虹鳟倍性鉴定SSR标记筛选与应用研究

虹鳟(Oncorhynchusmykiss)是我国冷水性鱼类的主要养殖品种。与二倍体相比,虹鳟三倍体具有生长速度快、肉质好和不育等优点。目前,鉴定虹鳟倍性主要是通过流式细胞术进行DNA含量分析,但这种方法需要采集鱼类血液或组织样本,会对其造成伤害。为了实现利用微创方法收集样本鉴定虹鳟倍性,本研究利用PCR扩增以及电泳分离技术对153个微卫星标记(SSR标记)进行分析,其中139个SSR标记能够在二倍体和三倍体中成功扩增,筛选出132个SSR标记具有多态性,最终鉴定出7个标记在三倍体中表现出较高的变异性。通过在52个已知倍性水平的参考样本和48个未知倍性的样本上进行验证,进一步从中筛选出3个SSR标记(SSR1054、SSR1056和SSR1468)足以区分倍性水平,并且根据3个标记序列重新设计了3对具有良好稳定性的引物序列进行倍性分析应用。本研究所筛选的SSR标记解决了现有虹鳟倍性鉴定中存在的技术流程复杂、耗材昂贵的问题,并有助于不同倍性虹鳟的遗传多样性研究。

饲料蛋白质和脂肪水平对三倍体虹鳟生长性能、生理代谢和感官品质的影响

研究采用3×3双因素实验设计,配制3个饲料蛋白质水平(35%、40%和45%)和3个饲料脂肪水平(20%、25%和30%)的9种饲料探究饲料蛋白质和脂肪水平对三倍体虹鳟(Oncorhynchusmykiss;初始体重为1.5kg)生长性能、生理代谢和感官品质的影响。实验结果表明:在生长性能方面,蛋白质水平为40%、脂肪水平≥25%的饲料组(P40L25和P40L30组)三倍体虹鳟增重率最高,且P40L30组饲料系数最低。在生理代谢方面,高蛋白质饲料(45%)会降低三倍体虹鳟内脏中的脂肪沉积,并促进肝脏健康;高脂肪饲料(30%)不会增加肝脏脂肪含量,同时会提高肝脏抗氧化能力;然而高蛋白质高脂肪饲料(P45L30)组肠道发生氧化损伤导致消化能力下降进而影响鱼类生长和饲料利用。在感官品质方面,肌肉红色值在P45L30组最高,饲料脂肪水平对三倍体虹鳟肉质和气味无明显影响,而投喂高蛋白质饲料(45%)会导致肉质下降。综合以上结果,体重在1.5—2.5kg生长阶段的三倍体虹鳟饲料中适宜的蛋白质水平为40%,适宜脂肪水平为≥25%。

三倍体虹鳟发眼卵恒温盐碱冷流水人工孵化与培育技术

在甘肃省白银市平川区的恒温盐碱冷流水孵化车间开展了三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)发眼卵人工孵化及鱼苗培育试验,通过水质调控、疫病防控、营养强化、科学投饵等关键技术方法,探索出三倍体虹鳟发眼卵恒温盐碱冷流水人工孵化与鱼苗培育模式,试验取得较好的经济效益,三倍体虹鳟发眼卵孵化率达到了92%,鱼苗成活率达到80%以上。

