大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核及三叉神经节内PPTA、CGRP和PPEmRNA及其相应蛋白在面口部炎性刺激时的变化

利用原位杂交技术和免疫组化技术，观察完全福氏佐剂致炎大鼠的三叉神经脊柬核尾侧亚核和／或三叉神经节内SP、CGRP和L-ENK样阳性结构及它们相应的前体PPTAmRNA、CGRPmRNA和PPEmRNA分布状况的动态变化。原位杂交结果显示：PPTAmRNA在三叉神经节与三叉神经脊束核尾侧亚核浅层神经元中的表达于致炎刺激后12h明显增强，分别于1d和4d时达到高峰，21d后恢复正常;CGRPmRNA在三叉神经节神经元中的表达变化与PPTAmRNA者相似;在三叉神经脊束核尾侧亚核浅层PPEmRNA阳性神经元的数量于刺激后12d明显增多，8d到达高速，28d时仍高于正常水平.免疫组织化学结果显示：尾侧亚核浅层SP样阳性纤维和终末的密度在致炎刺激后12h至4d降低，然后逐渐回升到正常水平;而CGRP样阳性纤维和终末的密度在佐剂注射后1d明显降低，8d后恢复正常，14d后又明显高于正常水平;佐剂刺激后1d，L-ENK样阳性纤维和终末的密度明显增加，以后维持正常水平，21d和28d时又低于正常水平.在三叉神经节，SP和CGRP样阳性神经元的数量在致炎刺激后早期明显减少，以后恢复至正常水平且再无明显变化。上述结果表明，在完全福氏佐剂的致炎条件下，SP、CGRP和L-ENK样阳性结构及其相应的mRNA在尾侧亚核浅层和／或三叉神经节存在着不同的时程变化。

咬合恢复对大鼠三叉神经节PPTAmRNA及其相应蛋白表达的影响

目的:研究咬合恢复对大鼠三叉神经节P物质(substance P,SP)及编码SP的前速激肽原A(PPTA)mRNA表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠48只,随机分为3个实验组及相应的正常对照组,每组8只。实验组动物间断磨除右上、下颌磨牙牙冠至龈下,2组分别于第3、9周停止磨牙,任其自行萌出,恢复咬合关系。双侧三叉神经节(trigeminal ganglia,TG)切片行SP免疫组织化学反应(SABC法)和原位杂交反应。光镜观察摄片,并用Image Pro Plus 5.1图像分析软件进行测定。采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:单侧咀嚼实验组咀嚼侧和非咀嚼侧TG内,SP阳性神经元百分比与对照组比较显著降低(P<0.01,P<0.05),其非咀嚼侧显著低于咀嚼侧(P<0.05);而PPTA mRNA阳性神经元百分比显著增高(P<0.01,P<0.05),其非咀嚼侧显著高于咀嚼侧(P<0.01)。早期恢复咬合实验组TG内SP和PPTA mRNA阳性神经元百分比与对照组比较无显著差别(P>0.05),其咀嚼侧与非咀嚼侧比较无显著差别(P>0.05)。晚期恢复咬合实验组TG内,SP和PPTA mRNA表达情况与单侧咀嚼实验组一致。结论:早期恢复咬合关系TG内SP和PPTA mRNA表达可恢复正常,晚期恢复咬合关系其表达不能恢复正常,SP和PPTA mRNA参与了单侧咀嚼引起的颞下颌关节病的病理变化过程。

