黄芪-当归通过TGF-β_(1)/Smad2信号途径抑制兔血管内膜增生模型外膜成纤维细胞的活化作用

目的:探讨黄芪-当归配伍对兔血管内膜增生模型血管外膜成纤维细胞(VAF)活化的影响及其作用机制。方法:清洁级家兔,雌雄各半,随机分为假手术组、模型组、单用黄芪组(1 g·kg^(-1))、单用当归组(1 g·kg^(-1))、黄芪-当归1∶1组(黄芪1 g·kg^(-1)+当归1 g·kg^(-1))、黄芪-当归1∶5组(黄芪1 g·kg^(-1)+当归5 g·kg^(-1))、黄芪-当归5∶1组(黄芪5 g·kg^(-1)+当归1 g·kg^(-1))、阿托伐他汀钙组(5 mg·kg^(-1)),采用颈总动脉套管复合高胆固醇饮食制备家兔血管内膜增生模型,假手术组只进行分离操作,不进行套管。术后第1天开始假手术组喂饲普通饲料,其余各组喂饲高胆固醇饲料(2%胆固醇+3%橄榄油+95%普通饲料),同时各用药组给予相应药物灌胃,假手术组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,持续给药28 d。实验结束后腹主动脉采血,马松(Masson)染色观察血管外膜形态学变化,免疫组化法检测外膜局部促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,免疫荧光双标法测定外膜成纤维细胞标记物波形蛋白(Vimentin)及肌成纤维细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达反映VAF活化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关通路蛋白转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Smad2、磷酸化(p)-Smad2表达。结果:与假手术组比较,模型组血管外膜增生明显,损伤血管局部TNF-α、IL-1β表达显著升高,受损段血管α-SMA、Vimentin、TGF-β_(1)、Smad2、p-Smad2表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄芪-当归1∶1、5∶1组可使血管外膜增生减轻,血管局部TNF-α、IL-1β表达降低,α-SMA、Vimentin表达下调,并且可降低TGF-β_(1)、Smad2、p-Smad2表达(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪当归配伍可抑制血管内膜增生模型的外膜增生,抑制外膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,减轻血管局部炎症反应,以黄芪-当归1∶1、5∶1组的作用明显。其作用机制可能与黄芪当归配伍抑制TGF-β_(1)/Smad2信号通路激活有关。

当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β_1表达的影响

目的:研究当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad信号通路的调控作用,探讨其对DN大鼠的作用及产生该作用可能的机制。方法:采用一次性大剂量(60 mg·kg-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立DN大鼠模型。将DN大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及当归-红芪超滤膜提取物低、中、高剂量组,之后开始灌胃给药,每天1次,8周后测空腹血糖(FBG),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),24 h尿蛋白;光镜观察肾组织结构变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量;免疫组化法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平明显升高,ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量明显升高,肾组织病理结构异常较为明显,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归-红芪超滤膜提取物各组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平(P<0.05);ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量降低(P<0.05),肾组织病理结构异常得到改善,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达减少(P<0.05,P<0.01),TGF-β_1,Smad2/3 mRNA表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论:当归-红芪超滤膜提取物可改善DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与其抑制TGF-β_1/Smad信号通路有关。