三倍体虹鳟线粒体基因组结构与系统进化分析

【目的】获得三倍体虹鳟线粒体基因组(mtDNA)全序列,揭示其序列的主要结构特征,探究三倍体虹鳟系统发育相关信息,丰富鲑科鱼类mtDNA数据库,为三倍体虹鳟进化和系统发育研究提供参考。【方法】选取健康状况良好且规格相似的三倍体虹鳟3条,采集其背脊上部肌肉组织,提取基因组DNA,检测DNA质量后通过Illumina测序技术对三倍体虹鳟mtDNA进行测序、组装和注释,并进行生物信息学分析;基于已报道的27种鲑科鱼类的mtDNA,运用邻接法(neighbour-joining,NJ)构建鲑科鱼类系统发育树。【结果】三倍体虹鳟mtDNA全长为16655 bp;A+T含量较高(54.06%),G+C含量较低(45.94%),其碱基组成有明显的A/T偏向性。三倍体虹鳟mtDNA包括13个蛋白编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个非编码控制区(D-loop区)。13个蛋白编码基因中,除cox1的起始密码子为GTG外,其他12个基因的起始密码子均为ATG,终止密码子均为TNN;2个rRNA基因总长度为2606 bp,22个tRNA基因中除trnS1外,其余21个基因均能形成典型的三叶草结构;D-loop区在环状的DNA分子中位于trnF和trnP之间。系统发育树结果显示,28个物种明显分为2个大的支系,鲑亚科的麻哈鱼属、副哲罗鱼属、细鳞鲑属、哲罗鱼属、红点鲑属、鳟属的鱼种聚为一支,其中三倍体虹鳟和虹鳟最先聚为一支,表明其亲缘关系最近;茴鱼亚科茴鱼属和白鲑亚科的白鲑属、柱白鲑属鱼种聚为另一支。【结论】获得了三倍体虹鳟mtDNA,三倍体虹鳟与虹鳟亲缘关系最近。

三倍体雌性虹鳟卵巢发育的类雄性化趋势

以4～35月龄三倍体雌性虹鳟(Oncorhynchus mykiss)为实验材料,以同源二倍体为对照,采用组织学和放射免疫方法,从性腺发育和生殖激素变化2个方面对其类雄性化现象进行了研究,并分析了类雄性化的原因。结果表明,三倍体虹鳟的卵原细胞可正常发育至卵黄发育前期卵母细胞(8月龄左右),此后卵母细胞败育,基质细胞包围卵原细胞形成卵原细胞簇,17月龄后卵巢中卵原细胞簇减少,出现与雄性精小囊结构相似的类生精细胞囊结构;26～35月龄类生精细胞囊逐渐成为性腺的主要成分,在类生精细胞囊内出现大量坏死的细胞;13月龄后三倍体雌性虹鳟血清中GtH-Ⅰ、GtH-Ⅱ、17β-E2含量显著低于同期二倍体虹鳟,睾酮(T)在21月龄后持续上升,并显著高于同期二倍体(P<0.05)。17月龄后三倍体雌性虹鳟卵巢发育呈现类雄性化趋势,但不能完成精子发生全部过程。由于性腺中生殖细胞与体细胞之间正常的相互作用缺失,合成类固醇的滤泡细胞发育分化受阻,T芳化为17β-E2途径中断,导致血液中T浓度升高,进而使性原细胞的分化受到了诱导,因而卵巢发育呈现类雄性化趋势。

二、三倍体虹鳟肌肉组织结构及营养成分的比较

选取相同养殖条件下3个不同体质量组的二倍体虹鳟和三倍体虹鳟,其中每组二倍体和三倍体虹鳟各10尾,分析其肌肉常规营养成分、氨基酸含量和肌纤维密度及直径,以比较二倍体和三倍体虹鳟的肌肉品质特性差异。试验结果表明,随着体质量的增加,二倍体、三倍体虹鳟肌纤维密度均降低,而肌纤维直径增大;二倍体虹鳟肌纤维直径小于三倍体,密度大于三倍体(P<0.05)。随着体质量的增加,二倍体和三倍体虹鳟肌肉水分含量和粗灰分含量减少,而粗蛋白、粗脂肪含量显著增加;三倍体虹鳟粗蛋白和粗脂肪含量显著高于同组二倍体(P<0.05),水分和粗灰分含量略低于二倍体,均差异不显著(P>0.05)。二倍体和三倍体虹鳟肌肉中谷氨酸含量均最高,三倍体虹鳟总氨基酸含量、必需氨基酸含量以及鲜味氨基酸含量高于二倍体;根据营养价值评价结果,二倍体和三倍体虹鳟均为蛋氨酸和胱氨酸总量最高,第一限制性氨基酸均为苯丙氨酸。整体上来说,二倍体虹鳟和三倍体虹鳟均为优质蛋白源,二倍体虹鳟嫩度优于三倍体,但随着体质量的增加,三倍体虹鳟肌肉在营养成分上较均衡,且鲜美度要优于二倍体,有更好的食用价值及营养价值。

