Transgelin-2对牙龈卟啉单胞菌感染的食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨沉默Transgelin-2对牙龈卟啉单胞菌(PG)感染的食管鳞状细胞癌细胞(ESCC)恶性生物学行为的影响及可能的机制。方法:将NE6-C或KYSE140细胞分为4组处理,分别转染siControl、感染PG(感染复数10)、转染siTAGLN-2、转染siTAGLN-2+感染PG。CCK-8法检测细胞增殖,BrdU标记法检测细胞周期,Transwell小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,免疫荧光法检测细胞中Transgelin-2、F-actin、E-cadherin和Vimentin蛋白的分布,Western blot法检测Transgelin-2、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:PG感染单独作用可以增加NE6-C和KYSE140细胞的增殖速率,增加S期细胞比例、侵袭细胞数和迁移细胞数(P<0.05);上调Transgelin-2表达(P<0.05),减少F-actin;下调E-cadherin表达,上调Vimentin表达(P<0.05)。转染siTAGLN-2可以显著拮抗PG感染的上述效应(P<0.05)。结论:Transgelin-2可能通过介导改变ESCC细胞骨架,从而抑制了PG感染诱导的ESCC恶性进展。

血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平在子宫腺肌病的临床诊断价值

目的观察血清热休克蛋白(HSP)90A、应激诱导磷蛋白1(STIP1)和肌动蛋白凝胶蛋白2(TAGLN-2)水平在子宫腺肌病的临床诊断价值。方法选取2020年1月—2022年6月在复旦大学附属妇产科医院诊治的子宫腺肌病患者126例,为子宫腺肌病组。选取同期在该院行健康体检妇女65例,为对照组。影响子宫腺肌病形成进行单因素和多因素分析,观察血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平与子宫腺肌病严重程度和痛经的关系,及其在诊断子宫腺肌病的诊断效能。结果子宫腺肌病组孕次、产次、血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平明显高于对照组(均P<0.01),而两组在年龄、BMI、人工流产史、分娩史、TG、TC、HDL-C和LDL-C水平差异无统计学意义(均P>0.05)。多因素分析发现孕次、产次、血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平是影响子宫腺肌病的独立危险因素(均P<0.01)。血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平随着子宫腺肌病的分级升高而升高(P<0.01),有痛经组的水平明显高于无痛经组(P<0.01)。血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平在诊断子宫腺肌病发生的灵敏度分别为60.3%、77.0%和77.0%,特异度分为为92.3%、89.2%和76.9%,AUC分别为0.836、0.884和0.829,联合检测的灵敏度为92.9%,特异度为92.3%,AUC为0.966,明显高于单个指标的HSP90A(z=5.269,P<0.001)、STIP1(z=3.867,P<0.001)和TAGLN-2(z=5.286,P<0.001)。结论HSP90A、STIP1和TAGLN-2参与了子宫腺肌病的发病过程,是子宫腺肌病严重程度的指标,联合检测有助于提高子宫腺肌病的诊断效能。

Transgelin 2在人乳腺癌紫杉醇耐药和侵袭转移中作用的研究

目的探讨transgelin 2在人乳腺癌紫杉醇耐药细胞(MCF-7/PTX)紫杉醇耐药和侵袭转移中的作用。方法在倒置显微镜下观察细胞的形态;采用MTT法测定细胞活性;运用Western blot和Real-time PCR检测细胞中transgelin 2,E-cadherin,Ncadherin,Vimentin的蛋白和mRNA表达;通过细胞划痕和Transwell侵袭实验分别测定细胞的迁移和侵袭能力;运用小干扰RNA技术降低MCF-7/PTX细胞中transgelin 2的表达。结果 MCF-7/PTX细胞发生EMT过程,并具有较强的耐药和侵袭迁移能力;干扰transgelin 2后,增强MCF-7/PTX细胞对紫杉醇的敏感性,抑制它们的侵袭和迁移能力。结论高表达transgelin 2不仅能够诱导MCF-7/PTX对紫杉醇的耐药,还能促进侵袭转移的发生,提示transgelin 2可望成为乳腺癌新的肿瘤标志物及治疗靶点。

