Tricine-SDS-PAGE法对阿胶的酶解物鉴别

目的 Tricine-SDS-PAGE法分析阿胶酶解物。方法分别采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和木瓜蛋白酶对阿胶、龟甲胶和鹿角胶进行酶解,然后将酶解液分别进行Tricine-SDS-PAGE小分子电泳。结果阿胶不同酶解物的Tricine-SDS-PAGE电泳谱均出现多条细条带,与酶空白组、样品空白组相比有一定差异。阿胶与龟甲胶、鹿角胶的图谱条带有很大差异。结论采用酶解物联合Tricine-SDS-PAGE法鉴定阿胶,较普通PAGE信息量更大,可以区分其他胶类。

全蝎可溶性蛋白质TRICINE-SDS-PAGE电泳法分离研究

目的:探索全蝎可溶性蛋白质电泳法分离的最佳体系。方法:用TRICINE-SDS-PAGE法对全蝎蛋白提取液所含混合蛋白进行分离,用Quantity One软件确定各蛋白谱带分子量。结果:用该法可获得11条较高分辨率的蛋白谱带,其对应分子量分别为42.000,33.515,27.509,25.524,21.615,17.640,15.839,13.994,11.318,10.000,8.357 kDa。结论:TRICINE-SDS-PAGE电泳法可用于全蝎可溶性蛋白的分离。

菲牛蛭中多肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法研究

试验旨在探讨适合菲牛蛭中小分子多肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法。采用电泳纯重组水蛭素验证Tricine-SDS-PAGE的分离效果,对菲牛蛭的水提醇沉粗提物进行分离,建立小分子多肽对数分子量和迁移率的回归关系方程,计算多肽分子质量。结果显示:菲牛蛭中小分子多肽对数分子量和迁移率成正比直线关系,从菲牛蛭中分离得到7个分子量在10~31 kDa的多肽。研究表明,Tricine-SDS-PAGE对菲牛蛭中的小分子多肽具有较好的分离效果。

Tricine-SDS-PAGE分离鼻咽癌血清多肽方法初探

目的建立鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）血清多肽稳定且灵敏的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。方法通过Tricine-SDS-PAGE电泳分离鼻咽癌血清多肽,比较乙腈处理与非处理血清,以及电泳时间长短等条件对分离效果的影响。结果鼻咽癌原始血清样本量200μL、经1.2倍体积乙腈沉淀,冷冻干燥后加入40μL的生理盐水溶解,取12~18μL上样,6.7%浓缩胶、夹层胶60 V,之后60 V的电压至电泳结束,电泳时间4 h 20 min,分离10 kDa以下的鼻咽癌血清多肽效果最佳。结论建立鼻咽癌血清多肽的Tricine-SDS-PAGE稳定电泳分离方法,电泳效果与样本的处理方法和电泳条件有关。

Tricine-SDS-PAGE电泳定量检测人体泪液中溶菌酶含量

目的建立一种定量检测人体泪液中溶菌酶含量的方法。方法通过改进的Tricine-SDS-PAGE电泳,分析正常人体天然泪液中分子量在3~30 k Da的蛋白质分布,使泪液溶菌酶与其它泪液蛋白有效分离,用Image J软件对溶菌酶电泳条带进行灰度分析,定量测定其中溶菌酶的含量。结果泪液溶菌酶和其它小分子蛋白可用改进的Tricine-SDS-PAGE电泳有效分离,对于人体泪液中的溶菌酶检测专属性良好;上样量10~30μg范围内,溶菌酶含量和电泳条带灰度面积线性关系良好(r=0.9934);分析17例人体泪液的样本,其中溶菌酶的含量在1.38~3.07 mg/m L。结论改进的Tricine-SDS-PAGE电泳法简单直观,并能批量性的一次分析多个样本,可用于科研及临床上人体泪液中溶菌酶的含量检测。

牛肉酶解物的Tricine-SDS-PAGE电泳分析

用Tricine-SDS-PAGE电泳法对牛肉酶解物的分子量进行了测定，结果表明产物的分子量分布在1060～24000范围，分子量在5000以下的低分子蛋白成分含量约75％。

Tricine-SDS-PAGE分析极低分子量蛋白的条件优化

目的优化适合分析极低分子量蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳方法。方法采用Tricine-SDS-PAGE电泳方法,考察凝胶浓度、交联度对分离效果的影响,筛选出最佳电泳条件。并利用所优化方法分析验证凉山虫草中的蛋白质组分。结果在分离胶交联度为0.165、浓度为5%及浓缩胶交联度为0.04、浓度为2.7%时,Tricine-SDS-PAGE对3～20 kDa蛋白质有较高的分辨率,凉山虫草中的极低分子量蛋白质组分在该条件下比在Tris-SDS-PAGE系统下可得到更好的分离。结论所优化的方法对20 kDa以下极低分子量蛋白的分辨率高,条带的线性关系良好。

