睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopher in beta2)结合区域的确定以及体外结合的证明

目的确定睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherinbeta2)的结合区域,体外验证BS-63与transportin的结合作用。方法将BS-63C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结合区域。分别于大肠杆菌中表达上述相互作用片段,并进一步运用pulldown实验在体外验证BS-63与transportin的结合作用。结果BS-63C端与transportin相结合的区域从起始的1.6kb确定至包括一个Ranbindingdomain(RanBD)在内0.6kb的范围内。Pulldown以及Westernblot证实此区域在体外可与transportin相结合。结论在生精细胞中,位于胞质侧的睾丸特异的核孔蛋白BS-63将被转运物向核内的转运过程可能是由transportin协助完成的。