Transgelin-2在结肠癌组织中表达的临床意义

目的:探讨肌动蛋白结合蛋白Transgelin-2在结肠癌组织中表达的临床价值。方法:以结肠癌组织蜡块标本329例作为研究对象,其中癌旁正常组织89例,结肠癌组织240例。对其进行组织芯片分析。结果:结肠癌组织中Transgelin-2阳性154例,阳性率为64.2%;而癌旁组织中Transgelin-2阳性14例,阳性率为15.7%。2种组织中Transgelin-2蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。Trans-gelin-2表达与结肠癌分化程度、淋巴结转移、远处转移以及TNM分期相关(P<0.05);结肠癌Trans-gelin-2表达阳性患者其术后生存时间低于阴性患者。结论:Transgelin-2表达情况与肿瘤的恶性程度以及预后有关,其可能作为一种评价结肠癌患者预后的肿瘤标志物。

Transgelin 2过表达诱导人乳腺癌细胞MCF-7对紫杉醇耐药作用研究

目的探讨Transgelin 2过表达对人乳腺癌细胞MCF-7紫杉醇耐药性影响及相关机制。方法运用质粒转染技术升高MCF-7中Transgelin 2的表达,并根据是否转染Transgelin 2的基因(TAGLN2)分为3组:空白对照组(control),阴性对照组(pcDNA3.1)、Transgelin 2转染组(High-TAGLN2);利用Real-time PCR和Western blot检测各组细胞中Transgelin 2和耐药因子的mRNA和蛋白表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活性;通过流式细胞术检测细胞凋亡情况;利用Western blot测定PI3K/Akt通路相关因子的表达。结果PI3K/Akt通路在MCF-7/PTX中激活;与空白对照组和pcDNA3.1组相比,High-TAGLN2组细胞对紫杉醇的敏感性降低,凋亡细胞减少,Transgelin 2和P-gp、MRP1、BCRP的mRNA和蛋白表达均明显增加,PI3K/Akt通路随着Transgelin 2升高而激活,Bcl-2表达升高,Bax表达降低。结论应用质粒转染技术升高Transgelin 2表达降低了MCF-7对紫杉醇的敏感性,诱导了乳腺癌耐药,提示Transgelin 2在乳腺癌紫杉醇耐药中发挥着重要作用,有望成为乳腺癌耐药治疗的新分子标志物。

肌动蛋白结合蛋白2在人表皮生长因子受体2阳性型和三阴性乳腺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨肌动蛋白结合蛋白2(TAGLN2)在人表皮生长因子受体2(HER2)阳性型和三阴性乳腺癌患者中的表达及临床意义。方法通过cBioPortal网站选取国际乳腺癌协会的分子分类数据库(METABRIC)中1904例浸润性乳腺癌患者的TAGLN2 mRNA表达数据和临床资料,以TAGLN2 mRNA表达值为标记,采用Kaplan-Meier法分析并计算TAGLN2 mRNA的cut-off值,根据该值将患者分为TAGLN2 mRNA高表达和TAGLN2mRNA低表达。比较不同受体表达状态乳腺癌患者TAGLN2 mRNA表达情况,比较HER2阳性型和三阴性乳腺癌患者的临床特征,比较不同TAGLN2 mRNA表达情况乳腺癌患者的生存情况,采用单因素和多因素Cox回归分析HER2阳性型和三阴性乳腺癌患者预后的影响因素。结果乳腺癌患者中TAGLN2 mRNA表达情况可能与雌激素受体(ER)表达、孕激素受体(PR)表达、HER2表达、HER2阳性(ER和PR阴性)、三阴性有关(P﹤0.01)。HER2阳性型和三阴性乳腺癌患者确诊年龄、肿瘤直径、肿瘤分期比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同组织学分级三阴性乳腺癌患者TAGLN2 mRNA表达情况比较,差异有统计学意义(P﹤0.01)。HER2阳性型和三阴性乳腺癌患者的生存情况比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);TAGLN2 mRNA低表达和TAGLN2 mRNA高表达HER2阳性型乳腺癌患者的生存情况比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);TAGLN2 mRNA低表达和TAGLN2mRNA高表达三阴性乳腺癌患者的生存情况比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。多因素Cox回归分析显示,淋巴结转移情况是HER2阳性型乳腺癌患者预后的独立影响因素(P﹤0.01),确诊年龄和淋巴结转移情况均是三阴性乳腺癌患者预后的独立影响因素(P﹤0.01)。单因素分析显示,TAGLN2 mRNA表达情况不是HER2阳性型和三阴性乳腺癌患者预后的影响因素(P﹥0.05)。结论TAGLN2 mRNA表达情况不影响HER2阳性型和三阴性乳腺癌患者预后,可能不是这两种类型乳腺癌患者潜在的预后标志物。

