Main Components of Polyphenols of Trillium tschonoskii Maxim. and Changes under Different Se Concentrations

[Objectives] To analyze main components of polyphenols of Trillium tschonoskii Maxim. and study changes under different Se concentrations. [Methods] In this experiment,the Trillium tschonoskii Maxim. was used and spectrophotometry was applied to measure the total phenols in stems,leaves and rhizomes of Trillium tschonoskii Maxim. [Results]Total phenols in stems and leaves and rhizomes of Trillium tschonoskii Maxim. were 3. 026% and 0. 513% respectively,the content of total phenols in stems and leaves was 5. 9 times of that in rhizomes; total phenol extracting solution was analyzed through UV-Vis scanning,HPLC detection,and LC-MS; 3 main polyphenol compounds were obtained: chlorogenic acid,caffeic acid and rutin,in which chlorogenic acid and caffeic acid were firstly discovered in Trillium tschonoskii Maxim. and rutin was firstly discovered in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. HPLC method was used to measure the content of chlorogenic acid,caffeic acid,and rutin in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. under different Se concentrations. [Conclusions]The content of chlorogenic acid in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. increases with the increase of Se concentration,showing Se promotes Se accumulation and the maximum content of chlorogenic acid is 2. 58%; the content of caffeic acid in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. increases slightly with the Se concentration,showing the promotion of Se to accumulation of caffeic acid is not significant;the content of rutin in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. firstly increases then declines with the increase in Se concentration,at25 mg/kg Se concentration,rutin reached the maximum value,showing the promotion of Se to rutin accumulation is not significant.

基于STAT3/VEGF信号通路探究头顶一颗珠正丁醇萃取物对肝癌大鼠的抑制作用及其机制

目的探讨头顶一颗珠正丁醇萃取物对二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠原发性肝癌的抑制作用,探讨其对STAT3/VEGF信号通路的影响,并研究其对抗肝癌血管生成的分子机制。方法将大鼠随机分为G1组(正常对照组)、G2组(模型组)、G3组(华蟾素组)、G4组(头顶一颗珠低剂量组)、G5组(头顶一颗珠高剂量组),除G1组外所有大鼠腹腔注射二乙基亚硝胺建立肝癌大鼠模型。使用头顶一颗珠正丁醇萃取物处理肝癌大鼠,检测大鼠肝脏指数、脾脏指数;检测大鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)的水平;ELISA法检测血清TGF-β1和VEGF的水平;同时采用Western blot检测VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平。结果与G1组比较,G2组大鼠肝脏指数、ALT、AST和TBIL的水平显著增加,ALB的水平显著降低,血清TGF-β1和VEGF的水平显著升高,肝组织VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,头顶一颗珠正丁醇萃取物组大鼠肝脏指数显著降低,血清AST和TBIL水平显著降低,血清TGF-β1和VEGF的水平显著降低,肝组织VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论头顶一颗珠正丁醇萃取物通过抑制STAT3/VEGF信号通路,发挥抗肝癌血管生成作用。

延龄草多糖水提醇沉工艺研究

目的优选延龄草多糖的水提醇沉工艺条件。方法采用正交实验设计,以多糖得率为综合评价指标,对水提醇沉提取工艺的影响因素即提取温度、料液比、提取时间和醇沉体积分数进行考察和优化。结果最佳工艺条件为料液比1∶15,100℃,提取2h,2次,用体积分数80%乙醇沉淀,可使延龄草多糖得率达到4.96%。结论该提取工艺可行,实验结果为确定延龄草多糖的水提醇沉工艺提供了实验依据。

延龄草总皂苷提取纯化工艺及其抗肿瘤活性

目的优选延龄草总皂苷提取纯化工艺,并考察其体内外抗肿瘤活性。方法以出膏率和延龄草总皂苷提取率为指标,单因素、正交实验优化提取工艺;采用大孔吸附树脂技术,通过静、动态吸附与解吸实验,优选最佳纯化工艺;噻唑蓝(MTT)法测定总皂苷对3种肿瘤细胞株MCF-7、HeLa、A549的抑制作用,并研究其对S180小鼠移植瘤的作用。结果最佳提取工艺条件为乙醇体积分数80%,超声时间40 min,料液比1:50,提取温度60℃;纯化工艺为D101大孔树脂,最大上样量为80 mL,洗脱剂为75%乙醇,洗脱体积4 BV,收集洗脱液,纯化得到的固形物中总皂苷含量为61.45%;延龄草总皂苷体外对3种肿瘤细胞均有一定的抑制作用,IC50分别为(7.89±1.13),(8.18±1.04),(28.5±3.16)μg·mL-1,体内对S180荷瘤小鼠的抑制率为12.6%~58.0%。结论该工艺稳定、可行,所得到的总皂苷具有较好的抗肿瘤活性。