鱼类主要过敏原小清蛋白的检测

目的:鱼类是主要的致敏食物之一。痕量的过敏原即可能导致过敏患者产生严重的过敏反应,因此,本研究拟对多种鱼类主要过敏原小清蛋白的存在情况进行分析及相对定量检测。方法:采用热抽提获得鱼肌肉中小清蛋白的粗提物,通过Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析粗提物中蛋白的存在情况,利用ELISA法对不同鱼类白肉和红肉中的小清蛋白含量进行测定。结果:Tricine-SDS-PAGE和Western blot结果显示粗提物蛋白主要为小清蛋白,分子量在10～14kD并具有一定的种属特异性。在不同的鱼类中存在着不同数量的小清蛋白异构体,它们与抗蛙小清蛋白单克隆抗体PARV-19的反应程度存在差异,表明小清蛋白的含量有所不同,与PARV-19结合的表位也可能存在一定的差异。ELISA结果显示,不同鱼类白肉中小清蛋白的含量为红肉中的4～33倍。结论:本研究建立的方法可用于多种经济鱼类主要过敏原小清蛋白的有效检测。

Tricine-SDSP-AGE电泳分析小分子多肽

研究旨在解决常规SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对一些小分子多肽进行电泳分析过程中极易扩散丢失,常无着色带显示等问题。实验采用不同类型胶来电泳分析低分子量多肽,比较Tricine SDS PAGE电泳分析小分子多肽时的聚丙烯酰胺浓度和交联度,为小分子多肽的分析与鉴定提供快速准确的条件。

重组牛乳铁蛋白素在大肠杆菌中的表达

将牛乳铁蛋白素(lactoferricin B)基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21大肠杆菌表达系统,筛选表达温度和诱导剂IPTG的浓度,使其在原核表达系统中表达,将诱导表达的产物进行Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳及抑菌活性检测,证明该表达产物是乳铁蛋白素。实验结果表明,LactoferricinB基因能够在原核表达系统中表达,表达量约占细菌总蛋白的21%,而且表达的蛋白质具有生物学活性。

乳酸片球菌抑菌物质细菌素的分离纯化

将乳酸片球菌接种于MRS培养基,37℃静置培养17h后产生抑菌物质细菌素。用三步法从培养液中分离纯化细菌素:首先根据细菌素在pH6.0时与菌体的吸附力最强,pH2.0时吸附力最弱,通过调节pH和离心来收集细菌素,然后经过SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱层析和Sephadex G-50凝胶层析进行纯化,最后细菌素的得率为0.19%,比活为5.17×104AU/mg,纯化了34.54倍。得到的细菌素样品通过Tricine-SDS-PAGE电泳出现清晰条带,大小约为4600D。

山羊胎盘小肽的分离及对小鼠抗氧化能力的影响

本文分离并初步鉴定山羊胎盘小肽,探讨各小肽对小鼠抗氧化能力的影响。采用超滤法制得山羊胎盘小肽的粗提物(Mr≤10 kDa),经Superdex-75层析分离,Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳初步鉴定,分离的各种小肽及粗提物按低中高剂量分别腹腔注射小鼠,每天1次持续1周,测小鼠血清中SOD和MDA的含量。结果表明:Superdex-75层析得到4个组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,电泳显示其分子量分别为10.139、8.166、7.447、6.761 KDa,试验小鼠血清检测显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的SOD和MDA含量与对照组没有显著差异(P(0.05),Ⅳ和粗提物能提高SOD含量和降低MDA含量,不过低剂量组与对照组没有显著差异(P(0.05),中高剂量组有显著差异(P(0.05),呈现剂量相关性,效果最明显的是粗提物,不过粗提物与Ⅳ没有显著差异(P(0.05)Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳显示,Superdex-75层析可以初步提纯山羊胎盘小肽;分离的小肽和粗提物进行动物试验,表明小肽Ⅳ和粗提物对小鼠具有抗氧化作用。

pH吸附法纯化戊糖乳杆菌素31-1的研究

戊糖乳杆菌素31-1,由分离自宣威火腿的戊糖乳杆菌31-1产生,随pH的改变可以选择性的吸附于产生菌细胞表面,pH5.0时吸附率达75%,而在pH3.0以下,7.0以上吸附率为0。基于以上规律,通过调整pH值,戊糖乳杆菌素31-1在pH5.0吸附、pH7.0释放于产生菌细胞,达到了较好的分离纯化效果,戊糖乳杆菌素31-1回收率为45%,纯化倍数为33。经Tricine-SDS-PAGE进行分子量的估测及纯度鉴定,证实戊糖乳杆菌素31-1的分子量在6400～14000D之间。该纯化方法简便、高效,具有工业生产的潜力。

