野生和养殖黄颡鱼遗传结构的TRAP分析

本文采用40对靶位区域扩增多态性(TRAP)标记分析了野生和养殖黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco群体的遗传多样性。从40对引物中共扩增出512个位点,其中多态位点278个,多态位点比例为54.3%。筛选出的40对引物的扩增产物都具有多态性,带型稳定,重复性好,可用于统计分析。Pop Gene分析表明:野生黄颡鱼群体的遗传多样性高于养殖群体。群体间的Nei遗传分化系数和基因流指数Nm分别为0.6832和0.2318,表明两个群体间发生了明显的分化。群体间Nm值小于1,说明两群体发生的基因交流较少。

多形胶质母细胞瘤细胞系端粒酶活性的测定

端粒缩短见于星形细胞瘤发展过程中，但其长度在胶质母细胞瘤／细胞系相对稳定，提示胶质瘤细胞内存在端粒修复机制的可能性．为证实此点，利用端粒重复片段扩增技术（ＴＲＡＰ），对８株人／大鼠多形胶质母细胞系的蛋白提取液中端粒酶活性加以测定．结果显示：８例胶质瘤样本的反应液均可见端粒ＰＣＲ扩增片段；用无ＤＮａｓｅ的ＲＮａｓｅ事先处理蛋白提取液，可明显降低或消除ＰＣＲ产物的出现，说明ＴＲＡＰ反应中的ＰＣＲ扩增是在端粒酶的介导下进行而非ＤＮＡ污染或其它端粒修复因子所致．从而不但建立起检测人癌细胞内端粒酶活性的可靠方法，也为针对端粒酶的胶质母细胞瘤生物／药物治疗提供了实验依据．

全反式维甲酸及香龙散含药血清对胃癌细胞端粒酶活性的影响

目的 分析全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对胃癌细胞端粒酶活性的影响 ,并探讨端粒酶活性和细胞凋亡的关系。方法 用纯种新西兰家兔制备中药香龙散含药血清 ,应用TRAP分析全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞端粒酶活性的影响 ,应用DNALadder分析及流式细胞仪观察全反式维甲酸及中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞凋亡的影响。结果 首先全反式维甲酸和中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞生长的抑制有协同作用。其次 ,全反式维甲酸处理胃癌细胞 2 4小时 ,即可见端粒酶活性下调 ,中药香龙散含药血清无此作用 ,也不能加强全反式维甲酸对端粒酶活性下调的作用。最后 ,在全反式维甲酸处理的胃癌细胞中 ,第 3天出现了细胞凋亡 ,并且中药香龙散含药血清对全反式维甲酸诱导的细胞凋亡有加强作用。结论 全反式维甲酸或 /和中药香龙散含药血清对培养的胃癌细胞生长有抑制作用 ,其中全反式维甲酸可能通过抑制端粒酶活性表达而诱导了胃癌细胞凋亡 ,中药香龙散含药血清有加强全反式维甲酸诱导细胞凋亡的作用 。

反义表皮生长因子受体cDNA转染对胶质母细胞瘤端粒酶活性的影响

目的:探讨反义表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor, EGFR)cDNA转染对胶质母细胞瘤细胞株U87MG端粒酶活性和端粒长度的影响及其机制。方法:用反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤细胞株U87MG后,筛选出低表达EGFR的细胞株;用telomericrepeatamplificationprotocolassay(TRAP分析)检测肿瘤细胞的端粒酶活性;用Southern印迹杂交方法检测端粒长度;用半定量RT PCR方法检测端粒酶逆转录酶(humantelomerasere versetranscriptase, hTERT)、端粒酶相关蛋白1(humantelomerase associatedprotein1, hTEP1)和c myc基因的表达。结果:反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤U87MG后,其EGFR蛋白表达量明显降低;肿瘤细胞生长缓慢,对EGF的生长刺激作用,反应明显减弱;肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低,端粒长度显著缩短;hTERT的mRNA表达量略微降低,而hTEP1和c myc的mRNA表达量未见明显改变。结论:反义EGFRcDNA转染胶质母细胞瘤可以有效阻断EGFR信号传导通路,降低肿瘤细胞的端粒酶活性,使端粒长度缩短,这可能是抑制肿瘤细胞生长的新机制;反义EGFRcDNA转染降低hTERTmRNA的表达,可能是其降低端粒酶活性的机制之一。