宫颈癌患者血清TAGLN2和AIF1表达及临床诊断价值

目的研究经血清肌动蛋白凝胶蛋白2(TAGLN2)、同种异体移植炎性因子-1(AIF-1)对宫颈癌的诊断价值。方法选自2018年3月至2020年3月收治的94例宫颈癌患者作为宫颈癌组,以同期诊治的80例宫颈良性病变的患者作为良性病变组。检测宫颈癌组和良性病变组患者血清TAGLN2、AIF-1水平。比较不同临床病理特征宫颈癌患者血清TAGLN2、AIF-1表达差异。多因素Logistic回归分析影响宫颈癌发生的危险因素。受试者工作曲线(ROC曲线)分析血清TAGLN2、AIF-1及两者联合对宫颈癌的诊断价值。结果与宫颈良性病变组比较,宫颈癌组患者血清TAGLN2、AIF-1显著较高,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组患者血清中TAGLN2、AIF-1表达与肿瘤FIGO分期及淋巴结转移情况有关(P<0.05)。血清TAGLN2、AIF-1升高是影响宫颈癌发生的独立危险因素。与TAGLN2、AIF-1单一指标比较,两者联合诊断宫颈癌具有最高诊断价值(AUC=0.892)。结论宫颈癌患者血清TAGLN2、AIF-1升高,两者表达升高与宫颈癌肿瘤FIGO分期及淋巴结转移有关,联合血清TAGLN2、AIF-1检查对宫颈癌具有较高的诊断价值,值得临床深入研究。

中华大蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与其组织分布

为研究蟾蜍旧ufo）基原的中药材中的多肽类有效成分，开展从日本蟾蜍（B．japonicus for-moslAs）皮肤cD—NA质粒文库中筛选蛋白编码基因的工作．由于后续拓展蟾蜍药用价值的研究中需要大量的实验材料，开始以中华大蟾蜍（B．gargarizarts）皮肤第一链cDNA为模板，克隆其相关基因的工作．通过DNA聚合酶链式反应获得编码转胶蛋白-2（transgelin2，TAGLN2）的转录子（GenBank登录号为KF432856）．该cDNA全长1207bp，其5’、3’端非翻译区域和开放阅读框分别为16bp、597bp和594bp，编码由197个氨基酸残基组成的蛋白质，与日本蟾蜍的TAGLN2（GenBank登录号为AGQ03775．1）相比，仅一个氨基酸发生替换，与人的同源性为82％，与其他动物的同源性介于70％～75％．RT—PCR组织分布检测表明TAGLN2在所检测的中华大蟾蜍各器官中均有表达．在肺、肝和肾中表达量较多．这些研究结果为后续中华大蟾蜍TAGLN2的生物学功能研究以及相关药物研发提供基础数据．

lncRNA SLC16A1-AS1调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA溶质载体家族16成员1反义RNA 1(lncRNA SLC16A1-AS1)调节微小RNA-532-3p(miR-532-3p)/肌动蛋白结合蛋白2(TAGLN2)信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞中lncRNA SLC16A1-AS1表达水平,筛选最佳干预细胞系;通过荧光原位杂交实验、下拉实验、双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SLC16A1-AS1、TAGLN2与miR-532-3p的靶向调控关系。①将U251细胞分为小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、si-SLC16A1-AS1组、si-SLC16A1-AS1+NC inhibitor组、si-SLC16A1-AS1+miR-532-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-532-3p mimics组、miR-532-3p mimics+pcDNA组、miR-532-3p mimics+TAGLN2组:检测U251细胞的增殖、迁移和侵袭变化;Western blot检测TAGLN2、E-钙黏附蛋白、波形蛋白表达水平。②小鼠体内肿瘤形成实验:验证lncRNA SLC16A1-AS1对胶质瘤生长的影响。结果lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平升高(P<0.05);U251细胞FISH实验、下拉实验、双荧光素酶基因实验证实lncRNA SLC16A1-AS1,TAGLN2与miR-532-3p存在靶向调控关系;抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p可显著抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(P<0.05);抑制miR-532-3p表达或过表达TAGLN2可逆转抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达或过表达miR-532-3p对U251细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用(P<0.05)。小鼠体内实验显示,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可显著抑制移植瘤的生长(P<0.05)。结论lncRNA SLC16A1-AS1在胶质瘤细胞中表达水平上调,抑制lncRNA SLC16A1-AS1表达可通过调节miR-532-3p/TAGLN2信号通路,进而抑制胶质瘤的恶性进展。

