一种鉴定多糖水解酶类及其产生菌的新方法

利用曲里苯蓝能与多糖形成复合物的原理，建立起一种简便、快捷、灵敏的筛选多糖水解酶类及其产生菌的平板鉴定方法。曲里苯蓝对供试微生物无毒害作用，不影响酶的活性，并可高温灭菌。其最适浓度在0．005％～0．01％（W／V）之间。可用于纤维素水解酶类、淀粉水解酶类、甘露聚糖酶、普鲁兰酶等多糖水解酶，与传统方法相比，该方法不仅有着同样高的灵敏度，而且能够提高筛选效率，避免污染问题，同时适合于多种多糖底物。但不能用于木聚糖酶和菊粉酶的检测。

一种鉴定α-淀粉酶活性及其产生菌的新方法

锥虫蓝法是利用锥虫蓝和淀粉交联生成蓝色复合物 ,淀粉经α 淀粉酶水解后蓝色褪去 ,出现透明水解圈这一原理来鉴定α 淀粉酶及其产生菌的。与碘淀粉法的不同之处在于 :本法对淀粉酶及其产生菌无任何不良影响。该交联复合物可以经加压灭菌处理 ;锥虫蓝的适宜使用浓度为 0 .0 0 5 %～ 0 .0 1% (W/V) ;培养基使用量为 15ml/皿左右 (φ80mm)。锥虫蓝法的灵敏度和使用范围与碘淀粉法相同 ,但以锥虫蓝和淀粉配制的鉴别培养基 ,在筛选淀粉酶基因时优于常规的碘淀粉法。

台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As_2O_3细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法，并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203，体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％，其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20，剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低，As20，的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时，用CCK-8法优于M11’法，均比台盼蓝法更为灵敏。

猫儿眼植物酸对人SGC-7901细胞增殖的影响及其机制探讨

目的探讨猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖影响及其机制。方法采用流式细胞仪、MTT法和台盼蓝染色法测定猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖的影响。结果分别给予猫儿眼植物酸10.0、1.0、0.1mg·L-1培养48h,MTT法测定结果显示,猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖的抑制率分别为82.9%、42.7%和24.6%;台盼蓝法计数结果显示,给予猫儿眼植物酸后,活细胞数随培养时间的延长而减少,到48h,对SGC7901细胞增殖抑制率分别为76.4%、56.9%、42.6%,凋亡率分别为26.8%,22.5%和15.6%。结论猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。

依文思蓝和曲利本蓝染料与CTAB的离子缔合物生成机理及水体中CTAB的光度法测定

在弱酸性NaH2PO4-Na2HPO4的缓冲介质中，十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）与依文思蓝（EB）、曲利本蓝（TB）染料反应，形成离子缔合物，溶液颜色褪色明显，最大褪色波长分别在610、602 nm，在此波长处，CTAB的浓度与褪色程度呈良好线性关系，由此建立测定十六烷基三甲基溴化铵的光度法。在最大褪色波长处，CTAB的浓度在0-3．36×10^-5mol／L（EB-CTAB体系）、0-3．91×10^-5mol／L（TB-CTAB体系）范围内遵守比尔定律，表观摩尔吸光系数分别为1．25×10^4L／（mol·cm）、8．61×10^3L／（mol·cm），检出限为7．4×10～mol／L、9．1×10^-7～mol／L。用于水样中CTAB的测定，结果满意。

猫儿眼植物酸抗肿瘤作用的实验研究

采用气-质联用仪、流式细胞仪、MTT法和台盼蓝法对猫儿眼植物酸组分及其抗肿瘤活性进行实验研究.结果为,分别给予SGC-7901细胞猫儿眼植物酸10.0μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL48h后测定,对肿瘤细胞的抑制率分别为73.5%、52.9%和26.5%,半数抑制浓度(IC50)为0.909μg/mL;对细胞增殖抑制率分别为70.8%、58.7%和30.9%,IC50为0.552μg/mL;凋亡率分别为26.8%、22.6%和12.4%.

几种脱毛剂对猪皮肤活力的影响

目的:比较几种脱毛剂对猪皮肤活力的影响.方法:通过台盼蓝染色法与MTT法检测三种脱毛剂处理后猪皮肤的活力,比较几种脱毛剂的优劣,以机械脱毛为阳性对照,剂量25kGY60Co照射为阴性对照.结果:使用脱毛剂1猪皮肤活力降低15%左右,使用脱毛剂2猪皮肤活力降低10%左右,使用脱毛剂3猪皮肤活力降低20%左右.结论:三种脱毛剂中,脱毛剂2对猪皮肤活力影响最小.

