桐油脂肪酸组成分析和甘三酯结构判定

采用2-氨基-2-甲基丙醇(2-amino-2-methylpropanol,AMP)衍生化、GC/MS法分析桐油的脂肪酸组成:软脂酸3.41%,硬脂酸3.71%,油酸7.07%,亚油酸7.51%,亚麻酸1.31%,十八碳共轭三烯酸73.19%,未定出成分3.80%;采用RP-HPLC/APCI-MS法分离桐油中的甘三酯组分,并根据特定甘三酯断裂生成的特征甘二酯离子的丰度比初步判定主要甘三酯的结构。

癞葡萄籽油的脂肪酸分布分析及共轭亚麻酸的鉴定

柱色谱法测定癞葡萄籽油中甘油一酯、甘油二酯、甘油三酯含量分别为2.64%、0.66%和85.43%。研究发现猪胰脂酶定向水解法及其改进方法不适于癞葡萄籽油的脂肪酸分布分析;根据RP-HPLC/ESI-MS、紫外光谱及红外光谱的分析结果,鉴定出癞葡萄籽油所含的主要共轭亚麻酸为α-桐酸(9c,11t,13t-C18∶3),次要的2个共轭亚麻酸可能分别为石榴酸(9c,11t,13c-C18∶3)和β-桐酸(9t,11t,13t-C18∶3)。

三烯脂肪酸在高等植物逆境胁迫应答中的作用

三烯脂肪酸(trienoic fatty acids,TAs)是高等植物细胞膜脂中主要的不饱和脂肪酸。三烯脂肪酸不仅是膜的组成成分,而且可以调节植物对温度、盐、干旱等非生物胁迫以及病害等生物胁迫的适应性。本文介绍了高等植物三烯脂肪酸及其相应的脂肪酸去饱和酶,重点综述了三烯脂肪酸在各种逆境胁迫应答中的作用。在低温、盐、干旱等非生物逆境胁迫下,植物体中三烯脂肪酸的含量增加,以维持膜的流动性和稳定性,降低逆境对膜结构和功能的损害,从而增强植物的抗逆性。在病虫害等生物逆境胁迫下,三烯脂肪酸可能做为合成茉莉酸或其它oxylipins的前体参与植物对生物胁迫应答的防卫反应,也可能独立引发植物体产生系统获得性抗性。

癞葡萄籽油脂肪酸组成的GC/MS分析

采用2-氨基-2-甲基丙醇(AMP)衍生化,GC/MS法分析癞葡萄籽油的脂肪酸组成。测定结果为:软脂酸1.65%,硬脂酸31.78%,油酸5.52%,亚油酸3.86%,十八碳共轭三烯酸55.13%,未定出成分2.07%。癞葡萄籽油的主要成分为十八碳脂肪酸,其中十八碳不饱和脂肪酸占64.51%。AMP衍生化GC/MS法可对不饱和脂肪酸双键的位置准确定位,将癞葡萄籽油中的3种共轭三烯酸的顺反异构体分开。

表氧化二十碳三烯酸对游离脂肪酸诱导胰岛β细胞凋亡的抑制作用

目的:研究11,12-表氧化二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EETs)抑制游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对原代小鼠胰岛β细胞凋亡的影响,探讨11,12-EETs保护胰岛β细胞是否通过抑制内质网应激相关转录因子ATF4与ATF6核转位来实现.方法:棕榈酸(palmitic acids,PA)诱导原代小鼠胰岛β细胞凋亡,与11,12-EETs共同孵育24h后,采用流式细胞术检测该细胞的线粒体膜电位的变化与细胞凋亡水平的改变,以观察11,12-EETs对原代小鼠胰岛β细胞的保护作用;用免疫印迹法检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关转录因子ATF4与ATF6在胞浆与胞核中的蛋白表达,以此观察二者的核转位改变.结果:100nmol/L11,12-EETs与400μmol/LPA共同孵育胰岛β细胞24h后,与FFAs对照组相比,FFAs+EET组可显著提升胰岛β细胞的存活率(62.1%±7.3%vs53.0%±6.1%),并明显降低胰岛β细胞线粒体的去极化水平(23.6%±3.4%vs35.2%±4.7%);11,12-EETs可有效抑制PA诱导的细胞凋亡(24.5%±4.2%vs40.1%±5.6%);同时,PA刺激的ATF4与ATF6的核转位受到11,12-EETs的影响,胞核ATF4与ATF6蛋白水平显著性降低,胞浆ATF4与ATF6蛋白水平明显上调.结论:11,12-EETs可以抑制FFAs诱导的凋亡,其分子机制可能是通过抑制FFAs引发的ATF4与ATF6转位导致内质网应激相关基因表达.

