血清Tim-3、Galectin-9对重度创伤性脑损伤患者并发急性呼吸窘迫综合征的预测价值

目的探讨血清T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)、半乳糖凝集素-9(Galectin-9)对重度创伤性脑损伤(TBI)患者并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的预测价值。方法选取2020年1月至2023年12月郑州大学第一附属医院收治的180例重度TBI患者作为研究对象,根据受伤后1周内是否发生ARDS分为ARDS组(n=62)和非ARDS组(n=118)。比较两组患者血清Tim-3、Galectin-9水平;采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清Tim-3、Galectin-9对重度TBI患者并发ARDS的预测价值;采用二分类Logistic逐步回归分析探讨重度TBI患者并发ARDS的影响因素。结果ARDS组血清Tim-3、Galectin-9水平高于非ARDS组(P<0.05)。血清Tim-3、Galectin-9及二者联合预测重度TBI患者并发ARDS的曲线下面积(AUC)(95%CI)分别为0.786(0.716-0.855)、0.735(0.652-0.818)、0.835(0.775-0.895),截断值分别为264.24 ng/mL、8.06 ng/mL,特异度分别为0.831、0.788、0.763,灵敏度分别为0.613、0.626、0.742。ARDS组年龄≥60岁、合并休克、机械通气时间≥5d、ICU住院时间≥14d所占的比例均大于非ARDS组,入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、氧合指数(OI)低于非ARDS组,降钙素原(PCT)水平高于非ARDS组(P<0.05)。入院时GCS评分低(OR=0.727,95%CI:0.543-0.973)、OI低(OR=0.957,95%CI:0.932-0.983)、合并休克(OR=9.259,95%CI:3.183-26.937)、Tim-3水平升高(OR=7.110,95%CI:2.738-18.468)、Galectin-9水平升高(OR=7.063,95%CI:2.736-18.230)是重度TBI患者并发ARDS的独立危险因素(P<0.05)。结论血清Tim-3、Galectin-9水平升高与重度TBI患者并发ARDS密切相关,两指标可作为预测重度TBI患者并发ARDS的生物标记物。

红景天苷促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力的体外实验

背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因和蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8实验和碱性磷酸酶实验筛选红景天苷(0.5,1,5,10,50μmol/L)促进MC3T3-E1细胞增殖和分化的最佳浓度。实验分为4组:对照组、红景天苷组、红景天苷+LY294002组、LY294002组,分别用成骨诱导液、含10μmol/L红景天苷、10μmol/L红景天苷+10μmol/L LY294002、10μmol/L LY294002的成骨诱导液进行培养,观察红景天苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对成骨相关基因和蛋白表达的影响。结果与结论:①CCK-8实验和碱性磷酸酶实验显示:红景天苷促进MC3T3-E1细胞增殖的作用在10μmol/L时最显著;②与对照组相比,红景天苷可以促进矿化、促进细胞黏附、减少细胞死亡,提高Runx-2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达(P<0.01),提高Runx-2和p-Akt蛋白表达(P<0.01);而添加PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002则可逆转以上结果;③结果表明,红景天苷能促进MC3T3-E1细胞矿化,并能促进成骨相关基因、蛋白的表达,这可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。

