跨膜蛋白43的研究进展

跨膜蛋白43(TMEM43)是一种在物种间高度保守、定位在内核膜及内质网中且有一个大的亲水域的核膜蛋白。临床研究及流行病学调查发现,TMEM43基因的突变可导致心律失常性右心室心肌病(ARVC)和金刚砂-德雷福斯肌营养不良(EDMD)等疾病。目前,对此病的诊断及治疗尚存在一定的困难。此外,TMEM43与其他跨膜蛋白亦存在相互作用,但其功能和相关致病机制知之甚少。就TMEM43相关疾病及其与相关蛋白之间的作用进行综述,为后期研究TMEM43的功能及疾病治疗方面提供参考和帮助。

人源跨膜蛋白43(TMEM43)的检测、细胞内定位及体外真核表达

为探究人源跨膜蛋白43(TMEM43)基因含量、定位分布及体外真核表达情况,利用RT-PCR及Western blot方法分别检测内源MRC-5和HEK293细胞内TMEM43基因及其蛋白表达情况,采用间接免疫荧光实验进一步分析其在MRC-5细胞内的分布;构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43,转染至HEK293细胞内检测外源TMEM43在HEK293细胞内的基因和蛋白表达情况。结果显示,基因水平TMEM43在MRC-5细胞内的表达明显高于HEK293细胞,蛋白水平仅能检测到MRC-5细胞内TMEM43的表达。重组表达质粒pcDNA3.1-EGFP-TMEM43转染HEK293细胞后,基因水平TMEM43表达显著升高, Western blot可检测到转染后细胞内TMEM43蛋白成功表达。结果表明,不同细胞表达TMEM43含量存在差异,肺来源细胞内TMEM43的表达明显高于肾来源的细胞;构建的重组载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43可成功转染HEK293细胞并表达。该研究为TMEM43结构及功能、与疾病相关机理的进一步探究提供了实验依据。

跨膜蛋白43对脑心肌炎病毒体外增殖的影响

目的 探讨跨膜蛋白43(transmembrane protein 43,TMEM43)在脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)感染过程中的作用。方法 采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)结合液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)高通量蛋白质组学技术,对EMCV感染的BHK-21细胞进行蛋白质组学分析;采用分子克隆技术构建人源TMEM43重组质粒p CMV-MycTMEM43,转染HEK293细胞后,感染EMCV(MOI=3),real-time PCR法检测TMEM43过表达对EMCV体外增殖以及EMCV吸附和进入的影响;RNAi试验筛选最有效干扰序列,转染HEK293细胞后,感染EMCV(MOI=3),real-time PCR法检测TMEM43下调对EMCV体外增殖的影响。结果 EMCV感染的BHK-21细胞TMEM43表达显著增加。重组质粒p CMV-Myc-TMEM43可在HEK293细胞正常表达,TMEM43过表达对EMCV复制有显著促进作用,病毒感染滴度也有一定提高;TMEM43过表达在病毒进入阶段发挥促进作用,而对吸附过程无任何影响。TMEM43下调对EMCV增殖有明显抑制作用。结论 TMEM43促进EMCV复制增殖,主要在病毒进入阶段发挥作用。