编码序列的片段,通过T-A克隆的方法克隆入pMD18-T载体中,然后设计适当的引物引入起始密码、终止密码以及相应的酶切位点,把脂联素球状结构域(gAd)基因亚克隆到表达载体pBV220,将序列鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中,用42℃温控诱导目的蛋白的表达;超声破菌,分离纯化包涵体,8mol/L尿素溶解,采用梯度稀释法复性重组蛋白,动物实验测定其活性。结果在大肠杆菌中成功实现了gAd稳定的以包涵体形式的高效表达,表达量约占全菌蛋白的20%,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定分离得到的包涵体具有较高纯度,复性后具有降低家兔血糖和游离脂肪酸的作用。为进一步研究gAd的生物学活性、作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 脂联素球状结构域 包涵体 基因工程 大肠杆菌 重组质粒 GAD 基因组DNA 聚丙烯酰胺凝胶 t-a克隆 构建
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