基于METTL14-m6A-FOXO3A信号通路介导的细胞自噬探讨补肾强督方抑制炎症治疗强直性脊柱炎的机制研究

目的:观察补肾强督方对T淋巴细胞METTL14-m^(6)A-FOXO3A信号通路介导的细胞自噬的影响,从而明确其抑制炎症、治疗强制性脊柱炎的分子机制。方法:使用Jurkat细胞,采用抗CD3联合抗CD28抗体诱导24 h构建细胞模型,并给予补肾强督方含药血清和METTL14重组蛋白进行干预。采用ELISA法检测炎症因子(IL-23和IL-17A)和氧化应激指标的水平,流式细胞术检测ROS水平,Western blot法检测自噬相关蛋白、METTL14和FOXO3A的表达,RT-qPCR检测METTL14和FOXO3A的表达,斑点杂交实验检测FOXO3A的m^(6)A甲基化水平。结果:与模型组比较,补肾强督方显著降低Jurkat细胞上清中IL-23、IL-17A和MDA的含量与ROS的水平,增加SOD和GSH-Px的活性,差异均具有统计学意义(P<0.01)。此外,补肾强督方能显著上调Jurkat细胞中Beclin-1、FOXO3A和METTL14蛋白和基因的表达和增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,下调p62蛋白的表达,与模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。在此基础之上,与模型组比较,补肾强督方能显著上调Jurkat细胞FOXO3A的m^(6)A甲基化水平,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:补肾强督方通过METTL14介导的FOXO3A的m^(6)A甲基化修饰促进T细胞自噬,从而达到治疗强直性脊柱炎的作用。

黄芪甲苷可缓解MC3T3-E1细胞氧化应激损伤并促进成骨

背景:氧化应激是导致骨质疏松症的主要原因之一,减少氧化应激水平与增加抗氧化防御是治疗骨质疏松症的重要研究方向。研究证实黄芪甲苷具有抗骨质疏松作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨黄芪甲苷对氧化应激条件下MC3T3-E1细胞成骨的作用。方法:将MC3T3-E1细胞分4组培养:对照组加入完全培养基,模型组加入含过氧化氢的完全培养基干预24 h后更换为完全培养基,黄芪甲苷组加入含过氧化氢、黄芪甲苷的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷的完全培养基,抑制剂组加入含过氧化氢、黄芪甲苷、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)抑制剂的完全培养基干预24 h后更换为含黄芪甲苷、ERK抑制剂的完全培养基。过氧化氢干预48 h后,通过丙二醛含量检测黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞氧化应激的缓解作用;过氧化氢干预48 h后进行成骨诱导培养,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色验证MC3T3-E1细胞成骨及矿化能力,通过RT-qPCR检测成骨相关基因的表达,Western blot检测成骨相关蛋白及ERK/腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路蛋白的表达。结果与结论:(1)模型组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均少于对照组(P<0.05),黄芪甲苷组细胞内碱性磷酸酶含量与矿化结节形成均多于模型组(P<0.05)。(2)与对照组比较,模型组细胞内丙二醛含量增加(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05),AMPK mRNA与p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷组细胞内丙二醛含量减少(P<0.05),骨钙素、RUNX2、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA与蛋白表达均升高(P<0.05),ERK1/2、AMPK mRNA表达升高(P<0.05),p-AMPK、p-ERK1/2蛋白表达均升高(P<0.05);ERK抑制剂可部分抑制黄芪甲苷的上述作用。(3)结果表明,黄芪甲苷可通过激活ERK/AMPK信号通路促进氧化应激条件下MC3T3-E1细胞的成骨分化。