热休克诱导全雌虹鳟三倍体

以虹鳟二倍体的伪雄鱼为父本(遗传型为xx),探讨了采用热休克方法阻止第二极体排放诱导全雌虹鳟三倍体的适宜条件。结果表明:虹鳟三倍体诱导率明显受处理温度、起始时间以及持续时间等因子的影响。在孵化水温为6.5℃,卵子受精后20min经26℃热处理20min,孵化率为64.62%,三倍体诱导率为86.67%;卵子受精后10min经26℃热处理20min,三倍体诱导率为100%,但孵化率仅为3.87%。受精卵经26℃处理的诱导效果好于24℃和28℃的(P<0.01)。

二倍体与三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)红细胞及部分血液指标的比较

对三倍体和二倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的红细胞大小(长、短径值和体积)、形态及部分血液指标(红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、红细胞脆性和白细胞数)进行了比较。结果表明:三倍体虹鳟红细胞体积与二倍体比值为1.51∶1,细胞核大小与二倍体比值为1.49∶1,与理论值(1.5∶1)比较均无显著差异(P>0.05)。二倍体红细胞短径/长径比值为0.63,呈现出椭圆形;三倍体红细胞短径/长径比值为0.60,呈现出明显的长椭圆形,并有19%的红细胞有哑铃形或分裂的细胞核,这可作为区别二倍体鱼类的一个重要鉴定标志。三倍体虹鳟的红细胞数、红细胞压积和红细胞脆性明显小于二倍体(P<0.05),而血红蛋白与白细胞数与二倍体比较无明显差异(P>0.05)。

三倍体雌性虹鳟性腺发育过程中lc3b基因的表达分析

旨在证明细胞自噬与三倍体雌性虹鳟性腺败育的关系。利用RT-PCR扩增虹鳟自噬基因lc3b(Microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,lc3b)的编码区序列,通过透射电镜观察三倍体雌性虹鳟不同发育阶段性腺中自噬小体的形态,结合不同发育阶段性腺中lc3b基因和蛋白的表达,来证明细胞自噬的发生。结果表明,在200 dpf-270 dpf(Days post fertilization,dpf)这个发育阶段,lc3b基因以及自噬蛋白LC3B-II/LC3B-I的表达处于相对较高的水平,在这个时期内,都观察到了自噬体结构的存在。这些结果证明了性腺细胞自噬为三倍体雌性虹鳟性腺败育的主要原因之一。