超声微波双辅助法提取延龄草多糖及其抗氧化活性的研究

目的优选超声微波双辅助法提取延龄草多糖的工艺并对不同醇沉部位的多糖进行初步抗氧化活性研究。方法以延龄草总多糖提取率为评价指标,通过单因素实验和响应面法来确定超声微波双辅助法提取延龄草多糖的最佳工艺,并与单独超声提取和微波提取进行对比。通过乙醇(40%、60%、80%)分级沉淀法分离得到不同醇沉部位多糖(TTMP-40、TTMP-60、TTMP-80)并对其进行DPPH清除活性研究。结果超声微波双辅助法提取延龄草多糖最佳工艺为:提取时间33 min、超声功率为294 W、微波功率为308 W、液料比为27∶1 mL·g^(-1),提取率可达4.93%,高于单独超声提取和单独微波提取。不同醇沉部位多糖清除DPPH活性具有浓度依赖性,其活性TTMP-80(IC_(50)=0.73 g·L^(-1))>TTMP-60(IC_(50)=1.03 g·L^(-1))>TTMP-40(IC_(50)=3.41 g·L^(-1))。结论超声微波双辅助法提取延龄草多糖工艺简便,方法可行。不同醇沉部位多糖均显示一定的抗氧化活性,可为延龄草多糖的进一步研究提供参考。

头顶一颗珠正丁醇萃取物对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其对MMP-9、NF-κB p65的表达研究

目的探究头顶一颗珠提取物对人肝癌HepG2细胞抑制作用及其对基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinases-9,MMP-9)、核转录因子-κB p65(nuclear factorκB p65,NF-κB p65)的表达研究。方法多浓度头顶一颗珠正丁醇萃取物(0、6、12、24、48、96)μmol/L分别作用于人肝癌细胞株(hepatocarcinoma G2,HepG2)24小时、48小时、72小时,使用细胞增殖和毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法,比较各组肝癌HepG2细胞的生长抑制率。多浓度头顶一颗珠正丁醇萃取物(0、3、6、12、24)μmol/L分别作用于HepG2细胞48小时后,用实时荧光定量PCR(real-timequantitative PCR,qPCR)检测MMP-9、NF-κB p65的表达水平。结果多浓度头顶一颗珠正丁醇萃取物,与对照组比较,HepG2细胞的生长增殖均受到明显抑制(P<0.01),且呈时间和浓度依赖性;MMP-9、NF-κB p65表达水平明显降低(P<0.01),药物浓度越高,MMP-9 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达水平越低,MMP-9、NF-κB p65 mRNA表达水平呈正相关性。结论多浓度头顶一颗珠正丁醇萃取物能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性,可能通过抑制MMP-9 mRNA、NF-κB p65 mRNA的表达,从而达到抗肝癌作用。

头顶一颗珠乙醇提取物对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用研究

目的:研究头顶一颗珠乙醇提取物对四氯化碳(CCl4)致小鼠肝损伤的保护作用。方法:取小鼠将其随机分为对照组、模型组、阳性对照组、小剂量头顶一颗珠乙醇提取物组和大剂量头顶一颗珠乙醇提取物组;采用每周2次腹腔注射10 mL/kg的10%CCl4溶液造模,给药结束后分别取小鼠血和肝脏,分离血清和制备肝均浆,检测ALT、AST的活性和肝药酶含量。结果:与模型组相比,头顶一颗珠乙醇提取物组对小鼠ALT、AST水平均有明显下降,而肝药酶含量明显上升。结论:头顶一颗珠乙醇提取物对CCl4致小鼠肝损伤具有保护作用。

响应面分析法优化回流提取延龄草甾体皂苷工艺研究

目的通过响应面法优化延龄草中3种甾体皂苷的提取工艺。方法采用HPLC法,以延龄草中重楼皂苷Ⅵ(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y3T)、重楼皂苷Ⅶ(Y4T)得率为评价指标,通过单因素试验,考察了提取时间、提取次数、液料比对3种甾体皂苷提取效果的影响,并采用Box-Behnken设计-响应面法分析,优选最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为70%乙醇,提取时间为120 min,提取3次,液料比为15:1。结论响应面法优化的延龄草3种甾体皂苷提取工艺,稳定、可行。

基于NF-κB通路探讨延龄草醇提物对急性肝损伤大鼠的保护作用

目的基于NF-κB通路探讨延龄草醇提取物对CCl_4所致大鼠急性肝损伤的保护作用及机制。方法把48只SD大鼠,随机分为空白对照组、模型组、联苯双酯组(200 mg·kg^(-1))、延龄草醇提取物低、中、高剂量组(100,500,1 000 mg·kg-1)6组。以CCl_4诱导急性肝损伤模型,造模后灌胃给药,治疗持续一段时间后取材。称重后计算大鼠肝脏脏器系数;检测各组大鼠血清中ALT、AST的活性;利用HE染色切片观察各组肝组织形态学的变化;以RT-PCR法检测各组大鼠肝组织中TNF-α、IL-1β,IL-6的基因表达;通过Western blot检测各组肝组织中NF-κB的表达量。结果与模型组相比,延龄草醇提物各治疗组可降低肝脏脏器系数,高剂量组肝小叶结构完整,肝细胞排列规则,大小均匀;RT-PCR结果显示,延龄草醇提取物能够显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6的表达。Western blot结果显示,延龄草醇提物显著地降低了NF-κB的表达。结论延龄草醇提取物能够通过抑制NF-κB的表达,保护CCl_4诱导的大鼠急性肝损伤。