家蝇幼虫培养及其抗菌肽的初步研究

通过天然家蝇幼虫的人工培养及Tricine-SDS-PAGE电泳,分离纯化出2种抗菌肽(命名为MDL-1、MDL-2),并检测了该抗菌肽的抑菌活性。MDL-1的相对分子量10772Da,MDL-2的相对分子量6091Da。实验结果表明:剩肉菜(骨头和虾皮等)对天然家蝇的产卵引诱力最大;红糖和奶粉的最佳比例为3:1;家蝇幼虫食料最佳含水量为80%;家蝇幼虫单体平均增重最大的最佳培养基为麦麸和骨头的混合物。抑菌活性检测结果:MDL-1对枯草芽胞杆菌的抑菌效果最强,大肠杆菌次之,金黄色葡萄球菌最差;MDL-2对大肠杆菌的抗菌效果最好,金黄色葡萄球菌次之,枯草芽胞杆菌稍差。

pH值对巴西橡胶树胶乳β-1,3-葡聚糖酶结合黄色体膜的影响

基于黄色体内含物中的多种可溶性蛋白质以及黄色体膜在胶乳凝固中所起到的重要作用,已提出了多种阐明胶乳凝固机制的假说,但有关β-1,3-葡聚糖酶在胶乳凝固中的作用尚无报导。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和免疫印迹技术(Western blotting),对不同pH值条件下破裂收集的黄色体内含物和膜组分中的蛋白质进行研究。结果表明,在pH5.5左右的酸性环境中,β-1,3-葡聚糖酶主要表现为可溶性蛋白质,很少结合黄色体膜;但在pH6.9左右的中性及偏碱性的环境下,大量β-1,3-葡聚糖酶结合到黄色体膜上,可溶性蛋白所占的比例很低。首次发现了β-1,3-葡聚糖酶可以结合黄色体膜,二者结合的程度明显受环境pH值的影响。该结果对于认识β-1,3-葡聚糖酶的生物功能,完善黄色体在胶乳凝固中的作用及阐明乳管堵塞机制具有重要意义。

羊和猪胎盘肽的提取

利用超滤法从羊和猪的胎盘中提取胎盘肽,用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法对其进行初步定性鉴定。成功分离显示出了羊的胎盘肽,其分子质量小于5 ku,与人胎盘肽的分子质量范围完全符合。猪的6 ku的蛋白带很明显,但低于5 ku的蛋白带不是很明显。

一种快速分离检测产脂肽类生物表面活性剂枯草芽孢杆菌的方法

脂肽(Lipopeptide)是由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等微生物产生的一类具有较强表面活性的生物表面活性剂。枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因(sfp)是枯草芽孢杆菌中参与脂肽代谢的功能性基因。采用sfp基因PCR对从环境中得到的一组产生表面活性剂的微生物进行筛选,结合Tricine-SDS-PAGE电泳对PCR结果呈阳性的菌株的代谢粗初提物进行检测,初步鉴定得到两株枯草芽孢杆菌。进一步利用16S rDNA序列的系统发育学分析确定这两种菌株为枯草芽孢杆菌,并利用TLC、HPLC鉴定其产物为脂肽类表面活性剂,从而建立了一套快速分离检测产生脂肽类生物表面活性剂的枯草芽孢杆菌方法。

人乳与牛乳天然小分子蛋白肽的差异对比及功能分析

研究利用超滤技术和Tricine-SDS-PAGE电泳将人乳与牛乳中天然存在的小分子蛋白肽进行分离。蛋白条带经质谱鉴定发现,人乳小分子蛋白肽含有28种,牛乳小分子蛋白肽含有24种,二者存在18种相同蛋白肽。Gene Ontology(GO)功能注释分析发现,在生物过程中,人乳小分子蛋白肽发挥的作用要高于牛乳小分子蛋白肽,尤其体现在免疫过程中的作用;在分子功能上,二者主要分子功能是结合作用,其中人乳小分子蛋白肽的结合作用强,而牛乳小分子蛋白肽参与的转运活性的分子功能大于人乳小分子蛋白肽;在细胞组成上,二者均参与了细胞与细胞膜的组成。通过Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)代谢通路分析可知,人乳小分子蛋白肽参与酪氨酸和抗原的加工和呈递2个代谢通路,而牛乳小分子蛋白肽仅参与系统性红斑狼疮代谢通路。对人乳和牛乳中的小分子蛋白肽组成进行研究,不仅为揭示人乳蛋白和牛乳蛋白的差异及其生理功能提供了理论依据,而且为婴幼儿食品、母乳化制品达到母乳水平提供有益探索。

1株链霉菌产ε-聚赖氨酸的结构及分子量分析

目的：研究确定1株疑似产ε-聚赖氨酸链霉菌所合成产物的化学结构和分子量。方法：采用D152树脂离子交换法分离纯化ε-聚赖氨酸;薄层色谱分析化学组成;紫外可见扫描光谱分析有机官能团;长程异核位移相关谱分析赖氨酸分子间的键连接方式;Tricine-SDS-PAGE电泳分析ε-聚赖氨酸分子量。结果：薄层色谱显示赖氨酸为纯化产物的惟一化学组成;纯化产物200nm处有最大吸收峰,260～280nm蛋白特征吸收处无吸收;长程异核位移相关谱显示纯化产物为ε-聚赖氨酸;所分离ε-聚赖氨酸分子量约为3300u左右。结论：菌株GIM8发酵产物为ε-聚赖氨酸;薄层色谱、紫外可见扫描光谱以及长程异核位移相关谱三者结合适用于ε-聚赖氨酸的化学组成和结构分析。