三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)卵巢分化及滞育的调控机制研究

尽管与性别决定和分化的相关基因在二倍体虹鳟中已被鉴定出来,如Cyp19a1a、Foxl2、Dmrt1、Amh和Sox9,但关于三倍体雌性虹鳟独特性腺表型及其相关性别控制基因的表达规律仍未得到深入研究,尤其是早期卵巢发育阻滞导致的生殖细胞去分化特征。因此,本研究以三倍体雌性虹鳟性腺发育中起重要调控作用的特异候选基因作为重点研究对象,辅助性腺体细胞与生殖细胞分化方向的组织学证据和类固醇激素表达规律,验证了各基因间的级联调控关系。结果表明,虹鳟三倍体与二倍体卵巢的分化特征基本一致。虹鳟二倍体与三倍体性腺分别在84dpf和98dpf就已分化为卵巢。但三倍体虹鳟卵巢分化存在障碍,早期发育停滞,卵原细胞及其滤泡细胞数量有限。Foxl2和Cyp19a1a在二倍体虹鳟卵巢和精巢中均有表达,它们在卵巢中表达量均呈逐渐升高趋势,但在精巢中的表达量非常低;这两个基因在雌性三倍体虹鳟性腺中的表达呈先升高后降低的趋势,其表达量均在8月龄时期达到最大。Dmrt1、Amh和Sox9在二倍体精巢和雌性三倍体卵巢中的表达均呈不断上调趋势,这些基因上调可能与血清睾酮含量的增加相关,因为在10月龄时期这两种鱼的血清含量相对较高,而这三个基因在二倍体虹鳟卵巢中的表达却呈下调趋势。因此本研究认为,维持鱼类卵巢分化需要持续高水平的雌激素,这可能是脊椎动物进化过程中的一个保守特征。可以推断雌性三倍体虹鳟卵巢滞育将导致其体细胞去分化,这对于Cyp19a1a表达及雌二醇合成存在抑制作用。因为这些雌激素是用来维持它们分化和继续发育的,可能产生一个负反馈圈,之后去分化会增强。

二倍体和三倍体虹鳟精液低温保存寿命的研究

与二倍体(2n组)精原液做比较,以不同密度为组别,研究了4℃下两组(3n-HD和3n-LD)三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)精原液的保存时限。结果发现,随着保存时间的延长,精液中精子的活力和寿命逐渐降低。2n组、3n-HD组和3n-LD组虹鳟精原液中精子分别在保存5d、4.5d和12.5d后失去活力;在7d、15d和14.5 d后死亡,即三倍体虹鳟精原液4℃保存时间约为二倍体的2倍,说明低温短期保存三倍体虹鳟精原液可以取得较好效果。

氨氮急性胁迫下二、三倍体雌性虹鳟应激耐受性比较

在集约化养殖条件下,当受到环境因子或人为因子胁迫时,三倍体雌性虹鳟死亡率明显高于二倍体雌性虹鳟,此现象与其应激耐受性有关。为了解氨氮急性胁迫下二倍体和三倍体雌性虹鳟应激耐受性差异,采用96 h半静态毒性试验法,在氨氮浓度分别为16.42、24.3、36.06 mg·L-1胁迫下,对二者急性毒性效应、血液生理生化指标以及肝脏非特异性免疫相关基因表达开展研究。结果表明,与二倍体雌性虹鳟相比,三倍体雌性虹鳟毒性反应较迅速且强烈,其血液中白细胞(WBC)、皮质醇(COR)和丙二醛(MDA)含量高;红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性低;鳃组织炎性细胞浸润,黏液细胞增多,鳃小片黏连,组织损伤严重;三倍体雌性虹鳟肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8基因表达量高于二倍体雌性虹鳟,HSP70、HSP90基因表达量低于二倍体雌性虹鳟。可知,三倍体雌性虹鳟对氨氮胁迫反应较二倍体雌性虹鳟更为敏感,其抗氧化及携氧调节能力较弱,即三倍体雌性虹鳟对氨氮急性胁迫应激耐受性更差。

线粒体介导的三倍体虹鳟卵母细胞凋亡

采集不同发育时期三倍体虹鳟幼鱼卵巢,采用免疫组化、线粒体膜电位荧光探针、荧光定量PCR和蛋白免疫印迹等方法,观察、检测卵巢发育过程中卵母细胞细胞凋亡现象及线粒体凋亡途径,证实三倍体虹鳟卵母细胞发生线粒体介导的细胞凋亡。结果表明,12℃发育水温下,三倍体虹鳟卵母细胞在受精后210 d开始凋亡,受精后270 d凋亡达高峰,330 d凋亡逐渐消失。证明卵母细胞发生凋亡是导致三倍体雌性虹鳟不育的重要原因,为三倍体鱼类性腺发育深入研究提供理论依据。