面口部炎症刺激增强CGRP mRNA、PPTA mRNA及NOS在大鼠三叉神经节中的表达

为了研究ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ在伤害性刺激后大鼠ＴＧ中合成和表达的变化，将４％鹿角菜胶（ＣＡＲ）溶液注射到大鼠一侧口周皮下作为伤害性刺激模型，用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学法结合ＣＧＲＰ、ＰＰＴＡｍＲＮＡｓ原位杂交组织化学法对此进行了观察。结果显示：对照组大鼠ＴＧ中约有３２．２％、１６．２％和１０％的神经元分别呈ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性。ＣＡＲ刺激后，在刺激侧ＴＧ、ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性神经元的数量均增多，其阳性率分别达到了３８．６％、２２．８％和１４．２％。ＴＧ中约有６．８％和７．３％的神经元同时呈ＮＯＳ和ＣＧＲＰｍＲＮＡ或ＮＯＳ和ＰＰＴＡｍＲＮＡ阳性，ＣＡＲ刺激使得两种双标神经元的数量也明显增多，双标细胞占ＴＧ细胞总数的百分比分别达到了１１．０％和１０．９％，而且刺激后增加的ＮＯＳ阳性神经元主要为双标神经元。上述结果提示ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性神经元，尤其是共存神经元可能在面口部伤害性信息的传递和调节中起重要作用，伤害性刺激所诱导的ＮＯＳ合成的增加与ＣＧＲＰｍＲＮＡ和ＰＰＴＡｍＲＮＡ表达的增强可能有密切的关系。

正畸牙齿移动过程中大鼠三叉神经节PPTA mRNA表达变化

目的:观察正畸牙齿移动不同时期大鼠三叉神经节PPTA mRNA表达变化.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正畸加力和撤力后不同时期大鼠三叉神经节PPTA mRNA水平的变化情况.结果:加力后2 h大鼠三叉神经节PPTA mRNA的表达量开始增加,加力8 h至加力3 d达到最高,至撤力后2～4周PPTA mRNA的表达量开始下降,但 PPTA mRNA水平仍然明显高于对照组.结论:正畸牙齿移动过程中大鼠三叉神经节PPTA mRNA表达发生了明显的变化.提示P物质可能不仅参与早期正畸牙周组织的炎症损伤过程,而且可能参与了后期的组织修复重建过程.

斑点杂交法检测正畸大鼠三叉神经节PPTAmRNA的变化

目的:观察正畸牙齿移动不同时期大鼠三叉神经节(Tri gemi nal Gangl i on,TG)中前速激肽原A(PPTA)mRNA的表达变化,初步探讨牙齿移动导致疼痛的可能机制。方法:采用斑点杂交的方法检测正畸加力后不同时期大鼠TG内PPTAmRNA水平的变化情况。结果:加力2h大鼠三叉神经节PPTA mRNA的表达量开始增加,加力8h至加力3天达到最高,至第7天PPTA mRNA水平仍然明显高于对照组。结论:正畸牙齿移动能导致TG内PPTAmRNA表达水平的上调,提示PPTA可能参与了正畸疼痛的发生。

阿片μ受体与SP、CGRP和SOM在大鼠三叉神经节和背根神经节内的共存研究

本研究应用免疫荧光及免疫荧光双重染色技术，观察了大鼠三叉神经节和背根神经节内阿片μ受体免疫反应阳性神经元的分布及其与SP、CGRP和SOM阳性神经元之间是否存在共存关系。结果显示：（1）三叉神经节和背根神经节内的阿片μ受体免疫反应阳性神经元多为中小到细胞，其免疫反应阳性产物不仅见于胞膜表面也出现于胞浆内。SP和SOM免疫反应阳性神经元亦为中小型细胞，但以小细胞为主，而CGRP免疫反应阳性神经元有一部分为大型神经元。（2）在三叉神经节内，有相当数量的阿片μ受体阳性神经元同时呈SP、CGRP或SOM免疫反应阳性。其中双重免疫反应神经元分别占阿片μ受体阳性细胞总数的34．6％、54．3％和23.9％，而在SP、CGRP和SOM各阳性细胞中分别有49．4％、50．9％和37.5％的神经元同时是阿片μ受体免疫反应阳性．（3）在背根神经节内，也有相当数量的神经元呈阿片μ受体与SP、CGRP和SOM双重免疫反应阳性，其中双标细胞数分别占阿片μ受体免疫反应阳性细胞总数的30．1％、48．4％和26.8％，各占SP、CGRP和SOM阳性细胞总数的51．5％、44．2％和35．9％。本文结果提示吗啡的镇痛作用中有部分可能是通过激活阿片μ受体来影响初级传入纤维中SP、CGRP和SOM的释放而实现的．