猫眼草提取物对人胃癌细胞BCG-823增殖影响的实验观察

目的观察猫眼草提取物对人胃癌细胞株BEG-823增殖的影响并探讨其可能的机制。方法人胃癌细胞株BEG，823分别给予猫眼草提取物10．0，1．0，0.1mg／L培养48h，采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫眼草提取物对胃癌细胞株增殖的影响。结果Mrrr法测定结果显示，猫眼草提取物各浓度组对BCG一823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系（P〈0．05）；台盼蓝法计数结果显示，给予猫眼草提取物后，活细胞数随培养时间的延长而减少，对胃癌细胞株BGC。823增殖的抑制具有良好的时效关系（P〈0．05）。结论猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖具有明显的抑制作用。其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。

曲利本蓝共振瑞利散射法测定苹果中钙

采用曲利本蓝共振瑞利散射法测定苹果中钙的含量。在pH 6.50的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中,曲利本蓝与钙(Ⅱ)及阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵反应生成一种三元离子缔合物,使体系的共振瑞利散射(RRS)信号显著增强,最大共振瑞利散射峰位于波长348nm处。优化的试验条件如下:(1) pH 6.50的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液的用量为2.00mL;(2)1.0×10^(-4) mol·L^(-1)曲利本蓝溶液的用量为2.50mL;(3) 4.00×102 mg·L^(-1)十六烷基三甲基溴化铵溶液的用量为0.40 mL;(4)反应时间为25 min。钙的质量浓度在0.007 0～0.080 0mg·L^(-1)内与体系的RRS增强程度(ΔIRRS)呈线性关系,检出限(3s/k)为0.001 3mg·L^(-1)。方法用于苹果样品的分析,加标回收率为98.3%～102%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.8%～2.3%。

一种筛选纤维素酶产生菌的改良方法

该文利用曲里苯蓝(Trypan blue)能与多糖形成复合物的原理,建立起一种简便、快捷筛选纤维素酶产生菌的改良方法。实验以羧甲基纤维素钠作为底物,配制0.02%曲里苯蓝培养基培养纤维素酶产生菌株,检测菌落周围形成的透明水解圈,水解圈的大小同酶活高低有一定指数关系。该方法与传统方法相比,不仅有着同样高的灵敏度,而且不影响菌株生长,可以应用于纤维素酶改良工程菌株的筛选。

实时无标记细胞分析系统与台盼蓝染色法分析双酚A对小鼠睾丸间质细胞毒性作用的比较

目的分析实时无标记细胞分析系统与台盼蓝染色法分析双酚A(BPA)对小鼠睾丸间质细胞毒性作用,以确定最佳实验方案。方法采用实时无标记细胞分析系统及台盼蓝染色法测定BPA对小鼠睾丸间质细胞的细胞毒性,计算其IC_(50)。结果实时无标记细胞分析法及台盼蓝染色法结果表明,不同浓度BPA使小鼠睾丸间质细胞的活力下降,1 000μmol/L时下降最为明显,IC_(50)分别为704、745μmol/L。但实时无标记系统能够实时监测细胞生长的动态生物学反应。结论实时无标记分析法能够更直观、准确地观察细胞生长情况,弥补台盼蓝染色法的缺点,是一种新的研究细胞毒性的实验方法。

4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果

目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm存在重叠,最大重叠峰在550～570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。

细胞毒性试验中两种细胞计数方法的比较

目的比较Countstar自动细胞计数仪法和传统显微镜计数法两种计数方法在细胞毒性试验中细胞计数的差异。方法选用常见的两种类型的药品稀释液,稀释液为真溶液的注射用左旋泮托拉唑钠和稀释液为混悬液的毛蚶提取物,设立不同剂量组,细胞染毒6 h后制备细胞悬液,台盼蓝染色,分别用显微镜和Countstar自动细胞计数仪计数,对结果进行比较分析。结果 Countstar自动细胞计数仪法和显微镜计数法两种计数方法相关性良好,细胞计数结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Countstar自动细胞计数仪法是相对简单、快捷、准确的细胞计数方法。

猫眼草提取物对胃癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的研究猫眼草提取物对不同胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823增殖的影响并探讨其可能的机制。方法不同胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823分别给予猫眼草提取物10．0、5．0、1.0、0．1mg／L培养48h，采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫跟草提取物对不同胃癌细胞株增殖的影响。结果MTT法测定结果显示，猫眼草提取物各浓度组对AGS、SGC-7901、BCG-823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系（P〈0．05）；台盼蓝法计数结果显示，给予猫眼草提取物后，活细胞数随培养时间的延长而减少，对胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823增殖的抑制具有良好的时效关系（P〈0．05）。结论猫眼草提取物对胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823增殖均具有明显的抑制作用，其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。