3D Vane序列结合膈肌导航技术在肝脏TIWI中应用的可行性探讨

目的 对比分析常规肝脏T1WI快速成像屏气检查3D mDixon序列与应用膈肌导航技术在自由呼吸下采集的3D Vane序列的图像质量,探讨膈肌导航技术结合3D Vane序列自由呼吸下扫描肝脏T1WI检查中的可行性。方法 选取2023年3月至10月期间的70名肝脏MR扫描患者,根据患者屏气情况分成A组(≥18s)、B组(<18秒),两组均采用常规3D m Dixon序列进行屏气扫描与膈肌导航技术结合3D Vane序列自由呼吸扫描。由2名具有多年诊断经验的医师采用双盲法对图像的肝脏边缘锐利度、肝脏血管清晰度、脂肪抑制效果及图像伪影四个方面对图像质量进行主观评分,并在肝门水平层面选取肝脏右叶、竖脊肌及背景区域划定感兴趣区(RDI),测量两组图像肝脏及竖脊肌的信号强度(signal,SI)及图像背景噪声值(standard deviation,SD),并且计算图像的信噪比(signal to noise,SNR)及对比噪声比(contrast to noise ratio,CNR)。使用配对样本t检验和WilCoxon检验对两组肝脏图像信噪比、对比噪声比及两组图像主观评分进行统计学分析。结果实验A组的3D Vane序列与3D mDixon序列的SNR、CNR及主观评分差异均无统计学意义(均P>0.05)。实验B组3D Vane序列的SNR为35.84±9.10,高于3D mDixon序列,差异有统计学意义(P<0.05),实验B组3D Vane序列图像主观评分均高于3D mDixon序列,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 膈肌导航技术结合3D Vane序列可用于腹部T1WI中扫描。对于屏气欠佳或无法屏气配合的患者可在自由呼吸下扫描,获得到满足诊断要求的影像。

枸杞多糖对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响

枸杞多糖(L.barbarum polysaccharides,LBP)具有抗氧化、降血糖、降血脂、免疫调节等多种功效,然而枸杞多糖在细胞水平上对脂肪细胞分化过程的影响及具体的作用机制,目前尚无深入研究。本研究旨在初步探讨枸杞多糖在3T3-L1前脂肪细胞分化中的作用及其机制。试验采用“经典鸡尾酒法”诱导3T3-L1前脂肪细胞,在细胞接触抑制后2 d(分化第0天),加入诱导剂及不同浓度的枸杞多糖(100µg/mL、200µg/mL、400µg/mL)处理细胞,对照组则不加入药物,分化至第12天时,通过油红O染色分析3T3-L1细胞脂肪积累情况,并采用生化法检测3T3-L1细胞中甘油三酯(TG)的含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸合成酶(FAS)及激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白的表达水平。结果表明,不同浓度的枸杞多糖均能够显著降低3T3-L1细胞中脂滴与甘油三酯的含量(P<0.05),极显著下调PPARγ和FAS蛋白的表达水平(P<0.01),极显著上调HSL蛋白的表达水平(P<0.01)。结果提示,枸杞多糖能够有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,减少脂肪细胞的生成和脂质积累,其潜在机制可能与抑制PPARγ相关通路的蛋白表达密切相关。

丹益活血汤加减对产科抗磷脂综合征相关复发性流产患者血清Tim-3、Gal-9、RAGE水平的影响

目的:探讨丹益活血汤对产科抗磷脂综合征相关复发性流产(OAPS-RSA)患者血清黏蛋白域分子3(Tim-3)、半乳糖凝集素9(Gal-9)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)水平的影响。方法:选取128例OAPS-RSA患者,随机分为两组,对照组给予小剂量阿司匹林(LDA)联合低分子量肝素(LMWH)治疗,试验组加服丹益活血汤治疗,每组64例。比较两组疗效、治疗前后的子宫内膜容受性(ER)、血栓前状态(PTS)、血清Tim-3、Gal-9、RAGE水平及妊娠结局。结果:试验组总有效率更高(90.63%与76.56%)(P<0.05)。治疗后,与对照组比较,试验组EMT、Tim-3、Gal-9、RAGE均显著升高(P<0.05),PI、RI、FDP、D-D均显著降低(P<0.05)。试验组活产率高于对照组(P<0.05)。结论:丹益活血汤能够提升OAPS-RSA患者疗效,改善ER和PTS,升高血清Tim-3、Gal-9、RAGE水平,改善妊娠结局。