大鼠角膜中央区SP样、CGRP样免疫阳性纤维的起源

向角膜中央区注射ＨＲＰ后，用抗ＳＰ和抗ＣＧＲＰ抗体对三叉神经节、颈上神经节和迷走神经节进行免疫组织化学处理。结果证明：双重阳性细胞出现于三叉神经节的内侧区且集中分布于背内侧部．ＣＧＲＰ样双重阳性细胞主要分布在节的背内侧部的周边区；ＳＰ样双重阳性细胞散在于节的背内侧部的深部。两者均为圆形或椭圆形。在颈上神经节和迷走神经节内未见双重阳性细胞。

P物质对大鼠三叉神经节神经元GABA-和5-HT-激活电流的反向调制作用(英文)

实验采用全细胞膜片钳技术观察P 物质(SP)对大鼠同一三叉神经节(TG)神经元γ-氨基丁酸激活电流(IGABA)和5-羟色胺激活电流(I5-HT)的调制作用。在受检的47 个 TG 细胞中,多数情况下可在同一细胞记录到IGABA 和 I5-HT 两种电流(63.8%,30/47)。在 30 个同时对 GABA 和 5-HT 敏感的细胞,其中 22 个细胞预加 SP(0.01 μmol/L)后,IGABA 减小(35.7 ± 6.1)%,而I5-HT 增加(65.2 ±8.7)%。此种调制作用可被SP 受体拮抗剂GR82334 及胞内透析GDP-β -S 或GF109203X 所阻断。以上结果表明:SP 受体激活后经G 蛋白耦联,通过相同的PLC-DAG-PKC 转导途径对同一感觉神经元共存的GABAA 受体和5-HT3 受体产生相反的调制效应。

大鼠三叉神经半月神经节内一氧化氮合酶阳性神经元的分布、投射及其与CGRP、SP的关系

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学方法观察了大鼠三叉神经半月神经节内一氧化氮合酶阳性神经元的分布．结果发现约５～８％的节细胞呈一氧化氮合酶阳性，几乎均是中、小细胞，弥散地分布在神经节各处．结合荧光金逆行追踪技术观察，发现荧光金注入三叉神经脊束核尾侧亚核浅层后，约９０％的一氧化氮合酶阳性节细胞被逆行标记，提示半月神经节内的一氧化氮合酶阳性神经元主要投射于三叉神经脊束核尾侧亚核浅层．用一氧化氮合酶组织化学反应结合荧光金逆行追踪技术及ＣＧＲＰ、ＳＰ免疫荧光技术进行重合处理的结果显示，在向三叉神经脊束核尾侧亚核投射的一氧化氮合酶阳性半月节神经元中，约６０％呈ＣＧＲＰ样免疫阳性，约６５％呈ＳＰ样免疫阳性．结合文献及本文结果，可以认为半月神经节向三叉神经脊束核尾侧亚核浅层投射的一氧化氮合酶与ＣＧＲＰ或ＳＰ共存的神经元可能在面口部伤害性信息的传递和调控中起重要作用．