急性高温胁迫对虹鳟二倍体和三倍体幼鱼hsps基因表达的影响

本文以二倍体和三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)幼鱼为实验对象,探究急性高温胁迫下,不同倍性虹鳟热休克蛋白家族(hsps)基因表达水平。选取二倍体和三倍体虹鳟幼鱼,分别进行常温处理(14℃)和高温胁迫(22℃),并在高温胁迫48h后,将虹鳟置于常温(14℃)恢复48h。分别在实验开始的0,12,24,48,72和96h进行取样,测定实验虹鳟肝脏和肌肉组织中的hsp70s(hsp70a,hsp70b),hsp90s (hsp90a1a,hsp90a2a,hsp90a1b,hsp90a2a,hsp90b1,hsp90b2)mRNA水平。结果表明:hsp70s和hsp90s的各个亚型均能对热胁迫做出反应,并具有应答幅度的组织特异性和时间特异性。在胁迫6和24h后,上述基因mRNA水平达到最高,随后降低。三倍体幼鱼肝脏和肌肉hsps mRNA表达水平的峰值显著高于二倍体幼鱼。研究结果显示,三倍体虹鳟对高温环境更为敏感,需要消耗更多的能量用于适应高温环境。

不同养殖模式下三倍体虹鳟鱼肉品质差异的研究

以网箱(W)、工厂化循环水(G)和流水池塘(C)养殖4 kg左右的三倍体虹鳟为研究对象,通过检测表观、肉质、气味及营养价值相关111个品质指标来评价不同养殖模式下三倍体虹鳟鱼肉品质的差异。结果表明,在3种养殖模式下三倍体虹鳟鱼肉品质存在明显差异。其中,网箱养殖三倍体虹鳟鱼肉色调角、硬度、内聚性、弹性、咀嚼性、汁液流失率和失水率均显著高于其他养殖模式(P<0.05),而挥发性气味物质中1-庚醇、庚醛、辛醛、壬醛和气味活度总值显著低于其他养殖模式(P<0.05);工厂化循环水养殖三倍体虹鳟肥满度和鱼肉的红色值、色度值、盐溶性蛋白含量、总脂肪酸含量和n-3脂肪酸含量显著高于其他养殖模式(P<0.05);流水池塘养殖三倍体虹鳟肥满度、鱼肉的黄色值、色度值、水分、脂肪含量、n-3脂肪酸含量和多不饱和脂肪酸含量最低(P<0.05),出肉率、黏附性、肌糖原含量及挥发性风味物质中1-辛烯-3-醇、2,3-辛二酮、戊醛、庚醛、辛醛、(E)-2-癸烯醛和气味活度总值最高(P<0.05)。总之,三种养殖模式养殖的三倍体虹鳟品质各具特色:网箱养殖三倍体虹鳟鱼肉质地坚实富有弹性,挥发性风味物质含量较低;工厂化循环水养殖三倍体虹鳟具有较红的肉色并富含不饱和脂肪酸;流水池塘养殖三倍体虹鳟形体优美且出肉率相对较高,挥发性风味物质含量丰富。

饲料蛋白质水平对三倍体虹鳟生长和肠道组织形态的影响

在水温8~16℃下,将初始体质量为(233.30±0.39)g的三倍体虹鳟Oncorhynchus mykiss饲养在规格为3m×3 m×6 m的网箱中,网箱放在青海省龙羊峡水库,每箱100尾,分别投喂蛋白质水平为35.4%(低蛋白质组)、43.3%(中蛋白质组)和52.4%(高蛋白质组)的等脂等能饲料,每种饲料4个网箱,探讨饲料蛋白质水平对三倍体虹鳟生长和肠道组织形态的影响。80 d的饲养结果表明:随着饲料蛋白质水平的增加,特定生长率、肠道皱襞高度和上皮细胞厚度呈显著上升的趋势(P<0.05);与低蛋白组相比,中蛋白组和高蛋白组特定生长率分别高出14.4%和22.1%;肠长指数(肠长/体长×100%)、Zihler指数(肠长(mm)/[10×(体质量(g)1/3)])、肠道微绒毛高度和肌层厚度呈显著下降的趋势(P<0.05);饲料蛋白质水平对三倍体虹鳟肠道中杯状细胞数量无显著影响(P>0.05)。综上所述:投喂高蛋白质水平饲料能促进三倍体虹鳟生长,其原因是投喂高水平蛋白质饲料(52.4%)增大了鱼肠道表面积,提高对饲料的消化吸收率;投喂低水平蛋白质饲料(35.4%)可能导致肠道炎症。

