体外培养bFGF,PDGF,TGF-β对兔MSC的ALP活性和增殖的影响

目的 在正常生理与病理状态下成纤维细胞生长因子 (FGF)、血小板源性生长因子 (PDGF) ,转化生长因子 β (TGF - β)三种生长因子调节骨的生长发育 ,影响骨折的愈合过程 ,本研究探索在体外培养条件下该三种因子对新西兰白兔骨髓基质细胞增殖与分化的影响 ,为下一步观察这些因子与其它因子联合应用提供基础研究资料。方法 抽取新西兰白兔股骨上穿刺点骨髓进行体外原代培养 ,分离骨髓基质细胞 (Marrowstromalcells,MSC) ,于第 12d行传代培养 ,以 2× 10 3 个细胞 /孔 ,定量接种于 96孔板中 ,同时按照不同剂量加入上述三种因子 ,分别在培养第 10d时用酶动力法检测碱性磷酸酶活性 ,在培养第 5d细胞近于汇合时用MTT法检测细胞的增殖情况。结果 ①随着bFGF剂量增加 ,MSCALP活性呈下降趋势 ,当bFGF浓度超过 10 0ng/ml后OD值波动在 0 0 2 0～ 0 0 0 5之间 ,仅是对照组的 1/ 3弱 (P <0 0 1) ,表明MSCALP活性受到了明显的抑制。MTT结果显示 ,OD值随着bFGF的剂量增加而明显上升 ,最高值 (浓度为 6 0 0ng/ml时 )比对照组高出近一倍 ,表明bFGF明显促进MSC增殖 ,有剂量依赖性 (dose -dependent)但当浓度高于 80 0ng/ml时 ,OD值不高于对照组 ,甚至低于对照组 ,表明较高浓度的bFGF抑制MSC增殖 ;

兔膝关节伸直挛缩模型的建立

目的建立新西兰白兔膝关节伸直挛缩模型,为进一步研究关节挛缩的发病机制及其治疗方案提供实验基础。方法将雄性骨骼成熟的新西兰白兔30只采用随机数字表法分为6组(对应不同固定时间),即对照组、固定1周组、固定2周组、固定4周组、固定6周组、固定8周组,每组5只新西兰白兔。利用管型石膏将5个固定组兔左膝关节于伸直位分别固定1周、2周、4周、6周和8周。每个对应的时间点应用过量的戊巴比妥钠对6组新西兰白兔实施安乐死,拆除石膏后测量关节液中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量、总挛缩程度、肌源性挛缩程度、关节源性挛缩程度及后方关节囊厚度,然后以固定时间作为单因素,对各组所得指标进行单因素方差分析。结果 6组新西兰白兔关节液中TGF-β1的含量组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、固定1周组、固定2周组和固定4周组的总挛缩程度组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。固定1周组的肌源性挛缩程度为(14.6 ± 2.7)°,与其余5组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);固定2周组的肌源性挛缩程度与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。除固定6周组和固定8周组外,其余各组关节源性挛缩程度组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。除对照组和固定1周组外,其余各组后方关节囊厚度组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过石膏固定建立的新西兰白兔膝关节伸直挛缩模型简单实用,可用于膝关节挛缩发生和恢复的进一步探索,能为研究伸直型膝关节挛缩的发生机制及相关治疗策略提供较好的动物模型。