膀胱伤害性刺激条件下大鼠腰骶髓后连合核及背根节内SP的动态变化

将１０％福尔马林１．０～１．５ｍｌ经尿道注入大鼠膀胱，于刺激后的０．５，１，２，８，２４，４８ｈ取材，进行兔疫组化（ＡＢＣ法）反应，观察脊髓腰骶段后连合核区的ＳＰ样纤维和终末的分布，并随机抽样进行图像分析、另设对照组，向膀胱内注入生理盐水，０．５，２．０ｈ后取材。结果显示：福尔马林刺激后，腰骶髓后连合核区ＳＰ样阳性纤维和终末与对照组相比，在ｌｈ内明显减少，而在２ｈ时则呈增加趋势，８ｈ又恢复正常。同时本文以同样动物模型，实验组分别于刺激后１，３，８，１２，２４，４８ｈ和５ｄ取材，对照组于刺激后２４ｈ取材，进行原位杂交组化反应，观察腰骶髓背根神经节内ＳＰｍＲＮＡ阳性神经元的数量。结果显示：福尔马林刺激后３ｈ即出现ＳＰｍＲＮＡ表达神经元数量的明显增加，２４ｈ达到高峰，并在４８ｈ以后开始下降，到５ｄ后回落到正常水平。

P物质对大鼠三叉神经节神经元辣椒素激活电流的调制作用

目的研究P物质(SP)对急性分离的大鼠三叉神经节神经元辣椒素受体亚型1(VR1)的调制作用,探讨SP对辣椒素在疼痛传导中作用的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的三叉神经节神经元膜VR1介导的电流,并观察预加SP对VR1介导的电流的调制作用。结果大多数三叉神经节细胞对辣椒素敏感,细胞外应用辣椒素(1×10-7~3×10-6mol/L)后可引起缓慢激活无明显去敏感的内向电流,且呈浓度依赖性;分别预加1×10-9、3×10-9和1×10-8mol/L SP 1 min后,辣椒素引起的电流幅值分别增加2.4%、20.8%和51.8%,增加的程度与SP的浓度和预加的持续时间有关。应用SP受体特异性阻断剂GR82334(1×10-6mol/L)可以阻断SP对辣椒素激活电流的增强作用。结论SP可增强三叉神经节神经元膜辣椒素受体介导的电流。

大鼠初级感觉神经元P2X3受体的表达及其与SP的关系

目的研究在大鼠初级感觉神经元细胞上P2X3受体的表达情况及其与P物质的关系。方法取SD大鼠背根神经节(DRG)和三叉神经节(TG)固定后切片;用抗P2X3受体抗体和抗SP抗体进行免疫组织化学反应,并通过两种不同的显色方法同时进行P2X3受体和SP的双标。结果P2X3免疫反应阳性细胞主要集中在小细胞和中等细胞(其中在TG,P2X3-ir阳性神经元约占整个细胞的24.8%;在DRG约31.7%的神经元是P2X3-ir阳性),并且在DRG和TG细胞上均存在有P2X3受体和SP共存(TG上的双标细胞占P2X3-ir阳性细胞总数的36.26%,DRG上占46.81%)。结论由于ATP门控阳离子通道受体P2X3本身就与伤害性感受的初级传入有关,而它与SP的共存可提示当组织中的ATP释放时可以通过P2X3受体作用于含SP的伤害性感觉神经末梢上,促使SP释放引起痛觉过敏。

正畸初期矫治力对大鼠三叉神经节PPTA mRNA变化的影响

目的观察正畸初期不同矫治力对三叉神经节中PPTA mRNA(Preprotachykinin-A,前速激肽原A)的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测来观察正畸初期阶段不同正畸力值作用下大鼠三叉神经节中PPTA mRNA的变化情况。结果实验组大鼠三叉神经节PPTA mRNA的表达发生了明显的变化,并呈现一定的规律性。加力2h PPTA mRNA的表达量开始增加;加力3d达到最高;之后逐渐下降,但7天仍然高于对照组(P<0.05);不同正畸力组之间,20g组和50g组大鼠三叉神经节PPTA mRNA的动态变化相似,各时间点两组之间无统计学差异(P>0.05);80g组在各个时间点PPTA mRNA的表达明显高于其它两组(P<0.05),并且峰值有相对提前的趋势。结论本研究提示正畸初期力值的大小对疼痛的表达可能有不同程度的影响。

