继发性肺结核患者治疗初期FOXP3 TSDR DNA去甲基化变化情况分析

目的应用一种 FOXP3 TSDR DNA去甲基化荧光定量PCR技术，并分析该方法在继发性肺结核患者治疗初期变化情况。方法选取2014年6月～2015年5月来深圳市龙华新区慢性病防治中心就诊的继发性肺结核病人47例作为研究组，健康对照40例，分离外周血单个核细胞，筛选 CD4＋CD25＋T细胞，提取基因组 DNA。利用去甲基化 FOXP3 TSDR特异性引物扩增对照组基因组DNA，通过酶切、克隆和回收纯化等过程构建质粒标准品，优化 FOXP3 TSDR去甲基化实时定量PCR技术，建立CD4＋CD25＋T细胞比例与 FOXP3 TSDR PCR 拷贝换算关系，用该方法分析对照组和研究组0周及治疗后2，4和8周时的调节T细胞频率（FOXP3 TSDR去甲基化），应用 spss16.0软件统计分析实验所得数据。结果0周时47例研究组抗酸染色均为阳性，对照组均为阴性。以抗酸染色结果分组：对照组、抗酸（1＋）组、抗酸（2＋）组、抗酸（3＋）组和抗酸（4＋）组其调节 T细胞频率分别为1.63％＆#177;0.70％，1.96％＆#177;0.10％，1.32％＆#177;0.32％，0.86％＆#177;0.21％和0.53％＆#177;0.12％，抗酸（2＋）组与对照组差异无统计学意义，抗酸（3＋）组与对照组差异有统计学意义。研究组0，2，4和8周时调节T细胞频率均值、范围及95％可信区间分别为1.05％（0.32％～2.03％），CI（0.93％，1.18％）；2.04％（0.95％～3.95％），CI（1.85％，2.24％）；3.44％（2.35％～4.95％），CI（3.27％，3.61％）；2.79％，（1.02％～4.27％），CI （2.60％，2.98％）。对照组与研究组0周时人群调节T细胞频率之间差异有统计学意义（t＝4.669，P＜0.05）。单变量方差分析显示治疗时间对研究组外周血调节T细胞频率（FOXP3 TSDR 去甲基化）水平变化有影响（F＝347.2，P＜0.001， df＝3，组内F＝407.4，P＜0.001，df＝3），治疗时间和分组交互效应呈线性关系（F＝678.2，P＜0.001，df＝1）。结论该方法敏感、特异，可以用于继发性肺结核患者的疗效监测。