金纳米花免疫层析试纸条检测玉米中的呕吐毒素

呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)对人类和动物的健康以及食品经济构成了极大的威胁。该研究建立一种基于金纳米花(gold nanoflowers,AuNFs)的免疫层析试纸条(immunochromatographic test strip,ICTS)快速检测玉米中的呕吐毒素的方法。采用种子生长法制备了AuNFs,将其与抗DON单克隆抗体结合制备免疫层析试纸条中的金标探针,并对pH值、抗体量、上样缓冲液浓度、检测线(test-line,T线)浓度和金标探针量进行优化,最终用于玉米中的DON检测。经过优化实验条件,确定了最优pH值为7.5,最佳抗体添加量为1μL,最适上样缓冲液浓度为PBST+1%PVP K30,最好的T线质量浓度为0.1 mg/mL以及最佳探针量为3μL。在最优反应体系下,实验结果可以通过肉眼观察进行定性分析,该方法检出限为20μg/kg,灵敏度≥99%、假阳性率≤1%、假阴性率≤1%,且与现有标准方法检测结果一致,同时与其他真菌毒素无交叉反应。以AuNFs标记抗体为探针制备的ICTS灵敏度高,特异性强,可以实现玉米中DON的快速检测。

减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。

基于蛋白序列比对方法获得灵敏度抗体的诺如病毒免疫层析试剂条的临床应用价值

目的探讨基于蛋白序列比对方法获得灵敏度抗体的诺如病毒免疫层析试剂条的临床应用价值。方法选取150例疑似诺如病毒感染患者作为研究对象,回顾性分析所有患者的临床资料。所有患者均接受常规检查和优化检测试纸的诺如病毒抗原检测。利用患者临床数据对检出结果进行验证,从检出率、重复率、符合率、抗干扰能力和交叉反应等方面对该检测优化方法的检测性能进行评估。结果优化后的抗原检测试剂条的检测准确率高于常规抗原快速检测试剂,差异有统计学意义(P<0.05)。通过评估分析发现,诺如病毒抗原检测中的一些关键因素,如样本采集时间、采集方式、保存方式等对检测结果的影响较大。通过对上述因素进行控制和管理,可以提高诺如病毒抗原检测的准确性和可靠性。结论基于蛋白序列比对方法获得灵敏度抗体的诺如病毒试剂条的临床应用价值较高,可以优化检测方法,提高检测准确性和可靠性,减少漏诊和误诊。

基于金纳米棒免疫层析试纸条快速检测玉米中的黄曲霉毒素B_(1)

传统的基于球状胶体金(Au spheres,AuSPs)试纸条由于检测灵敏度偏低,无法满足食品安全高灵敏检测的需求。因此,建立高灵敏、快速分析方法尤为重要。以黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))为检测对象,金纳米棒(Au nanorods,AuNRs)作为信号标签,偶联抗AFB_(1)单克隆抗体作为金标探针,基于竞争法制备免疫层析试纸条对玉米中AFB_(1)进行检测,试验结果通过便携式试纸条定量分析仪定量检测。结果表明:在单抗加入量为0.6μg、T线抗原质量浓度为0.1 mg/mL、探针使用体积为2.5μL的条件下制作标准曲线,基于AuNRs的试纸条检出限为0.124 ng/mL,IC50为1.593 ng/mL,此外实际玉米样品中对AFB_(1)的回收率为89.50%~111.70%;对玉米质控样进行检测,结果与所建立的方法一致。该方法可应用于玉米中AFB_(1)的快速检测,检测结果符合国家标准,具有良好的应用前景。

农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究

基于胶体金免疫层析原理建立了一种快速检测赭曲霉毒素A(ochrotaxin A,OTA)的胶体金试纸条的研制方法,包括胶体金的制备、金标记探针的制备、试纸条各条件参数的测试和优化等。试纸条检测OTA的肉眼可视检测限为0.25ng/mL,检测时间为10min,试纸条能特异性识别OTA而不与赭曲霉毒素B及其他真菌毒素发生交叉反应,使用简单、方便、成本低,重复性好,保质期长,尤其适用于农产品中OTA的现场快速筛查。

免疫层析试纸条技术及其在食源性致病菌检测中应用的研究进展

食源性致病菌是引起食物中毒的最主要原因之一,全球每年由其引发的食物中毒事件达上亿例。免疫层析试纸条法是一种简便、快速且价格低廉的检测方法,广泛应用于国内基层单位对食源性致病菌现场快速检测及诊断。本文就其在食源性致病菌检测方面的研究现状及发展方向进行综述。