初级纤毛介导成骨前体细胞系MC3T3-E1传代衰老减低成骨分化能力

背景:在大段骨缺损修复中,由于种子细胞传代等多种因素可引起成骨类细胞衰老,造成组织工程骨植入体内后成骨分化活性降低。近年来,初级纤毛介导细胞衰老的机制已被广泛研究,但“传代衰老-成骨活性减低”的初级纤毛相关机制尚未完全明了。目的:探讨初级纤毛调控成骨性MC3T3-E1细胞传代衰老的可能机制。方法:成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞传代至第10代(早期传代)及第40代(晚期传代),同时使用siRNA沉默IFT88阻碍初级纤毛生成,即将细胞分为第10代组、第40代组、第10代+siRNA IFT88-组、第40代+siRNA IFT88-组。各组细胞成骨诱导3 d,采用RT-PCR和Western blot检测衰老标志物CDKN2A(P16)的表达、成骨活性标志物骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶的表达、Hedgehog通路IHH的表达;茜素红染色和初级纤毛免疫荧光染色分析初级纤毛形态;对初级纤毛阳性率与IHH、骨形态发生蛋白2的表达进行Spearman相关性分析。结果与结论:①成骨诱导3 d,第40代组MC3T3-E1细胞的CDKN2A(P16)表达显著高于第10代组,而在siRNA IFT88-干预后差异消失;②第10代组的初级纤毛细胞阳性率高于第40代组,siRNA IFT88-则显著性抑制第10代与第40代细胞的初级纤毛表达;③第10代组MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶及骨形态发生蛋白2的转录活性和蛋白表达均高于第40代组,通过siRNA抑制初级纤毛表达后,上述差异减低或者消失;④初级纤毛细胞阳性率与IHH蛋白表达及骨形态发生蛋白2蛋白表达呈正相关。结果表明:初级纤毛介导了成骨性MC3T3-E1细胞的传代衰老,可调控成骨分化能力。

藏红花素水凝胶对软骨细胞与MC3T3-E1细胞的影响

背景:研究发现,藏红花素可抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡、减轻骨关节炎大鼠炎症反应,促进骨质疏松大鼠骨形成并抑制骨丢失,在软骨与骨损伤中具有巨大的应用潜力。目的:观察藏红花素水凝胶对软骨细胞、MC3T3-E1细胞的影响。方法:将不同浓度(0,15,20,25 mmol/L)的藏红花素溶液分别加入氧化透明质酸-氧化硫酸软骨素-Ⅱ型胶原混合溶液中,采用席夫碱交联方式制备藏红花素水凝胶,随后制备4种水凝胶浸提液。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与人软骨细胞共培养,检测细胞糖胺聚糖合成,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移,RT-qPCR检测细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达。将4种藏红花素水凝胶浸提液分别与MC3T3-E1细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,RT-qPCR检测成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,成骨诱导分化后的碱性磷酸酶活性与矿化结节形成。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,15,20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液促进软骨细胞的增殖,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液抑制软骨细胞的增殖。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进软骨细胞的迁移,提升软骨细胞SOX9、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达与糖胺聚糖合成,并且呈现剂量依赖性。②15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液均可促进MC3T3-E1细胞的增殖,提高成骨诱导分化后细胞RUNX2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA表达,并且具有剂量依赖性。15,20,25 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液可提高成骨诱导分化后MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性与矿化结节形成,其中以20 mmol/L藏红花素水凝胶浸提液的提高效果最显著。③结果表明,藏红花素水凝胶可促进软骨细胞的增殖、迁移及软骨细胞外基质的合成,促进MC3T3-E1细胞的增殖与成骨分化,其中20 mmol/L藏红花素水凝胶的综合效果较好。