莽草酸衍生物的合成及其对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞的逆转作用研究

目的:对莽草酸进行结构修饰,并探讨其衍生物对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞MCF-7/PTX的逆转作用。方法:以莽草酸为先导结构,通过酯化、酰胺化、氢化、还原等方法对其1位羧基进行结构修饰,合成一系列莽草酸衍生物;以非耐药细胞MCF-7为参照,采用MTT法筛选具有抑制活性的衍生物,并同法考察活性衍生物对MCF-7/PTX细胞的半数抑制浓度(IC50)和逆转倍数(RI);以耐药相关蛋白转胶蛋白2为靶点,采用Glide 1.0计算机辅助设计软件将活性衍生物与转胶蛋白2进行分子对接。结果:共合成得到15个衍生物(T1~T15),其中T4~T15为首次合成所得。MTT试验结果显示,(3R,4S,5R)-N-苄基-3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-甲酰胺(T7)、(3R,4S,5R)-N-(3,4,5-三羟基-1-环己烯甲基)-苄胺(T14)、(3R,4S,5R)-3,4-O-异亚丙基-5-O-乙酰基-1-环己烯-1-甲酸甲酯(T15)对MCF-7和MCF-7/PTX细胞均具有一定的抑制作用,且各剂量T7、T14、T15+紫杉醇联用组对MCF-7/PTX细胞的IC50值均显著低于阴性对照(紫杉醇单用)组(P<0.05);T14、T15的RI较高,其最高剂量的RI已达8.8、9.3,与阳性对照药物维拉帕米(10.8)相当。分子对接结果显示,T7 3、4位上的羟基可与转胶蛋白2催化区域的Arg625、Asp627形成多个氢键;T14除上述氢键外,其1位上的二级胺侧链还可与转胶蛋白2的Glu657形成氢键;T15母核上的羟基被供电基团衍生化后,其与转胶蛋白2的结合更为紧密,抑制作用有所增强。结论:衍生物T7、T14、T15对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞均具有一定的逆转活性。母核上的多羟基结构是莽草酸及其衍生物与转胶蛋白2形成氢键的主要结构区域,对其进行供电基团衍生化或在莽草酸1位羧基引入二级胺、疏水基团等均可有利于增强衍生物的耐药逆转活性。

microRNA-133a在心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞中的表达及抗凋亡作用

目的观察microRNA-133a(miR-133a)在心肌梗死后心衰大鼠心肌细胞中的表达及对细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠随机分为四组:1假手术组:仅开胸不结扎冠状动脉;2心肌梗死组:结扎冠状动脉前降支;3r AAV9组:先冠状动脉转染空白病毒r AAV9后再结扎冠状动脉前降支;4miR-133a组:先冠状动脉转染r AAV9-Zs Green-premiR-133a后再结扎冠状动脉前降支。饲养8周后,real-time PCR检测大鼠心肌miR-133a、Transgelin-2(TAGLN2)、Caspase-9、Bcl-2 mRNA水平,免疫组织化学和Western blot检测TAGLN2、Caspase-9、Bcl-2蛋白水平。结果心肌梗死后心衰大鼠心肌组织中miR-133a的表达较假手术组相比显著下降(2.963±0.461比12.518±2.21),TAGLN2和Caspase-9的mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低。冠状动脉注射r AAV9-Zs Green-pre-miR-133a使大鼠心肌miR-133a表达明显上调,TAGLN2和Caspase-9的mRNA及蛋白表达减少,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平增加。结论心肌梗死后心衰大鼠心肌miR-133a表达下调,可能使其对促凋亡基因TAGLN2和Caspase-9的降解和抑制作用减弱,从而促进心肌凋亡的发生;过表达miR-133a可能减少心肌梗死后的心肌凋亡。