多重免疫层析试纸辅助食品安全快速检测的研究进展

快速、灵敏检测食品中各类危害因子是保障食品安全,提高人类健康水平的关键所在。免疫层析试纸条具有成本低廉、操作简单、检测时间短、不依赖复杂设备和专业技术人员等优点,是食品安全现场快速筛查检测的主要技术手段。多重免疫层析试纸可提高检测通量,缩短总体分析时间,为食品中多种危害因子的同时检测提供技术保障。作者介绍了5种常用的信号输出模式(比色、荧光、表面增强拉曼散射、化学发光和磁信号),并简述了上述信号输出方式整合多重免疫层析技术同时检测食品危害因子的研究进展,旨在为多重免疫层析试纸的设计、构建及应用提供一定的理论依据。

荧光免疫层析试条定量检测仪的研制

为了对AMI疑似患者进行现场快速筛查,研制了一款可对AMI荧光免疫层析试条进行定量、快速检测的仪器。该仪器主要由光路单元、数据采集单元、处理及显示单元组成,激发光聚焦于试条上产生荧光,荧光通过收集光路聚焦于线阵CCD,ARM9芯片通过CCD的灰度值对试条进行判断。测试结果表明,仪器检测得到试条的相对荧光强度与心肌标志物浓度成正比,该仪器可实现对患者心肌标志物浓度的定量检验,为患者病情的诊断和康复提供了有力保证。

核酸层析法转基因快速检测体系的建立及应用

随着我国转基因研究及产业化进程提速,转基因检测的重要性日益凸显,因而快速、高效的分子检测新方法的研发具有重要的生产实践及科研意义。在转基因检测中,常规PCR技术具有检测范围广的特点,但较为费时费力,且对实验条件要求较高;而胶体金蛋白试纸法检测方便、快捷,但可检范围窄。基于此,建立了一套基于核酸层析法快速转基因检测的方法体系。将经液氨研磨后的样品通过一管法提取DNA后直接进行PCR扩增,再将PCR扩增产物滴加到胶体金检测卡上,通过直接观察胶体金卡条显色状况进行结果判别。此方法最终检验出玉米内参基因ZSSⅡB及Zein、大豆内参基因SPS、水稻内参基因Lectin,转基因元件启动子CaMV 35 S及终止子NOS,以及抗虫基因Cry 1Ab/1 Ac、抗除草剂基因Bar、Pat、CP 4-EPSPS及选择标记基因NPTⅡ、Pmi等外源基因;并成功检出特异性转基因事件Mir604及Bt11。研究获得的核酸层析检测方法具有灵敏度高、省时省力且对检测条件要求低等优点,集PCR法与蛋白试纸检测法二者优势于一身,可广泛应用于转基因产品的精确快速检测,为我国转基因生物安全监管提供了良好的技术支撑。

心肌肌钙蛋白快速测试系统的设计

金免疫层析检测是目前遍及医学检验领域和临床检测中应用广泛、分析敏感的一种技术。以心肌肌钙蛋白测试为对象,研究并实现了心肌肌钙蛋白快速测试系统,在分析测试性能影响机理的基础上,给出了系统软硬件设计以及智能方法在系统中的集成应用。经检验系统性能符合医疗器械要求。

伏马菌素B_1胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

目的:为制备一种快速检测玉米中伏马菌素B_1(FB_1)胶体金免疫层析试纸条。方法:采用碳化二亚胺法合成检测抗原FB_1-BSA,柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,辛酸-饱和硫酸铵法对抗FB_1单克隆抗体腹水进行纯化,将金标抗体喷于金标垫,检测抗原FB_1-BSA(T线)和羊抗鼠二抗(C线)喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)。结果:得到的单克隆抗体效价为1.28×105。该试纸条的NC膜喷涂的检测抗原浓度为200μg/m L,羊抗鼠二抗浓度为1.0 mg/mL,喷涂量分别为0.74μL/cm,试纸条灵敏度为20 ng/mL,检测时间只需5 min,试纸条于4℃至少可保存12个月。结论:采用制备的试纸条对玉米实际样品进行检测,检测结果与高效液相和酶联免疫吸附法检测结果相一致,说明该试纸条适合现场快速检测伏马菌素B_1。