自拟补肾潜阳汤联合阿仑膦酸钠维D3治疗骨质疏松症疗效及对骨代谢和TMAO-NF-κB/NFATc1通路影响分析

【目的】分析自拟补肾潜阳汤联合阿仑膦酸钠维D3治疗骨质疏松症(osteoporosis,OP)的疗效及其对骨代谢和氧化三甲胺(TMAO)-核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子c1(NFATc1)通路的影响。【方法】将2021年1月至2023年1月在台州市中西医结合医院就诊的102例脾肾阳虚型OP患者按随机数字表法随机分为观察组和西药组,每组各51例。西药组给予阿仑膦酸钠维D3治疗,观察组在西药组的基础上给予自拟补肾潜阳汤治疗,疗程为12周。观察2组患者治疗前后中医证候积分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分、疼痛程度视觉模拟量表(VAS)评分、骨代谢指标及TMAO-NF-κB/NFATc1通路相关因子水平的变化情况,评价2组患者的临床疗效和用药安全性。【结果】(1)治疗12周后,观察组的总有效率为96.08%(49/51),西药组为78.43%(40/51),组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于西药组(P<0.01)。(2)治疗后,2组患者的腰背冷痛、酸软乏力、少气懒言、头昏目眩等中医证候积分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(3)治疗后,2组患者的ODI评分和疼痛程度VAS评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(4)治疗后,2组患者的血清骨钙素(BGP)水平均较治疗前升高(P<0.05),血清总Ⅰ型原胶原氨基端延长肽(PINP)、β胶原降解产物(β-CTX)水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对血清BGP水平的升高幅度及对血清PINP、β-CTX水平的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(5)治疗后,2组患者的血清TMAO、NF-κB、NFATc1水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(6)观察组的不良反应总发生率为5.88%(3/51),西药组为9.80%(5/51),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】自拟补肾潜阳汤联合阿仑膦酸钠维D3治疗脾肾阳虚型OP患者疗效确切,可有效缓解腰背冷痛等症状,减轻功能障碍程度,改善骨代谢,抑制血清TMAO、NF-κB、NFATc1高表达,且未引发严重不良反应,具有较高的安全性。

改良PI-RADS评分联合血清AGR2、sTim-3水平对前列腺癌的诊断价值

目的探究改良前列腺影像报告和数据系统(PI-RADS)评分联合血清前梯度蛋白2(AGR2)、可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)水平对前列腺癌(PCa)的诊断价值。方法选取2022年6月至2023年6月长江大学附属黄冈市中心医院进行前列腺穿刺活检的125例患者作为研究对象,根据病理结果将PCa患者归为恶性组(n=74),将前列腺良性肿瘤患者归为良性组(n=51)。比较两组血清中AGR2、sTim-3水平,采用多因素Logistic回归分析PCa的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清AGR2、sTim-3水平对PCa的诊断价值。结果与良性组比较,恶性组PI-RADS评分、前列腺特异性抗原密度(PSAD)及血清AGR2、sTim-3水平显著升高(P<0.05);AGR2、sTim-3、PI-RADS评分均为患者发病的影响因素(P<0.05);PI-RADS评分及血清AGR2、sTim-3水平诊断PCa的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.899、0.851,三者联合诊断的AUC为0.957,三者联合诊断优于各自单独诊断(P<0.05),三者联合诊断的灵敏度为93.24%,特异度为86.27%。结论PCa患者PI-RADS评分及血清AGR2、sTim-3水平均上升,且均为PCa的影响因素,三者联合对PCa具有较高的诊断价值。

3T磁共振成像对膝关节软骨早期退行性病变的指导价值分析

分析3T磁共振成像对膝关节软骨早期退行性病变的指导价值。方法 择选本院2022年10月至2024年10月收治的疑似膝关节软骨早期退行性病变患者45例为观察组,并随机抽取同期的40例健康体检者为对照组,分别对其进行3T磁共振成像MAGIC序列扫描,将扫描所得的原始图像进行处理后得到T1map、T2map、T2*三种定量图谱,比较三组定量图谱在两组患者中的显示情况以及软骨厚度。并以关节镜检查为基准,评估3T磁共振的临床诊断效能。结果 观察组髌骨后缘软骨及股骨滑车软骨T1map、T2map、T2*值均高于对照组(P<0.05)。观察组髌骨后缘软骨及股骨滑车软骨均低于对照组,但无显著差异性(P>0.05)。3T磁共振成像临床诊断效与关节镜检查对比,无显著差异性(P>0.05)。结论 3T磁共振成像作为一种非侵入性检查,可为膝关节软骨早期退行性病变的诊断提供准确依据,具有较高的临床应用价值。

栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

NLRP3炎症小体抑制剂MCC950通过抑制Th1/Th17和促进Tregs改善脓毒症小鼠器官损伤

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体抑制剂MCC950对脓毒症小鼠T细胞分化及器官损伤的影响。方法:将18只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(sham组)、脓毒症模型组(CLP组)和MCC950治疗组(MCC950组),每组6只。其中CLP组和MCC950组通过盲肠结扎穿孔(CLP)的方法制备脓毒症模型。MCC950组腹腔注射溶于0.5 mL 0.9%氯化钠溶液的MCC950(50 mg/kg),sham组和CLP组腹腔注射等体积的0.9%氯化钠溶液。CLP术后24 h收集小鼠血清及器官标本。HE染色法观察脓毒症小鼠肺脏、肾脏组织病理损伤程度,并计算生存率;Western blot法检测脾脏NLRP3蛋白含量;ELISA法检测小鼠血清和肺组织的细胞因子水平(IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α);分离脾脏获得脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测辅助性T细胞(Th)1、Th17、调节性T细胞(Tregs)比例。结果:与sham组相比,CLP组小鼠肺组织炎性细胞浸润、水肿和肺泡壁增厚,肾小管刷状缘和上皮细胞减少,肾小球萎缩,肾小管成弥漫性扩张,大量炎性细胞浸润,脾脏NLRP3的蛋白表达上调(P<0.05),血清IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05),肺组织中IL-1α、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05),脾脏CD4^(+)IFN-γ^(+)Th1、CD4^(+)IL-17^(+)Th17、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Tregs比例均升高(P<0.05),小鼠7 d生存率为30%(P<0.05)。与CLP组相比,MCC950组小鼠肺组织炎性细胞浸润减轻,水肿减退,肾小管扩张不明显,炎性细胞浸润亦有所减轻,脾脏NLRP3的蛋白表达下调(P<0.05),血清IL-1β、IL-18、IL-1α、IL-6、TNF-α水平均降低(P<0.05),肺组织中IL-1α、IL-6、TNF-α水平均降低(P<0.05),脾脏CD4^(+)IFN-γ^(+)Th1、CD4^(+)IL-17^(+)Th17比例减少,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Tregs比例明显增加(P<0.05),小鼠7 d生存率显著提升(P<0.05)。结论:MCC950阻断NLRP3可改善脓毒症小鼠的器官损伤,其作用可能依赖于抑制Th1/Th17反应和促进Tregs反应。

NFAT3在充血性心力衰竭气虚血瘀证患者舌苔液中的表达及意义

目的研究活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T-cells 3,NFAT3)在充血性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)气虚血瘀证患者舌苔液中的表达及与临床指标相关性,初步拟定该证候的诊断界值。方法收集CHF气虚血瘀证患者及健康对照者各30例,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测舌苔液中NFAT3的含量。结果NFAT3在CHF气虚血瘀证患者舌苔液的含量为(481.40±103.00)pg/mL,明显高于健康对照者舌苔液的含量[(237.90±156.50)pg/mL](P<0.01);且随着美国纽约心脏协会(New York Heart Association,NYHA)心功能分级的增加,CHF气虚血瘀证患者舌苔液中NFAT3含量不断升高(P<0.01);CHF气虚血瘀证患者舌苔液NFAT3与NYHA心功能分级呈正相关性(r=0.927,P<0.01),与B型脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)(r=0.806,P<0.01)呈正相关性,与左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)呈负相关性(r=-0.739,P<0.01)。绘制受试者操作特性曲线(receive operating characteristic,ROC)初步拟定舌苔液清中NFAT3诊断CHF气滞血瘀证的界值为363.37 pg/mL,曲线下面积为0.91。结论NFAT3能够反映CHF病情轻重程度,可为CHF气虚血瘀证提供客观化、量化的参考和依据。