一种方便有效地合成三烯酸与苯甲酸类化合物的方法

以烯酸炔丙基酯为反应原料,在碱性条件下,顺利发生分子内Ireland-Claisen重排/异构化反应,合成了标题化合物。实验结果表明,以乙腈作溶剂,在DBU(1,8-二氮双环[5.4.0]十一碳-7-烯)和TMSCl(三甲基氯硅烷)存在条件下,烯酸炔丙酯可顺利发生分子内重排反应,高收率地得到标题化合物,该合成路线具有反应条件温和、收率高等优点。

共轭三烯酸抑制肝癌细胞体外增殖和凋亡诱导的作用

目的:探讨共轭三烯酸抑制肝癌细胞体外增殖的作用机制.方法:采用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、Brdu掺入实验(20g/L,12h)研究共轭三烯酸对人正常肝细胞L-02,人肝癌细胞系SMMC-7721和鼠肝癌细胞系Hepa1-6的体外增殖抑制作用;Hoechst33342荧光染色,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布.结果:共轭三烯酸处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(SMMC-7721:1.5±2.6vs1.9±12.3,P<0.05;Hepa1-6:1.0±1.5vs1.2±9.7,P<0.05),克隆形成下降(SMMC-7721:149.3±3.1vs191.7±5.8,P<0.05;Hepa1-6:32.7±3.1vs61.3±4.2,P<0.05),Brdu标记指数降低(SMMC-7721:42.3%±1.5%vs63.6%±0.7%,P<0.05;Hepa1-6:59.5%±0.7%vs79.6%±1.6%,P<0.05),凋亡细胞增多(SMMC-7721:48.9%±0.7%vs9.9%±0.4%,P<0.05;Hepa1-6:65.1%±1.1%vs15.9%±0.7%,P<0.05);凋亡指数升高(SMMC-7721:16.3%±0.7%vs3.3%±0.4%,P<0.05;Hepa1-6:21.7%±1.1%vs5.3%±0.4%,P<0.05),G0/G1期细胞数增加(SMMC-7721:48.4%±1.8%vs38.0%±2.1%,P<0.01;Hepa1-6:53.4%±2.1%vs41.1%±0.7%,P<0.01),S期细胞数减少(SMMC-7721:32.2%±2.9%vs37.2%±1.9%,P<0.05;Hepa1-6:28.3%±0.9%vs39.9%±0.9%,P<0.01).结论:共轭三烯酸对肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用,其作用机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成,诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞.

番茄内质网ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体的构建与转化

内质网型ω-3脂肪酸去饱和酶(FAD3)是不饱和脂肪酸合成途径中催化十八碳二烯酸[18∶2(9,12)]转化为十八碳三烯酸[18∶3(9,12,15)]的关键酶。通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到LeFAD3的全长cDNA,基因全长为1 184bp,开放阅读框(ORF)为1 134bp,注册号为EU251190。将该基因正反向序列分别插入带有35S-CaMV启动子pBI121表达载体下游,获得正、反义表达载体,转化农杆菌LBA4404,利用农杆菌介导法转化番茄,获得转基因番茄植株。

TCLA诱导大鼠脑胶质瘤细胞增殖抑制及凋亡的研究

目的探讨共轭三烯酸(TCLA)对大鼠脑胶质瘤细胞体外增殖抑制、凋亡作用及其作用机制。方法采用细胞增殖实验(MTT法)、克隆形成实验、BrdU掺入实验检测TCLA对大鼠脑胶质瘤细胞系C6的体外增殖抑制作用;Hoechst33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;RT-PCR检测调亡相关基因腺苷二磷酸核糖转移酶1(ADPRTL1)、细胞色素P4501A1(CYP1A1),过氧化物酶增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)的表达。结果MTT法发现,TCLA可显著抑制C6细胞株增殖(40μmol/L,72h,细胞存活率56.71%±0.98%),并存在量-效、时-效关系;克隆形成下降,40μmol/L的TCLA可完全抑制克隆形成;实验组BrdU标记率63.1%±1.0%,较对照组(95.6%±1.4%)明显降低(P<0.05);Hoechst33342荧光染色示,实验组凋亡率10.0%±0.3%,较对照组(1.6%±0.6%)明显升高(P<0.05);流式细胞术分析结果示,TCLA使C6细胞凋亡指数升高,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,实验组ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γmRNA表达均较对照组增强,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论TCLA对大鼠脑胶质瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用。其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因(ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ)表达有关。

