凯氏定氮法与杜马斯燃烧法检测三氯乙酸沉淀大豆和小麦蛋白中蛋白氮含量研究

目的检验尿素干扰下三氯乙酸沉淀分离大豆和小麦蛋白质的效果。方法本研究以牛奶、大豆蛋白、小麦水溶性组分为参试样品,分别在去离子水、尿素溶液2种溶液体系下分散样品,参考国家标准采用三氯乙酸沉淀蛋白氮,2种蛋白检测方法(凯氏定氮法、杜马斯燃烧法)检测氮含量,并计算氮检测回收率评估三氯乙酸对大豆蛋白、小麦水溶性组分等植物性蛋白的适用性。结果去离子水(无外源氮)分散的上清液经三氯乙酸沉淀,凯氏定氮法和杜马斯燃烧法检测牛奶的回收率分别为114%、101%,大豆的回收率分别为96%、98%,小麦的回收率分别为104%、105%。尿素溶液(有外源氮)分散的上清液经三氯乙酸沉淀,牛奶的回收率分别为99%、94%,大豆的回收率分别为95%、92%,小麦的回收率分别为101%、92%。结论有无尿素干扰时,三氯乙酸均可以沉淀大豆蛋白、小麦水溶性组分中蛋白氮,并可以采用凯氏定氮法、杜马斯燃烧法检测,回收率较好。

三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取

目的探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率。方法采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比。结果三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响。结论三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究。

2型猪链球菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

为改进适用于2型猪链球菌分泌组双向电泳样品的制备方法,本研究将无蛋白细菌培养液培养2型猪链球菌,分别以超滤-冻干法、超滤-冻干-丙酮沉淀法和改良超滤-冻干-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法富集培养物上清中的细菌分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高。因此,改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的2型猪链球菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

响应面法优化椴树蜂蜜蛋白提取工艺

以椴树蜂蜜为原材料,采用响应面法优化椴树蜂蜜蛋白提取工艺。根据中心旋转试验设计,以椴树蜂蜜蛋白含量为指标,采用三氯乙酸沉淀法提取椴树蜂蜜蛋白,选取料液比、提取时间、三氯乙酸浓度进行三因素三水平的响应面试验,并与乙醇沉淀法、硫酸铵沉淀法进行对比。结果显示,3个因素对椴树蜂蜜蛋白提取均有一定的影响,其中三氯乙酸浓度影响最大,料液比和提取时间次之,优化后所得的最佳提取工艺为三氯乙酸浓度17.7%,料液比1∶1.83(g/mL),提取时间37.2 min,椴树蜂蜜蛋白含量最大为99.94μg/g。

温莪术蛋白双向电泳技术的建立

目的:建立温莪术的双向电泳技术(2-DE)体系。方法:采用TCA/丙酮沉降法提取蛋白,并用超速离心去除杂质。采用固相pH胶条在IPGphor TM Ⅲ等电聚焦系统上进行等电聚焦,采用Bio-Rad电泳仪进行SDS-PAGE电泳,以银染法染色。结果:得到了上百个点的双向电泳图谱。结论:本研究成功建立了温莪术蛋白双向电泳技术体系。

双缩脲比色法分析三氯乙酸沉淀乳蛋白效果探讨

通过对双缩脲比色法分析加热条件、不同浓度的三氯乙酸(TCA)沉淀牛乳蛋白的效果,以及pH影响双缩脲比色法分析TCA沉淀牛乳蛋白的效果进行分析。结果表明,采用双缩脲比色法分析TCA沉淀乳蛋白的效果:当使用标准双缩脲试剂时,受TCA浓度的影响较大,需TCA浓度≤15%;当TCA浓度>15%时,需调整pH至11以上;pH≥11时,碱性强度微弱的变化对OD值结果无明显影响;加热煮沸与未加热煮沸对TCA沉淀牛乳蛋白的效果差别无明显规律。