(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究

目的探讨(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原(procalcitonin,PCT)、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究。方法回顾性选取我院2020年1月—2022年6月住院的120例艾滋病患者为研究对象。依据实验室结果,将其分为马尔尼菲篮状菌感染确诊组(血或组织液培育养出马尔尼菲篮状菌),简称A组(62例),及马尔尼菲篮状菌感染临床诊断组[根据临床症状、体征、血常规及(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞多指标诊断],简称B组(58例)。检测患者(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞的表达水平,采用受试者工作特征(receiver-operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)评估上述指标联合检测对艾滋病患者感染马尔尼菲篮状菌的诊断效能。结果A组的(1-3)-β-D葡聚糖和PCT水平均高于B组,CD4^(+)T淋巴细胞个数低于B组(P<0.05);(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC为0.933,(1-3)-β-D葡聚糖单独检测的AUC是0.812,PCT单独检测的AUC为0.883,CD4^(+)T淋巴细胞单独检测的AUC是0.810,(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC皆优于三项单独检测,表明(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的诊断价值皆优于单一指标诊断,且联合检测的特异度、约登指数分别为92.43%和0.580,均高于三项单独检测。结论(1-3)-β-D葡聚糖联合PCT和CD4^(+)T淋巴细胞多指标对艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常高的临床诊断价值,能够帮助医生分析出高危风险患者,及时制定治疗方案,同时也承担预后效果的判断依据,对治疗艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常重要的研究价值。

急性病毒性肝炎患者血清HDAC3和HDAC11表达与T细胞淋巴亚群的关系研究

目的 探究急性病毒性肝炎(AVH)患者血清组蛋白脱乙酰酶3(HDAC3)和组蛋白脱乙酰酶11(HDAC11)表达水平与T细胞淋巴亚群的关系。方法 选取2022年1月—2023年6月在秦皇岛市第三医院就诊的120例AVH患者作为研究对象(AVH组),并选择同期的120名体检健康者作为对照组。收集并比较两组的一般临床资料。检测两组血清中HDAC3、HDAC11、CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)水平。利用Pearson等级相关性分析AVH患者血清HDAC3、HDAC11水平与T细胞淋巴亚群的相关性。利用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HDAC3、HDAC11对诊断AVH的临床价值。结果 AVH组和对照组的年龄、性别和BMI无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,AVH组的丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、三酰甘油、胆固醇、低密度胆固醇显著升高(P<0.05),而AVH组的高密度胆固醇显著降低(P<0.05)。AVH组患者的血清HDAC3和HDAC11表达水平均显著高于对照组(P<0.05),CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)均显著降低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,AVH患者血清HDAC3水平与CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)均呈负相关(r=-0.458、-0.533、-0.462,均P<0.001),HDAC3表达水平与CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)均呈负相关(r=-0.473、-0.551、-0.422,均P<0.001)。ROC曲线显示,HDAC3、HDAC11及二者联合预测诊断AVH的曲线下面积(AUC)分别为0.921、0.941、0.988,血清HDAC3、HDAC11联合诊断AVH的临床应用价值高于单项指标诊断(Z_(二者联合-HDAC3)=3.672、P=0.000;Z_(二者联合-HDAC11)=3.078、P=0.002)。结论 AVH患者血清HDAC3和HDAC11表达水平升高,且与T淋巴细胞亚群存在相关性,HDAC3与HDAC11联合预测AVH的临床价值较高。