肌动蛋白结合蛋白2(Transgelin-2)生物学特性和功能研究进展

肌动蛋白结合蛋白是指能与肌动蛋白的单体、多聚体等结合的蛋白,肌动蛋白结合蛋白2(Transgelin-2)作为一种重要的肌动蛋白结合蛋白,可广泛分布在平滑肌细胞及非平滑肌细胞。Transgelin-2基因可广泛表达在全身各组织器官,其在亚细胞层面上有多种定位,且在不同病理生理状态下可能存在定位转移。Transgelin-2蛋白被认为参与了多种恶性肿瘤疾病,可能是特异性肿瘤标志物。本文对Transgelin-2蛋白的特性、亚细胞定位和相应生物学功能进行了综述,以期为相关机制研究提供可能的判断依据。

Transgelin-2促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制

目的 探讨Transgelin-2过表达对结肠癌细胞侵袭转移的影响及其机制.方法 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测5种结肠癌细胞株中Transgelin-2的mRNA和蛋白表达,筛选出Transgelin-2低表达细胞株SW480;以MegaTran 1.0试剂进行质粒转染,建立Transgelin-2过表达的结肠癌细胞模型;Transwell法检测Transgelin-2过表达对结肠癌细胞迁移侵袭能力的影响;激光共聚焦显微镜、透射电镜分别观察Transgelin-2过表达结肠癌细胞微丝的变化;纤维状肌动蛋白（F-actin）体外结合共沉淀实验验证Transgelin-2与F-actin的相互作用;激光共聚焦显微镜观察Transgelin-2与F-actin在细胞中的定位.结果 Transgelin-2过表达组的迁移细胞数在15 h[（207.27±62.26）个]、24 h[（179.00±32.08）个]均明显多于对照组[（114.13±29.17）个;（95.07±33.18）个;P＜0.05]及转染空载体组[（120.33±26.40）个;（95.93±28.66）个;P＜0.05];细胞中F-actin与单体球状肌动蛋白（G-actin）的相对含量发生明显变化,两者的荧光强度比值（18.7±8.6）较对照组（6.2±7.2）、空载体组均显著增加（8.8±4.0,P＜0.05）,提示发生微丝重塑;透射电镜观察发现过表达Transgelin-2的结肠癌细胞F-actin明显增多;F-actin体外结合共沉淀实验显示Transgelin-2与肌动蛋白存在体外的相互作用;激光共聚焦显微镜免疫荧光检测显示Transgelin-2与F-actin存在体内的共定位.结论 Transgelin-2可能通过参与调节微丝的重塑促进结肠癌细胞的迁移侵袭.

差异蛋白transgelin-2过表达对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨差异蛋白transgelin-2过表达对结肠癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭能力等生物学行为的影响。方法通过RT．PCR和Westernblot技术检测5种结肠癌细胞系中transgelin-2的mRNA和蛋白表达情况．筛选transgelin-2低表达细胞系；以MegaTran1．0试剂进行质粒转染实验，建立transgelin-2过表达的结肠癌细胞模型：用CCK-8法、流式细胞术和Transwell法分别检测transgelin-2过表达对结肠癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭能力的影响。结果转染过表达transgelin-2质粒后，结肠癌细胞增殖和凋亡无明显变化：在无血清培养15h后，transgelin-2过表达组穿过Transwell小室基质胶的细胞数（207±62）多于空白对照组（114±29）和转染空载体组（120±26），差异有统计学意义（F=7．302，P〈0．05）：培养24h后，transgelin-2过表达组穿过Transwell小室基质胶的细胞数（179±32）多于空白对照组（95±33）和转染空载体组（95±28），差异有统计学意义（F=10．960，P〈0．05）。结论transgelin．2过表达可促进结肠癌细胞的迁移侵袭。

