三氟淫羊藿素通过抑制氧化应激对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究三氟淫羊藿素(Icaritfluor,ICTF)在大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法:采用大鼠大脑中动脉栓塞模型,栓塞后10 min,分别于腹腔注射二甲基亚砜、依达拉奉及不同浓度的ICTF。栓塞2 h,再灌注24 h后,腹主动脉取血,并分离血清,比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSHPx)的活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量。脑组织做TTC染色,检测各组脑梗死范围。结果:与模型组相比,ICTF治疗组脑梗死范围均减小;血清MDA(P<0.001)和NO(P<0.05)含量降低,SOD(P<0.05,P<0.01)和GSH-Px(P<0.05)的活性显著升高。结论:ICTF对脑I/R损伤具有保护作用,其机制可能是ICTF抑制I/R损伤引起的氧化应激。

GluN3A型NMDAR在三氟淫羊藿素抗脑缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:研究三氟淫羊藿素(Icaritfluor,ICTF)对脑缺血再灌注损伤的保护作用,初步探讨ICTF对GluN3A mRNA水平和蛋白表达的影响。方法:采用大鼠大脑中动脉栓塞(MACO)动物模型,TTC染色测定脑梗死范围,q-PCR方法检测GluN3A mRNA的表达,Western blot方法检测GluN3A蛋白表达水平。结果:MCAO再灌注模型组大鼠出现明显的脑梗死,缺血半损伤区脑组织GluN3A mRNA及蛋白表达均降低,给予ICTF后,脑梗死体积缩小,GluN3A mRNA及蛋白表达均升高。结论:ICTF对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用可能与升高NMDA受体的GluN3A亚基表达有关。

三氟淫羊藿素对心肌缺血再灌注损伤大鼠Akt/mTOR信号通路及自噬相关蛋白水平的影响

目的研究三氟淫羊藿素(ICTF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)的治疗作用,并探讨其是否通过丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路调节自噬起作用。方法采用结扎左冠状动脉前降支45 min,再灌注60 min的方法制作MI/RI模型,雄性SD大鼠分为假手术组、MI/RI模型组、ICTF 0.5,1.0和2.0 mg·kg-1组。标准肢体Ⅱ导联心电图监测T波和ST段变化,TTC染色测定心肌梗死面积,Western印迹法检测心肌组织中微管相关蛋白2/1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)比值、Akt和mTOR蛋白磷酸化水平,免疫荧光检测心肌组织LC3蛋白表达水平。结果监测心电图发现,与假手术组相比,MI/RI模型组大鼠再灌注60 min时的T波(P<0.05)和ST段(P<0.01)明显升高;与模型组相比,ICTF 1.0 mg·kg-1组的T波(P<0.05)和ST段(P<0.01)显著降低。TTC染色结果表明,模型组出现明显的心肌梗死灶(P<0.01),ICTF 1.0 mg·kg-1组心肌梗死面积百分数显著降低(P<0.01)。Western印迹结果显示,与假手术组比较,模型组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P<0.01),Beclin-1蛋白磷酸化水平升高(P<0.05),Akt(P<0.01)和m TOR(P<0.05)蛋白磷酸化水平降低;与模型组相比,ICTF 1.0 mg·kg-1组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P<0.01),Beclin-1(P<0.01)蛋白磷酸化水平降低,Akt和m TOR蛋白磷酸化水平升高(P<0.01)。免疫荧光结果表明,与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织中LC3蛋白表达增多(P<0.01);与模型组比较,ICTF 1.0 mg·kg-1组表达减少(P<0.01)。结论ICTF对大鼠MI/RI具有保护作用,其机制可能与调控Akt/m TOR信号通路抑制细胞过度自噬有关。