三倍体虹鳟微流水养殖研究与比较效益分析

为了在"微流水+液态氧增氧"条件下,对增氧系统设备参数、系统增氧效率、三倍体虹鳟养殖生产性能及其比较效益等进行研究,提出针对该养殖模式的相关技术经济参数,通过为期573 d的中试生产试验。结果表明,在平均注水率仅为7.49的条件下,三倍体虹鳟由平均初始规格9.46 g的质量增至平均2 004.41 g;单位水体载鱼密度由2.737 kg/m^3增加至17.82 kg/m^3;平均日增质量3.48 g,平均饲料系数1.16,养殖成活率为92.46%。液态氧增氧系统平均增氧效率为1.66 kg/(k W·h),可完全满足三倍体虹鳟良好生长的需要。试验表明,该新型养殖模式比较效益显著,投入产出比为1∶1.73,单周期毛利润率净提升约22%~25%,具有良好的推广应用前景。

饲料蛋白质水平对三倍体虹鳟肌肉组织特性、蛋白质周转和肌肉生长相关基因表达的影响

本研究旨在探讨饲料蛋白质水平对三倍体虹鳟肌肉组织特性、蛋白质周转和肌肉生长相关基因表达的影响。配制3种等脂等能饲料,蛋白质水平分别为35.4%(低蛋白质组)、45.8%(中蛋白质组)和52.4%(高蛋白质组)。将1 200尾初始体重为(232.8±0.1) g的三倍体虹鳟随机分为3组,每组4个重复,每个重复放养100尾鱼,进行80 d的养殖试验。结果表明:1)低蛋白质组的肌纤维密度和肌纤维数显著高于中、高蛋白质组(P<0.05);各组间肌纤维直径(D)≤20μm的肌纤维比例无显著差异(P>0.05);120μm160μm的肌纤维比例在低蛋白质组最低,显著低于其他2组(P<0.05)。2)随着饲料蛋白质水平的升高,生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)和胰岛素样生长因子受体Ⅰ(IGFRⅠ)基因相对表达量呈现先上升后下降的趋势,组间差异显著(P<0.05),在中蛋白质组达到最大值;肌分化因子(Myod)、生肌因子5(Myf5)、肌原调节因子4(Mrf4)和肌细胞生成素(Myog)基因相对表达量显著增加(P<0.05)。3)蛋白质合成途径中,中、高蛋白质组蛋白激酶B(AKT)磷酸化与非磷酸化蛋白比值(p-AKT/AKT)显著高于低蛋白质组(P<0.05)。随着饲料蛋白质水平的升高,雷帕霉素靶蛋白(TOR)和真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4Ebp1)磷酸化与非磷酸化蛋白比值(pTOR/TOR、p-4Ebp1/4Ebp1)呈现先上升后下降的趋势,各组间差异显著(P<0.05),在中蛋白质组达到最大值;对蛋白质降解途径而言,自噬相关蛋白12l(Atg12l)基因相对表达量随着饲料蛋白质水平的升高逐渐增加(P<0.05)。钙依赖性蛋白酶2(Capn2)基因相对表达量在高蛋白质组显著高于其他2组(P<0.05),同时钙蛋白酶抑制蛋白短亚型(Cast-s)和钙蛋白酶抑制蛋白长亚型(Cast-l)基因相对表达量呈现先上升后下降的趋势,组间差异显著(P<0.05),其中在中蛋白质组达到最大值。肌肉萎缩F-box蛋白25(Fbx25)基因相对表达量呈现先下降后上升的趋势,其中中蛋白质组显著低于低蛋白质组(P <0.05)。综上所述,当饲料蛋白质水平增加到45.8%时,能促进肌纤维的增大,但对肌纤维增生无显著影响;饲料蛋白质水平通过调控肌源性调节因子和生长激素-胰岛素样生长因子通路进而调控肌纤维增大;当饲料蛋白质水平增加到45.8%时,可促进肌肉蛋白质合成代谢;肌肉蛋白质各分解途径在不同饲料蛋白质水平组存在差异。