共轭三烯酸对乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的:探讨共轭三烯酸(TCLA)对乳腺癌细胞的增殖抑制、凋亡作用及其作用机制。方法:用TCLA处理人正常肝细胞(L02)及乳腺癌细胞(MCF-7),用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、EdU掺入试验研究TCLA对人正常肝细胞和乳腺癌细胞的增殖抑制作用;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测TCLA对细胞周期的影响;RT-PCR检测凋亡相关基因PPAR-γ、P53、CASPASE-3 mRNA表达。结果:用TCLA处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P<0.05),半效抑制浓度(IC_(50))为50μmol,呈时问-剂量-效应关系;克隆形成下降(P<0.05)亦呈时间-剂量-效应关系;EdU标记指数降低(P<0.05),AO/EB染色凋亡细胞增多(P<0.05),细胞周期分布改变,凋亡指数显著增加(P<0.01),S期细胞显著减少(P<0.05);RT-PCR检测RTPCR检测凋亡相关基因PPAR-γ(P<0.05)、P53(P<0.05)、CASPASE-3(P<0.01)mRNA表达均比对照组显著增加。结论:TCLA对乳腺癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用机理可能与抑制DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因PPARγ、P53、CASPASE-3表达有关。

基于网络药理学和分子对接探讨糖脉康颗粒治疗糖尿病周围神经病变的作用机制

目的通过网络药理学和分子对接的方法,探究糖脉康颗粒治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的机制。方法利用检索中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)对筛选糖脉康颗粒的组方药物的化学活性物质,药物靶标采用Swiss Target Prediction平台进行预测,并搜索Genecards数据库、OMIM数据库、TTD数据库和DisGeNET数据库预测DPN相关靶点。对药物与疾病的靶标基因取交集后采用Cytoscape软件构建活性成分–靶点网络图,并导入String数据库构建PPI网络,进行拓扑分析寻找核心基因。采用R软件进行基因本体(GO)注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果糖脉康颗粒治疗糖尿病周围神经病变的关键化学成分为巴马汀、广玉兰内酯和11,14,17-三烯酸甲酯等;药物-疾病的共同靶点共331个,关键蛋白包括细胞肿瘤抗原p53、连环蛋白β-1(CTNNB1)、热休克蛋白90-α(HSP90AA1)等。GO富集分析显示,生物过程主要包括细胞对化学应激的反应、对营养素水平的反应和肽基酪氨酸磷酸化等,细胞组成主要包括膜筏膜微域和膜区等,分子功能主要包括蛋白酪氨酸激酶活性、细胞表面受体蛋白酪氨酸激酶活性和细胞表面受体蛋白激酶活性等。KEGG富集分析所涉及的通路有糖尿病并发症中的高糖基化终产物-高糖基化终产物受体信号通路、脂质和动脉粥样硬化、前列腺癌、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药性和癌症的中枢碳代谢等。分子对接结果显示,糖脉康颗粒中的7个关键活性成分与5个核心靶点蛋白的结合能均≤-5.0kcal/mol,说明成分和靶点蛋白结合性可能较好。结论利用网络药理学和分子对接揭示了糖脉康颗粒通过多种途径,多种信号通路作用于多种靶点发挥药效,为进一步阐释糖脉康颗粒治疗糖尿病周围神经病变的作用机制提供了依据。

共轭三烯酸对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用

目的探讨共轭三烯酸（TCLA）对人胶质瘤细胞的增殖抑制作用及作用机制。方法用噻唑蓝（MTr）比色法、克隆形成试验、50溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺人试验研究TCLA对人脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用；Hoechst33342／PI双染法、流式细胞术检测细胞凋亡指数和周期分布；逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因腺苷二磷酸核糖转移酶1（ADPRTL1）、细胞色素P4501A1（CYP1A1），过氧化物酶增殖体激活受体-γ（PPAR-γ）的表达。结果共轭三烯酸对人胶质细胞瘤（U251）有明显抑制作用，呈剂量-时间撤应关系（P〈0．05）。克隆形成下降，40μmol／LTCLA可完全抑制克隆形成。BrdU标记从（91．6±3．6）％下降到（14．4±4．4）％（P〈0．05），Hoechst33342／PI双染试验，凋亡细胞增加（P〈0．05）。流式细胞仪检测显示，细胞凋亡指数从（7．3±1．2）％升高到（34．2±2．4）％（P〈0．05），G。／G。期细胞比例增加，S期细胞比例减少（P〈0．05）；RT—PCR结果显示，凋亡相关基因ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γmRNA表达增强（P〈0．05）。结论TCLA对人脑胶质瘤细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用，其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA合成、细胞周期阻滞、上调凋亡相关基因（ADPRTL1、CYP1A1、PPAR-γ）表达有关。