建立转录丙型肝炎病毒结构区基因细胞模型的研究

目的 :建立转录丙型肝炎病毒 (HCV)结构区基因的细胞模型 ,为研究中药在体外对HCV结构区基因转录的抑制作用提供实验用细胞模型。方法 :用脂质体将已构建好的含HCV结构区基因 1.73kb的真核细胞表达载体pBK CMV转入人HeLa细胞 ,用G418选择性培养基筛选出成功转染的HeLa细胞 (HeLaD细胞 ) ,用Trizol提取HeLaD细胞的总RNA ,通过特异性引物进行逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,从mRNA水平来验证HeLaD细胞中HCV结构区基因的有效转录。结果 :对从HeLaD细胞抽提的总RNA作RT PCR ,得到 14 4bp的特异的扩增片段 ,证实HCV结构区基因在HeLaD细胞中有转录水平的表达。结论 :重组质粒pBK CMV能被成功地转染人HeLa细胞 ,且HCV的结构区基因能够有效地表达 ,成功建立了能转录HCV结构区基因的细胞模型 HeLaD。