三叉神经痛大鼠半月神经节内PPTA mRNA及其相应蛋白的表达研究

目的探讨P物质（substanceP，SP）在三叉神经痛发病机理中的作用。方法雄性Wister大鼠40只随机分为4个实验组及相应的对照组，每组5只。实验组大鼠在左侧三叉神经分支眶下神经行慢性缩窄环术。观察术后大鼠对机械刺激的反应阈值，三叉神经节（trigeminal gangila，TG）切片行SP免疫组织化学反应（SABC法）和原位杂交反应。光镜观察摄片，并用HPIAS-1000病理图文分析系统软件进行测定。SPSS13．0软件包对数据进行统计学分析。结果术后2周到8周，实验组大鼠手术侧疼痛阈值较对侧及对照组同侧显著降低（P〈0．01），手术侧TG内SP及PPTAmRNA的表达较对侧及对照组同侧显著升高（P〈0．01）。术后12周比较均无统计学差异（P〉O．05）。结论SP在三叉神经痛的发病机理中发挥重要的作用。

大鼠三叉神经节细胞向三叉神经脊束核各亚核的分枝投射

本文应用荧光素双标记与免疫荧光结合方法研究了单个含ＳＰ或ＣＧＲＰ的三叉神经节细胞向三叉神经脊束核的尾侧亚核、极间亚核和吻侧亚核的分枝投射。将ＤｉａｍｉｄｉｎｏＹｅｌｌｏｗ（ＤＹ）注入尾侧亚核，ＦａｓｔＢｌｕｅ（ＦＢ）分别注入吻侧亚核或极间亚核，发现ＤＹ／ＦＢ双标细胞占同侧三叉神经节内标记细胞总数的１３．２％（ＦＢ注入吻侧亚核例）和２．３％（ＦＢ注入极间亚核例）；双标细胞中含ＳＰ者分别为７４．４％和６９．６％；含ＣＧＲＰ者分别为７２．１％和６４．３％。将ＤＹ注入极间亚核，ＦＢ注入吻侧亚核时，ＤＹ／ＦＢ双标细胞占同侧三叉神经节标记细胞总数的１．６％，双标细胞中有６７．９％为ＳＰ阳性，７３．９％为ＣＧＲＰ阳性。多数的双标且呈ＳＰ或ＣＧＲＰ阳性的三叉神经节细胞直径约为２５～５０μｍ，为中、小型节神经元，而直径大于５０μｍ的大型细胞较少见。以上结果提示，三叉神经初级传入纤维进入脑干后的下降支分枝投射向三叉神经脊束核的各亚核，它们可能与面口部的痛信息传递有关。ＳＰ和ＣＧＲＰ是这些分支投射神经元的重要神经活性物质。

神经干注射阿霉素对三叉神经脊束核内P物质的影响

目的探讨成年大鼠眶下神经束注射阿霉素对三叉神经脊束核尾侧区内P物质的影响。方法用0．5％的阿霉素溶液直接注射于一侧眶下神经束，对侧注射生理盐水作自身对照，分别在给药后3d、1周、2周、3周、4周、5周、6周在光镜和电镜下观察双侧三叉神经节的变化；并用免疫组化方法观测三叉神经尾侧脊束核内（CNV）P物质（SP）免疫阳性颗粒的灰度值。结果阿霉素给药后，电子显微镜下观察到实验侧三叉神经节细胞形态改变，胞内出现大量空泡，神经纤维髓鞘发生变性、弯曲、增厚、分离；实验侧三叉神经尾侧脊束核内（CNV）P物质（SP）免疫阳性颗粒灰度值明显高于对照侧（P〈0．01），不同时间组之间SP含量差异无统计学意义。结论眶下神经束注射阿霉素能够选择性破坏相应的节细胞，减少CNV区SP含量。SP作为一种重要的神经递质，其合成或释放异常可能与三又神经痛的发病有关，其在三叉神经痛的发作机制中具有重要的作用。