三氟淫羊藿素通过Notch1抑制大鼠慢性脑缺血损伤后过度自噬

目的:研究三氟淫羊藿素(trifluoro-icaritin,ICTF)是否抑制大鼠慢性脑缺血诱导的过度自噬,并初步探讨其分子机制。方法:采用2-VO大鼠慢性脑缺血动物模型,连续给予ICTF治疗8周,Morris水迷宫实验探测大鼠认知功能;取大鼠海马区脑组织,运用qPCR方法检测自噬相关蛋白的mRNA表达水平,运用Western blot方法测定自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Notch1的表达水平。结果:三氟淫羊藿素明显改善慢性脑缺血诱导的大鼠认知功能障碍。与模型组相比,三氟淫羊藿素治疗组Atg13、LC3-Ⅱ和Beclin-1 mRNA的表达下降;与对照组相比,模型组LC3-Ⅱ蛋白的表达水平明显升高,Notch1表达降低,经三氟淫羊藿素治疗后,LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达量显著下降,Notch1表达升高。结论:三氟淫羊藿素可能通过抑制过度自噬和激活Notch1信号,促进慢性脑缺血后的神经功能修复。

三氟淫羊藿素通过α7nAChR抑制完全弗氏佐剂诱导脊髓小胶质细胞的激活作用

目的:探讨三氟淫羊藿素(Trifluoro-icaritin,ICTF)是否通过脊髓α7nAChR抑制完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)诱导小胶质细胞的激活作用。方法:首先将雄性SD大鼠随机分为3组:Ctrl组、CFA组和CFA+ICTF组。给予CFA+ICTF组的大鼠连续腹腔注射ICTF(3 mg·kg^(-1))21 d,并于第21 d取各组大鼠脊髓(L4~L6),应用qRT-PCR和Western blot检测CD11b的mRNA和蛋白表达水平。然后将雄性SD大鼠随机分为2组:CFA+ICTF+PBS组和CFA+ICTF+α-Bgtx组。将大鼠提前5 d进行鞘内置管,CFA造模后6 h连续腹腔注射ICTF(3 mg·kg^(-1))21 d并在第14天开始分别鞘内注射PBS和α7nAChR的抑制剂α-Bgtx,每天1次连续注射7 d。于第21 d取各组大鼠脊髓(L4~L6),应用Western blot检测CD11b的蛋白表达。结果:与Ctrl组相比,CFA组大鼠脊髓CD11b的mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),而与CFA组相比,CFA+ICTF组大鼠脊髓CD11b的蛋白表达水平下调(P<0.001)。结论:α7nAChR的抑制剂α-Bgtx反转了ICTF下调CD11b表达的作用,提示ICTF可能通过α7nAChR抑制小胶质细胞的激活来缓解慢性炎性痛。

三氟淫羊藿素对慢性炎性痛大鼠的抗炎消肿作用

目的:探讨三氟淫羊藿素(Trifluoro-icaritin,ICTF)是否改善完全弗氏佐剂(Complete freund’s adjuvant,CFA)诱发的大鼠足底炎症和肿胀程度。方法:将雄性SD大鼠随机分为3组:Ctrl组、CFA组和CFA+ICTF组。Ctrl组仅在大鼠左侧足底皮下注射100μL生理盐水;CFA组和CFA+ICTF组分别在大鼠左侧足底皮下注射100μL CFA,且CFA+ICTF组大鼠每天腹腔注射1次ICTF(3 mg·kg^(-1)),共持续21 d,在造模前1 d测量基线(Baseline,BL)水平及造模后第1 d、7 d、14 d和21 d分别检测大鼠足趾肿胀程度并采集图像。在第21 d取各组大鼠足底组织,应用HE染色检测炎症细胞浸润情况。应用分子对接技术模拟ICTF与胆碱能抗炎通路关键受体α7n ACh R的相互作用,并对数据进行分析比对。结果:大鼠足趾容积结果显示,与Ctrl组比较,CFA组大鼠足趾肿胀程度上调,与CFA组比较,CFA+ICTF组大鼠足趾肿胀程度在第14 d和21 d下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,经ICTF治疗后,CFA大鼠足底组织炎性细胞浸润减少。分子对接结果显示,LOB与α7-ACh BP对接的抑制常数(Ki)为1.68μmol·L^(-1),结合自由能(△G)为-7.88 kcal·mol^(-1),结合能力强,ICTF与α7-ACh BP对接的Ki为5.59μmol·L^(-1),△G为-7.17 kcal·mol^(-1),具有较强的结合能力,且ICTF分子对接空间构象与α7-ACh BP激动剂LOB接近。结论:ICTF可能通过激活胆碱能抗炎通路的α7n ACh R对CFA大鼠发挥抗炎消肿作用。