转胶蛋白-2抑制高糖诱导的小胶质细胞炎症反应的转录组测序分析

目的分析高糖诱导的BV2小胶质细胞基因表达水平和信号通路改变,初步探讨转胶蛋白-2(TAGLN2)调控细胞炎症反应和代谢进程的机制。方法基础研究。BV2细胞分为甘露醇(Man)组、葡萄糖(Glu)组、过表达对照(Con)Glu组、过表达TAGLN2 Glu组、沉默Con Glu(shCon Glu)组、沉默TAGLN2 Glu(shTAGLN2 Glu)组。Man组细胞置于含25 mmol/L Man、25 mmol/L Glu的改良Eagle培养基(DMEM培养基)中培养;Glu组、Con Glu组、TAGLN2 Glu组、shCon Glu组、shTAGLN2 Glu组细胞置于含50 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中培养。培养24 h后,采用高通量测序技术对各组细胞进行转录组测序,筛选显著差异表达基因(DEG)。DEG筛选标准为|log2(差异表达倍数)|≥1且P≤0.05。对筛选得到的DEG进行基因注释(GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)的信号通路富集分析和蛋白-蛋白互作网络分析。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测DEG mRNA相对表达量。组间数据比较采用独立样本t检验。结果与Man组比较,Glu组共筛选出517个DEG,其中上调、下调基因分别为277、240个。KEGG通路分析结果显示,上调的DEG显著富集在核因子(NF)-κB和Jak-信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路等免疫系统进程;下调的DEG显著富集在糖胺多聚糖的降解和甘油酯等代谢进程。与Con Glu组比较,TAGLN2 Glu组共筛选出480个DEG,其中上调、下调基因分别为147、333个。上调的DEG显著富集在脂肪酸、甘油脂和丙酮酸等代谢进程;下调的DEG显著富集在NF-κB、Jak-STAT和肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等免疫系统进程。与shCon Glu组比较,shTAGLN2 Glu组共筛选出582个DEG,其中上调、下调基因分别为423、159个。上调的DEG显著富集在TNF、趋化因子信号通路等免疫系统进程;下调的DEG基因主要富集在模式识别受体信号通路。RT-PCR检测结果显示,与Con Glu组比较,TAGLN2 Glu组细胞中Card11(t=13.530)、Icos(t=3.482)、Chst3(t=6.949)、Kynu(t=5.399)、白细胞介素(IL)-1β(t=2.960)、TNF-α(t=5.800)、IL-6(t=3.130)、干扰素-γ(t=7.690)、IL-17(t=6.530)mRNA相对表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TAGLN2可能通过NF-κB和Jak-STAT信号通路抑制高糖诱导的小胶质细胞炎症反应;Card11、Icos、Chst3、Kynu在TAGLN2抗炎过程中可能发挥了重要作用。

日本蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与生物信息学分析

为研究蟾蜍皮肤中多肽类有效成分,通过菌落PCR(polymerase chain reaction)对日本蟾蜍(Bufojaponicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行筛选,对测序结果进行分析及同源性比较,获得转胶蛋白-2(transgelin-2,TAGLN2)的5′端缺失的部分cDNA序列(GenBank登录号为JX197456),长为997 bp,包括348 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端31 bp及3'端618 bp的非翻译区(untranslated region,UTR),编码由115个氨基酸残基组成的蛋白质。推导的氨基酸序列含有一个调宁蛋白同源性结构域(calponin homology,CH)、两个可形成二硫键的半胱氨酸残基、3个α螺旋区域和5个潜在的磷酸化位点。氨基酸序列同源性分析显示,本文获得的日本蟾蜍N-端截短型TAGLN2与热带爪蟾(Xenopus(Silurana)tropicalis)和非洲爪蟾(Xenopus laevis)相对应部分的同源性分别为90%和89%,与其他7种动物的同源性介于71%～85%之间。

