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题名MFG-E8作为外泌体载体蛋白的作用与功能
被引量:1
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作者
黎智康
刘晨雪璇
谭楚敏
熊盛
谢秋玲
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机构
暨南大学生命科学技术学院
基因工程药物国家工程研究中心
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期288-294,共7页
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基金
广东省引进创新科研团队计划资助项目(2016ZT06S654)。
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文摘
构建MFG-E8全长和截短体的重组质粒,分析各截短体蛋白能否将目的蛋白带到外泌体上并确定其位置,以探讨MFG-E8各结构域功能及其作为外泌体上载体蛋白的效率。利用PCR扩增出带有信号肽的MFG-E8及其截短体基因,与EGFP基因连接,构建7种重组质粒。之后PEI介导瞬转HEK293F细胞进行表达,利用EGFP的荧光,通过Western blot和激光共聚焦显微镜检测蛋白表达情况及其在胞内的位置。同时提取转染细胞分泌的外泌体,通过Western blot和电镜检测重组蛋白在外泌体中的情况。最后将含有重组蛋白的外泌体转染293T细胞,荧光显微镜观察外泌体将重组蛋白带入受体细胞中的情况。结果表明,成功构建MFG-E8全长及截短体重组质粒并在HEK293F细胞中表达,各重组蛋白在胞内均有表达,其中EGF-L表达量最高,C2最低,细胞上清中只能检测到EGF-L、C1、EC1的表达。转染细胞分泌的外泌体只检测到MFG-E8、EC1和C1C2三种蛋白。含有这3种蛋白的外泌体转染HEK293T细胞,3组细胞均有荧光,其中MFG-E8-EGFP的外泌体效果最好。MFG-E8能够作为蛋白载体将目的蛋白带到外泌体膜上,其C1、C2结构域对该过程至关重要,EGF-L的存在可以促进蛋白表达。
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关键词
乳脂肪球表皮生长因子ⅷ(MFG-E8)
截短体
外泌体
载体蛋白
结构域功能
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Keywords
milk fat globule-epidermal growth factor ⅷ(MFG-E8)
truncated protein
exosome
carrier protein
function of domain
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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