青海省养殖三倍体虹鳟呈味核苷酸和挥发性风味物质的研究

本研究以国产虹鳟主产地-青海省龙羊峡、公伯峡和拉西瓦网箱养殖三倍体虹鳟为研究对象,采用高效液相色谱法检测分析呈味核苷酸物质,用顶空固相微萃取(headspace solid phase microextraction,HS-SPME)结合气相色谱-质谱联用(gas chromatgraph ymass spectrometry,GC-MS)分析挥发性化合物。结果显示:青海省养殖虹鳟鱼肉呈鲜味的肌苷酸含量为176~242 mg/100 g,其中,公伯峡和拉西瓦养殖虹鳟鱼肉肌苷酸含量显著高于龙羊峡产地组(P<0.05);挥发性化合物共鉴定出69种,用气味活度值法(odor activity value,OVA)筛选出21种气味活性物质,其中壬醛、辛醛、2-壬烯醛、1-辛烯-3-醇和己醛对虹鳟鱼肉的气味贡献较大,主要呈青草味、油脂味、花香味和鱼腥味。公伯峡和拉西瓦养殖虹鳟鱼肉挥发性化合物含量整体较高。综上,青海省养殖三倍体虹鳟鱼肉呈味核苷酸含量较高,挥发性化合物种类丰富。拉西瓦和公伯峡养殖虹鳟风味相似,具有较高的肌苷酸含量和挥发性气味物质,龙羊峡养殖虹鳟新鲜度较高,鲜味及气味强度较低。研究结果可为养殖三倍体虹鳟鱼肉风味物质的分析和调控提供一定的理论依据。

三倍体虹鳟实时荧光定量PCR内参基因稳定性分析

采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、核糖体大亚基蛋白基因(rplp2)、真核延伸因子基因(ef1-α)、β-肌动蛋白(β-actin)和18S核糖体核酸基因(18S rRNA)等5个候选内参基因在体质量约800 g三倍体虹鳟脑、眼、鳃、皮肤、心脏、肾脏(头肾、中肾、后肾)、肝脏、脾脏、胃、幽门垂、肠(前肠、中肠、后肠)以及肌肉(红肌、白肌、肌间隔)等组织中的表达水平,通过内参基因表达的Ct值比较,并采用GeNorm、Best-Keeper、NormFinder 3种软件分析5个候选内参基因的表达稳定性。GeNorm分析显示,5个候选内参基因的平均表达稳定值(M)依次为β-actin=rplp2<ef1-α<18S rRNA<gapdh,其中β-actin和rplp2 M值最小,为1.42。Best-Keeper分析显示,5个候选内参基因的标准偏差依次为rplp2<ef1-α<β-actin<18S rRNA<gapdh,变异系数依次为rplp2<ef1-α<β-actin<gapdh<18S rRNA,其中rplp2标准偏差(0.92)和变异系数(3.94%)均最小。NormFinder分析显示,5个候选内参基因的平均表达稳定值依次为rplp2=β-actin<ef1-α<18S rRNA<gapdh,其中rplp2与β-actin稳定值最小(0.66)。综上所述,5个候选内参基因中rplp2与β-actin内参基因表达最稳定,建议rplp2与β-actin作为三倍体虹鳟实时荧光定量PCR分析的适宜内参基因。