人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量测定方法的探究

目的:探究适宜的人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量测定方法。方法:分别应用《中国药典》三部(2010年版)中蛋白质测定法项下三氯醋酸沉淀法和两种改良后的三氯醋酸法测定6批人纤维蛋白原制剂中的蛋白质含量,比较三种方法的稳定性和平行性。结果:改良后的三氯醋酸沉淀2法[用三氯醋酸代替《中国药典》三部(2010年版)钨酸钠沉淀法中钨酸钠和硫酸溶液]的稳定性和平行性明显比《中国药典》三部(2010年版)中蛋白质测定法项下三氯醋酸沉淀法和改良后的三氯醋酸沉淀3法更好,相对标准偏差(RSD)更低。结论:改良后的三氯醋酸沉淀2法更适合人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量的测定。

多肽ADWX-1在大鼠体内的药代动力学研究

初步研究了蝎活性多肽ADWX-1单次皮下给药后在SD大鼠体内的动态变化过程。建立了同位素示踪结合三氯乙酸沉淀法测定大鼠血浆中ADWX-1的方法,绘制了ADWX-1单次皮下给药后在大鼠中的血药浓度-时间曲线,并计算出药代动力学参数。用氯胺-T法标记多肽ADWX-1,凝胶过滤HPLC法测定125I-ADWX-1的放射化学纯度,全细胞膜片钳法测定125I-ADWX-1的生物活性。结果显示,标记物125I-ADWX-1的放射化学纯度为96.77%,在相同浓度(1 nmol/L)下,标记物125I-ADWX-1与ADWX-1的生物学活性无显著差异。三氯乙酸沉淀法测定SD大鼠血浆中ADWX-1浓度的最低定量限为19.5 ng/mL,线性范围为39～2 500 ng/mL;大鼠SC单次给予50、100和200μg/kg ADWX-1多肽后的半衰期(T1/2)分别为:(161.310±41.105)、(129.832±21.315)、(143.021±34.727)min,无显著差异;药时曲线下面积(AUC)和峰浓度(Cmax)分别为(21 869.101±4 282.617)、(41 175.180±6 699.601)、(90 543.101±27 233.192)μg/min.L和(101.465±16.198)、(208.312±19.412)、(429.124±104.474)μg/L,AUC和Cmax与给药剂量呈良好的线性关系。这说明,ADWX-1皮下给药后在大鼠体内稳定性较好,半衰期较长,符合静脉外给药一房室模型一级动力学过程。

纳升级反相液相色谱串联质谱法分析海马蛋白质组

目的:为了全面了解海龙的蛋白质成分,对其蛋白表达谱进行蛋白质组学分析。方法:应用三氯乙酸/丙酮沉淀法提取海马药材的蛋白质,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离分析,将聚丙烯酰胺凝胶电泳条带切下进行胶内酶解处理后,应用纳升级反相液相色谱串联质谱(nano RPLC-MS/MS)法系统分析海马提取蛋白质胶内酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质。结果:共鉴定到海马蛋白192种,等电点范围为4.06~12.18,相对分子质量范围为3.06×10~3~3.52×10~6,多肽10 680个;通过生物信息学方法分析了海马提取蛋白质的分子功能。得到海马提取物中的蛋白质具有结合、酶催化、肌动、ATP酶等功能活性,其中结合活性的蛋白质占的比例较大。结论:本研究建立了海马的蛋白质表达谱,可为海马药材中蛋白质的深入研究奠定基础,对海马药材有效成分的分析和海马药材鉴别具有重要意义。

三氯醋酸/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白效果的对比研究

目的探讨三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果。方法选取2017年6月至2019年6月长春市中心血站采集的O型RHD阳性新鲜冰冻血浆12例,组成4个样品并分别编号为A1、A2、B1、B2。采用TCA/丙酮沉淀法去除A1、A2样品血浆中高丰度蛋白,硫酸铵沉淀法去除B1、B2样品血浆中高丰度蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证血浆中高丰度蛋白去除的效果。Clean-up Kit去除蛋白质中干扰物质,并采用SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)验证Clean-up Kit的效果。结果银染的SDS-PAGE胶图显示,TCA/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法均可有效去除血浆高丰度蛋白,但与硫酸铵沉淀法相比,TCA/丙酮沉淀法的SDS-PAGE条带更清晰。SDS-PAGE和2-DE显示两种方法去除清蛋白的血浆Clean-up Kit后对去除血浆中其他干扰物质效果并不明显。结论TCA/丙酮沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果更好,且去除血浆中清蛋白后的血浆Clean-up Kit对去除效果无显著影响,可直接进行2-DE、图像分析及质谱检测分析。