P物质对大鼠三叉神经节神经元H＋-门控电流的调制

目的探讨P物质（sP）对大鼠三叉神经节（TG）神经元膜H＋-门控电流的调制作用及其机制。方法急性分离TG神经元，通过排管快速换液装置行胞外给药，电极内灌药行胞内透析后，采用全细胞膜片钳技术记录神经元膜H＋-门控电流。结果依照我们在背根神经节（DRG）神经元分类的方式，同样可将TG神经元H＋-门控电流也分为四型，即T-型、S-型、B-型、O-型：共加sP和H＋能浓度依赖性增强S-型H＋-门控电流，SP受体拮抗剂GR82334不能阻断此作用：共加SP和H＋能增强B-型H＋-门控电流，GR82334和胞内透析GDP—B—S能阻断SP对B．型H＋-门控电流的这一增强作用，而预加sP则抑制B-型HL门控电流，并以短暂成分尤为明显，此抑制效应不能被GR82334阻断。结论SP对H＋-门控电流的调制依ASIC亚基组成不同，其作用机制有所不同；S-型H＋-门控电流的ASIC分子膜外结构上可能存在SP的别构位点。

重复高＋Gz暴露后大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核与三叉神经节内神经活性物质基因表达

目的 研究重复高＋Gz暴露后,大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核（spinal trigeminal nucleus caudalis,SpVc）内P物质（substance P）与N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor antagonists,NMDAR）,以及三叉神经节（trigeminal ganglion,TG）内前速激肽原A（preprotachykinin A,PPTA）、β降钙素基因相关肽（β-calcitonin-gene-related peptide,β-CGRP）、与钠通道PN3、NaN的mRNA表达情况,探讨重复＋Gz引起颞颌关节疼痛的原因与机制. 方法 雄性SD大鼠36只,体重200～300 g.按随机数字表法平均分成3组：对照组、＋5Gz组、＋10 Gz组.将各组大鼠分别固定于动物离心机转臂末端的固定装置上,并使之呈俯卧位,头朝向转臂轴心.离心机转臂半径为1 m.G值增长率1 G/s、峰值持续时间30 s,每天连续离心5次,2次之间间隔60 s,每周4d,共持续3周.＋5Gz组暴露峰值为＋5Gz;＋10 Gz组暴露峰值为＋10 Gz;对照组按上述相同时间和频次在离心机上静止固定.取大鼠TG与SpVc,提取RNA,荧光定量RT-PCR法检测P物质、NMDAR、PPTA、β-CGRP、PN3与NaN的mRNA表达变化. 结果 ①重复＋Gz暴露后大鼠TG内PPTA、β-CGRP、PN3及NaN基因的mRNA相对表达量明显增高,组间差异有统计学意义（F=329～1 030,P＜0.01）,且与＋Gz值成正比.②大鼠SpVc内P物质与NMDAR的mRNA相对表达量明显增高,组间差异有统计学意义（F=408、1 062,P＜0.01）,且与＋Gz值成正比. 结论 在重复高＋Gz环境下,初级感觉神经元的生化特征发生了显著变化;神经活性物质在颞下颌关节疾病引起的疼痛传导中发挥了作用,与颞颌关节疼痛的外周及中枢的传导作用机制相关.

鼠三叉神经节中神经肽阳性胞体的分布与密度

目的 观察鼠三叉神经节中神经肽P物质、降钙素基因相关肽及神经肽Y阳性神经元的分布与密度,为今后研究神经肽在口腔颌面部的作用提供形态学依据。方法 SD雄性大白鼠8只,灌注固定,取双侧三叉神经节水平位连续切片,ABC法漂染,镜检,计算机图像分析。结果 三叉神经节中有丰富而均匀分布的P物质及降钙素基因相关肽阳性胞体,分别占神经元总数的15%和40%左右,染色深浅不一,主要为中小型假单极细胞,其阳性纤维聚集成束,远心端加入上、下颌神经及眼神经,近心端通向中枢神系统,但三叉神经节中无神经肽Y阳性胞体,只有散在阳性纤维分布。结论 三叉神经节中有丰富的P物质和降钙素基因相关肽神经元,但无神经肽Y神经元。