基于免疫传感器和激光诱导击穿光谱的痕量农药测量方法

农药在农作物病虫害及农作物高产稳产等方面起到了相当重要的作用,但是农药的长期大量使用,对生态和人类健康造成了极大的危害。根据相关文献查阅,基于免疫传感器和激光诱导击穿光谱的分析方法对农药残留的检测未见相关报道。提出了激光诱导击穿光谱对免疫传感器捕获待测目标物的探针进行检测,从而间接计算出待测目标物的浓度。使用免疫层析试纸条对痕量农药进行检测,虽然免疫层析试纸条可以实现对痕量农药的测量,但是仅能定性且检测的范围很窄,为了拓宽免疫层析试纸条对痕量农药的测量范围,运用激光诱导击穿光谱(laser induced breakdown spectroscopy,LIBS)对免疫层析试纸条上捕获痕量农药的金属纳米颗粒进行光谱测量,构建免疫层析试纸条与LIBS的检测方法。以毒死蜱农药为研究对象,因农药残留属于小分子抗原检测,所以免疫层析试纸条运用竞争法对毒死蜱进行检测。滴加了低浓度毒死蜱的免疫层析试纸条上控制线和检测线的颜色差异不明显,难以用人眼分辨出是否检测到了毒死蜱。对添加了毒死蜱的免疫层析试纸条的控制线和检测线分别选取点,测量AuⅠ242.733 nm处的光谱,用控制线的平均光谱强度减去检测线的平均光谱强度即为毒死蜱的信号,此方法可以检测出免疫层析试纸条观察不到的信号,还规避了LIBS检测限高的问题。随着毒死蜱浓度从0增加到106 ng·mL^(-1),LIBS光谱数据差值逐渐增大。为了消除随机误差的影响,使用ΔLIBS强度(测量样品强度减去空白样品强度)与毒死蜱浓度取Lg绘制校准曲线。ΔLIBS强度与毒死蜱浓度在10~106 ng·mL^(-1)范围内呈线性相关,Y=6.14X+31.85,R 2=0.969,毒死蜱的检测限为0.39 ng·mL^(-1)。研究表明,免疫层析试纸条与LIBS结合实现了对痕量农药的测量,能有效的扩宽毒死蜱的检测范围。同时,免疫层析试纸条与LIBS的结合对其他物质的检测也值得进一步研究。

胶体金免疫层析试纸条在猪尿β-兴奋剂多残留检测中的应用

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并对β-兴奋剂单克隆抗体进行标记。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,研制出能同时检测多种β-兴奋剂的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本方法对克伦特罗的灵敏度最高,检测线性范围(IC20~IC80)为0.31~4.52μg/L,IC50为1.18μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.14μg/L,猪尿样品无需处理,直接检测,单个样品检测时间只需8 min;与沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、氯丙那林、西马特罗等β-兴奋剂类药物都有交叉,能实现β-兴奋剂的多残留检测。对阴性猪尿的加标回收实验中,试纸条批内实验回收率在83.6%~102.2%之间,试纸条批间实验回收率在84.2%~101.5%之间,且相对标准偏差均在10%以内,与ELISA、HPLC/MS法的对比实验表明,该试纸条能应用于猪尿中β-兴奋剂多残留的定量检测。

基于定向标记抗体的虾原肌球蛋白量子点免疫层析方法的建立及应用

目的利用量子点定向标记的单克隆抗体,建立竞争荧光免疫层析方法快速检测食品中虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)。方法使用杂交瘤细胞株免疫Balb/c小鼠,从小鼠腹水中制备得到单克隆抗体,将氨基化量子点通过具有抗体Fc端生物亲和性的重组蛋白共价固定于抗体Fc端。以量子点定向标记抗体作为检测抗体,以南美白对虾中的TM作为检测靶标,基于竞争法原理组装免疫层析试纸条。在对条件参数进行优化后,应用于市售食物样品中TM的检测。结果所建立方法的灵敏度为0.96μg/mL(%P=50%),检出限为0.15μg/mL(%P=20%),检测结果与文献中报道的相当。试纸条批内差和批间差的变异系数分别为6.81%~8.86%和8.27%~14.67%,均小于15%,在可接受范围之内。同时试纸条显示出了良好的特异性与准确性,实际样品的检测结果与过敏原标签一致。结论本研究所建立的荧光免疫层析试纸条检测方法适用于TM的快速、高效检测。

一种异丙威胶体金免疫快速检测试纸条的研制

农产品的农药残留检测方法较多,异丙威作为速效性农药,应用较为广泛,但是检测异丙威的快速检测方法极少。该研究通过制备异丙威半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中异丙威的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条对蔬菜、水果等农产品中异丙威的最低检出限为10μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与甲草胺、亚胺菌、乙霉威和异丁草胺等药物无交叉反应,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。该试纸条检测快速、便捷,能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。