附子理中汤联合骨髓间充质干细胞调控变应性鼻炎大鼠鼻黏膜T-bet和GATA3 mRNA表达的研究

目的研究附子理中汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜T盒转录因子(T-bet)、锌指蛋白3(GATA3)mRNA表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组,每组8只。对照组大鼠不造模、不干预;模型组、MSCs组、附子理中汤组、附子理中汤+MSCs组大鼠均进行变应性鼻炎造模,其中模型组造模后不治疗,MSCs组造模后给予骨髓MSCs尾静脉注射1次,附子理中汤组造模后给予附子理中汤连续灌胃14 d,附子理中汤+MSCs组造模后给予骨髓MSCs尾静脉注射1次和附子理中汤连续灌胃14 d。比较各组大鼠干预前后的行为学积分;干预结束后ELISA法检测鼻腔灌洗液中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素-γ(IFN-γ)水平,qRT-PCR法检测鼻黏膜组织中T-bet和GATA3 mRNA表达情况。结果MSCs组、附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠干预后行为学积分均明显低于干预前及模型组(P均<0.05),且附子理中汤+MSCs组大鼠干预后行为学积分均明显低于MSCs组和附子理中汤组(P均<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,MSCs组、附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均无明显变化(P均>0.05);且附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显低于MSCs组(P均<0.05),鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显高于MSCs组(P均<0.05)。结论附子理中汤联合骨髓MSCs能上调T-bet mRNA和下调GATA3 mRNA表达,进而调节Th1/Th2细胞的平衡,抑制炎症反应,改善变应性鼻炎症状。

乙型肝炎病毒感染相关肝病患者血清T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3、高尔基体蛋白73变化及其临床意义的研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染相关肝病患者血清T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)、高尔基体蛋白73(GP73)变化及其临床意义。方法:选取2020年9月至2022年10月于河南省郑州市第三人民医院诊治的100例HBV感染相关肝病患者为研究对象,其中47例慢性乙型肝炎(CHB)、35例肝硬化(LC)、18例肝细胞癌(HCC),分别纳入CHB组、LC组、HCC组,另选取本院同期体检的30例健康者纳入对照组。根据病情严重程度不同,CHB组又分为轻度CHB组(16例)、中度CHB组(19例)和重度CHB组(12例),LC组又分为代偿期LC组(15例)和失代偿期LC组(20例),HCC组又分为甲胎蛋白(AFP)阴性HCC组(8例)和AFP阳性HCC组(10例)。比较CHB组、LC组、HCC组和对照组TIM-3、GP73、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白和总胆红素(TBil)水平;比较CHB亚组、LC亚组和HCC亚组患者TIM-3、GP73水平;分析HBV感染相关肝病患者TIM-3和GP73与ALT、AST、白蛋白及TBil的相关性。结果:四组TIM-3、GP73、ALT、AST、白蛋白和TBil水平比较,差异有统计学意义(P<0.001);CHB组、LC组和HCC组TIM-3、GP73、ALT、AST及TBil水平均高于对照组,白蛋白水平均低于对照组(P<0.05);LC组和HCC组TIM-3、GP73、ALT、AST及TBil水平均高于CHB组,白蛋白水平均低于CHB组(P<0.05);HCC组TIM-3、GP73、ALT、AST及TBil水平均高于LC组,白蛋白水平低于LC组(P<0.05)。轻度CHB组、中度CHB组、重度CHB组TIM-3和GP73水平比较,差异有统计学意义(P<0.001);中度CHB组、重度CHB组TIM-3和GP73水平均高于轻度CHB组(P<0.05);重度CHB组TIM-3和GP73水平均高于中度CHB组(P<0.05)。失代偿期LC组TIM-3、GP73水平均高于代偿期LC组(P<0.05)。AFP阳性HCC组TIM-3、GP73水平均高于AFP阴性HCC组(P<0.05)。CHB组、LC组、HCC组患者TIM-3、GP73与ALT、AST、TBil呈正相关,与白蛋白呈负相关(P<0.05)。结论:HBV感染相关肝病患者血清TIM-3、GP73水平明显升高,CHB、LC、HCC不同疾病发展阶段其表达水平升高程度显著,且与病情发展及肝功能损伤密切相关。

梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。