p25/cdk5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ_(25-35)诱导的tau蛋白过度磷酸化

目的探讨在Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对周期依赖性蛋白激酶(cyc lin-de-pendent k inase 5,CDK 5)的激动亚基p35/p25的影响。方法通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠皮层神经元CDK 5的两个亚基cdk5和p35/p25的蛋白水平,以及CDK 5的磷酸化底物tau蛋白在Ser199/202、Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平。结果凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,可使皮层神经元中p25的数量增多,以及tau蛋白在Ser199/202、Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平增高,但对cdk 5亚基表达水平影响并不明显。Rb1和calpain特异性抑制剂calpeptin可减少皮层神经元p25的生成,同时人参皂苷Rb 1和CDK 5特异性抑制剂roscovitine可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化水平。结论p25/cdk 5可能参与人参皂苷Rb1减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。

周期蛋白依赖性激酶-5抑制肽通过上调神经生长因子缓解高糖环境对人肾足细胞凋亡的影响

目的探究截短型周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)抑制肽(TFP5)对高糖(HG)条件下人肾足细胞损伤和凋亡的影响,及其作用机制。方法将人肾足细胞分为低糖组(LG,1.0 g·L^(-1))、HG组(4.5 g·L^(-1))、HG+Scramble组(4.5 g·L^(-1)+100.0 nmol·L^(-1))、HG+TFP5组(4.5 g·L^(-1)+100.0 nmol·L^(-1))和HG+联合组(4.5 g·L^(-1)+50.0 ng·mL^(-1)K252a+100.0 nmol·L^(-1)TFP5)。用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞凋亡基因和神经生长因子(NGF)及Cdk5的表达水平,用荧光红染料法和DCFH探针法分别检测H_(2)O_(2)和活性氧(ROS)的水平,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果LG组和HG组的B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA分别为(0.04±0.02)×10^(-2)和(0.09±0.01)×10^(-3),Cdk5 mRNA分别为(0.04±0.01)×10^(-1)和(0.07±0.01)×10^(-1),细胞凋亡比率分别为(1.61±0.25)%和(3.77±0.17)%,H_(2)O_(2)分别为0.56±0.27和2.94±1.15,ROS分别为0.51±0.28和1.04±0.07,Cdk5酶活力分别为0.14±0.06和2.11±0.02,差异均有统计学意义(均P<0.01)。LG组、HG+Scramble组和HG+TFP5组的H_(2)O_(2)分别为1.13±0.20、2.49±0.38和1.08±0.18,ROS分别为0.87±0.18、2.61±0.71和0.83±0.22,Bcl-2 mRNA分别为(0.07±0.02)×10^(-2)、(0.01±0.03)×10^(-2)和(0.04±0.06)×10^(-2),NGF mRNA分别为(0.15±0.53)×10^(-1)、0.04±0.06×10^(-1)和0.22±0.08×10^(-2)。HG+Scramble组的上述指标和HG+TFP5组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。HG+Scramble组、HG+TFP5组和联合组的NGF mRNA分别为0.04±0.01×10^(-1)、0.05±0.01×10^(-1)和0.01±0.03×10^(-1),Bcl-2 mRNA分别为(0.05±0.03)×10^(-2)、(0.01±0.00)×10^(-1)和(0.03±0.02)×10^(-2),NGF蛋白相对表达水平分别为1.14±0.07、1.69±0.44和0.48±0.06,HG+TFP5组的上述指标和联合组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论TFP5可通过Cdk5-NGF调控轴显著降低HG培养条件下人肾足细胞内的氧化应激压力和细胞凋亡。

N-乙酰半胱氨酸对Aβ25-35诱导tau蛋白过度磷酸化的影响

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对凝聚态β淀粉样蛋白毒性片段25-35（Aβ25-35）诱导tau蛋白过度磷酸化的影响及可能机制.方法 运用凝聚态Aβ25-35来诱导皮质神经元的tau蛋白过度磷酸化,实验分为空白对照组、Aβ组、NAC与Aβ共同作用组,采用荧光酶标法检测氧自由基（ROS）,用Western印迹方法测定p35/p25亚基、cdk5亚基、磷酸化Thr205和磷酸化Ser404位点水平.结果 凝聚态Aβ25-35（20μmol/L）作用12 h可使得ROS明显升高（218±28比371±31,t=-6.35,P＜0.05）以及tau蛋白在T205（1.00±0.20比1.67±0.12,t=-5,P＜0.05）和S404（1.00±0.02比1.70 ±0.26,t=-4.57,P＜0.05）位点磷酸化水平明显升高;与Aβ处理组相比,NAC（10 mmol/L）预先作用24h然后再与凝聚态Aβ25-35共同作用12 h,ROS水平下降至286±29（t =3.47,P＜0.05）和tau蛋白在T205（1.23±0.12,=3.88,P＜0.05）和S404（1.13±0.06,t=3.64,P＜0.05）位点磷酸化水平皆明显下降;另外,与空白对照组（1.00±0.19）相比,Aβ处理组中的p25水平明显升高（1.83±0.15,t=-6.20,P＜0.05）;而与Aβ处理组相比,NAC预处理组中的p25水平下降（1.23±0.06）,差异皆有统计学意义（t=4.72,P＜0.05）.结论 NAC可通过CDK5信号通路减轻凝聚态Aβ25-35诱导的神经元tau蛋白过度磷酸化.