免疫层析试纸条技术在食品安全领域的研究进展

免疫层析试纸条技术(Immunochromatographic Test Strip,ICTS)结合了色谱分析的分离能力和免疫分析的特异性,具有操作简单,检测快速以及价格低廉的特点,已成为食品安全快速检测领域研究的热点。传统的ICTS是以胶体金作为信号标记材料,但是胶体金试纸条检测灵敏度较低,只适用于定性和半定量检测。为了提升试纸条的检测性能,研究者做了大量的努力。本论文介绍了传统的胶体金试纸条的检测基本原理,并对近年来开发的试纸条检测新技术进行综述,同时也提出该项技术目前所存在的局限性并提出了未来的发展方向,以期为试纸条的进一步开发利用提供一定的文献支持。

转基因蛋白质GB检测方法在玉米酒糟粕转基因成分检测中的应用性研究

根据GB/T 19495.8—2004《转基因产品检测蛋白质检测方法》对免疫层析试纸条检测玉米酒糟粕中转基因蛋白质进行了应用性研究,评价了Romer试纸条对玉米酒糟粕中CP4-EPSPS抗除草剂转基因蛋白的检测低限,比较分析了不同称样量下使用超纯水和样品提取缓冲液进行样品中转基因蛋白质提取对检测结果的影响,优化了试纸条检测方法。研究表明,超纯水和试剂盒中配套的样品提取缓冲液均可用作玉米酒糟粕中转基因蛋白质检测的提取试剂;超纯水处理样品的最佳称样量为2.0g;样品提取缓冲液处理样品的最佳称样量为5.0g。从实验操作便捷上考虑,推荐采用35ml超纯水提取2.0g玉米酒糟粕的方案。

环介导等温扩增结合免疫层析试纸条快速检测羊肉及其制品中的鸭源成分

为实现肉及肉制品中掺假成分的快速检测,本文将环介导等温扩增技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)与免疫层析试纸条(immunochromatographic test strip,ICTS)相结合,建立了一套可在羊肉及其制品中特异并灵敏地检测出鸭源性成分的方法。根据鸭特异性细胞色素b(cytb)基因的6个特异性区域设计LAMP引物,其中两条内引物FIP和BIP分别使用生物素(biotin)和地高辛(digoxin)标记。使用LAMP扩增技术于65℃下扩增30 min产生生物素和地高辛标记的双链DNA产物,将扩增产生的双链DNA产物(10μL)与90μL上样缓冲液(PBS pH=7.4)混合均匀后使用免疫层析试纸条进行可视化检测。本研究所建立的LAMP-ICTS方法能够在40 min内特异性地检测出羊肉及其制品中的鸭源成分,且与其他肉类不存在交叉反应,检出限可达到0.01%(w/w)。市售实际样品检测结果显示,所采集的羊肉片、羊肉串样品中均有鸭源性成分,且此结果与行业标准方法(PCR-电泳)的检测结果一致。LAMP-ICTS方法具有灵敏度高、特异性好、检测速度快、对仪器的依赖低等优点,适用于基层监管部门对羊肉及其制品真伪进行快速检测。

一种多氯联苯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

该研究制备了多氯联苯(PCB118)半抗原,基于该半抗原研制出一种能够检测饲料中多氯联苯的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试剂条检测限为10μg/kg,检测时间约为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与多氯联苯PCB52、PCB101、PCB28、PCB138、PCB153、PCB180等药物无交叉反应,特异性较好,12个月内稳定性指标均符合要求,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》对快速检测产品的要求,该试纸条适用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。

樱桃小果病毒1号胶体金免疫层析试纸的研发与应用

近年来,病毒病在甜樱桃主产区的发生呈上升趋势,制约了甜樱桃产业升级和发展。能够侵染甜樱桃的病毒种类中,樱桃小果病毒1号(little cherry virus 1,LChV-1)导致樱桃果实缩小,彻底丧失经济价值,对甜樱桃产量影响较大。LChV-1通常具有潜伏侵染的特性,在樱桃苗期难以通过症状进行判断。同时,多数品种对LChV-1敏感,因此该病毒的早期检测对甜樱桃的生产尤为重要。传统的病毒检测手段需要专业仪器,不能满足田间快速检测的需求。本研究获取了LChV-1外壳蛋白的多克隆抗体,并研发了一种能够准确检测LChV-1病毒的胶体金免疫层析试纸,确定了胶体金的最佳抗体标记浓度为0.24 mg/mL,检测线最佳重组蛋白浓度为0.25 mg/mL,质检线最佳羊抗兔IgG抗体浓度为0.04 mg/mL。运用该试纸检测只需10~15 min,检测时间短、成本低、结果容易判断,可用于田间快速检测。本研究为樱桃小果病的综合防控提供了有效的监测和检测手段。