miR-133b通过下调转胶蛋白抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭能力

目的观察miR-133b在食管鳞癌中的表达,并探讨其对食管鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制。方法采用实时荧光定量PCR方法检测63例食管鳞癌组织及对应的癌旁组织、食管鳞癌细胞(Eca109、EC9706、EC1、TE1、KYSE70)和正常食管上皮细胞Het-1A中miR-133b的表达。将miR-133b类似物、miR-133b抑制剂及阴性对照转染TE1细胞,分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和Transwell小室实验检测miR-133b对TE1细胞增殖和侵袭能力的影响。采用TargetScan和miRDB在线软件预测miR-133b的靶基因,并利用双荧光素酶报告载体证实其潜在的靶基因。采用Western blot方法检测miR-133b过表达对转胶蛋白2(TAGLN2)及上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)、Snail、Slug和波形蛋白(Vimentin)表达的影响。结果63例食管鳞癌组织miR-133b的相对表达水平为0.295±0.040,显著低于正常癌旁组织(1.002±0.011,P<0.001)。miR-133b mRNA的表达与食管鳞癌分期、淋巴结转移和预后均有关。食管鳞癌细胞Eca109、EC9706、EC1、TE1和KYSE70中miR-133b的相对表达水平分别为0.679±0.031、0.391±0.008、0.236±0.016、0.031±0.005和0.099±0.020,均显著低于正常食管上皮细胞Het-1A(1.005±0.016,均P<0.001)。miR-133b类似物转染能上调TE1细胞中的miR-133b水平达6.199±0.627,并抑制TE1细胞的增殖和侵袭能力,而miR-133b抑制剂转染能下调TE1细胞中的miR-133b水平至0.182±0.023,并增强TE1细胞的增殖和侵袭能力。最为显著的是,TAGLN-3′UTR-WT转染的细胞中,miR-133b类似物转染组的相对荧光素酶的活性(0.320±0.018)显著低于阴性对照组(1.010±0.036,P<0.001);而TAGLN-3′UTR-MUT转染的细胞中,miR-133b类似物转染组和阴性对照组的相对荧光素酶活性分别为1.019±0.056和1.008±0.021,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-133b上调能显著抑制食管鳞癌TE1细胞中TAGLN2蛋白的表达,并且上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin、Snail、Slug和Vimentin的表达。结论miR-133b可能通过调控TAGLN2的表达在食管鳞癌细胞的增殖和侵袭中发挥作用,可能成为食管鳞癌潜在的分子治疗靶点。

布地奈德对哮喘大鼠哮喘症状的影响及机制研究

目的探讨布地奈德对哮喘大鼠哮喘症状的影响及机制。方法制备大鼠哮喘模型,应用布地奈德处理后,测定引喘时间和点头呼吸频率,Real-time qPCR法检测各组大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)中Transgelin-2表达水平变化,ELISA法检测大鼠血清TGF-β1、IFN-γ、IL-4表达水平,分析布地奈德组大鼠Transgelin-2表达水平与布地奈德对哮喘症状影响、TGF-β1、IFN-γ以及IL-4表达水平的相关性。结果布地奈德能够延长哮喘大鼠的引喘时间,降低点头呼吸频率,上调哮喘大鼠肺组织及BALF中Transgelin-2的表达水平,降低哮喘大鼠血清IL-4表达水平,上调IFN-γ表达水平,P<0.05。Transgelin-2表达水平与大鼠第7次激发后的引喘时间呈显著正相关,与点头呼吸频率呈显著负相关;Transgelin-2与TGF-β1呈显著负相关,与IFN-γ呈显著正相关,与IL-4之间相关性不显著。结论布地奈德可显著缓解哮喘大鼠哮喘症状,降低哮喘大鼠的炎症反应,该作用可能与逆转Transgelin-2表达下调相关。

早期黏膜下浸润与非黏膜下浸润结直肠癌的差异蛋白鉴定

目的构建大鼠早期黏膜下浸润结直肠癌（SICRC）与非黏膜下浸润结直肠癌（SNICRC）模型并鉴定两者的差异蛋白，以筛选早期SICRC的生物学标记。方法应用N一甲基一N一亚硝基脲（MNU）诱导建立大鼠SICRC与SNICRC模型。二维荧光差异定量双向电泳技术（2D-DIGE）和基质辅助激光解吸／电离．飞行时间质谱鉴定出SICRC与SNICRC的差异蛋白。荧光定量Real．timePCR和Westernblot实验验证所选蛋白的鉴定结果。结果成功建立大鼠SICRC与SNICRC模型。2D-DIGE发现SICRC和SNICRC之间有5个差异表达蛋白（P值均〈0．01）。质谱分析鉴定这5个蛋白发现，与SNICRC和正常对照（NC）比较，转凝蛋白（Transgelin）、肽基脯氨酰异构酶A和原肌球蛋白1在SICRC表达上调，而碳酸酐酶lI（CAII）与一种未命名蛋白表达下凋。Real-timePCR和Westernblot验证结果显示，TransgelinmRNA和蛋白水平在SICRC组（33．05±0．75、86．63±1．83）高于SNICRC（22．68-4-0．89、67．93±2．39）和NC组（18．07±0．55、44．25±1．55）（P值均〈0．05），而CAlImRNA和蛋白水平在SICRC组（18．014-0．53、41．55±1．89）低于SNICRC组（26．284-1．08、61．114-1．57）和NC组（33．08±0．76、83．434-1．61）（P值均〈0．05），变化趋势与蛋白质组学一致。