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农杆菌介导抗虫CpTI基因的花生遗传转化及转基因植株的再生 被引量:23
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作者 徐平丽 单雷 +4 位作者 柳展基 王芳 张斌 毕玉平 张传坤 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期5-8,共4页
通过农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导途径,将抗虫CpTI基因转入花生,经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明,外源CpTI基因已整合到大部分再生花生植株的基因组中。通过抗虫性检测试验,转基因... 通过农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导途径,将抗虫CpTI基因转入花生,经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明,外源CpTI基因已整合到大部分再生花生植株的基因组中。通过抗虫性检测试验,转基因花生具有一定的抗虫性。 展开更多
关键词 花生 遗传转化 农杆菌介导 抗虫CpTI基因 转基因植株 植株再生 抗虫性 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因抗虫甘蓝植株的获得 被引量:26
2
作者 方宏筠 李大力 +3 位作者 王关林 李英慧 朱祯 李向辉 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1997年第10期940-945,共6页
利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再... 利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再生植株中得到有效表达。对转化植株进行Southern blot分子杂交实验进一步证明CpTI基因已整合到甘蓝的基因组。实验室内的叶片离体饲虫及盆栽饲虫试验表明,转基因甘蓝对菜青虫具有一定抗性。实验中还观察到,采用愈伤组织分化途径可以获得较高的转化频率,但嵌合体较多;而直接分芽的途径转化率低,但嵌合体较少。 展开更多
关键词 豇豆 胰蛋白酶 抑制剂基因 转基因植株 抗虫
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豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)抗虫转基因新疆杨的获得 被引量:16
3
作者 诸葛强 王婕琛 +4 位作者 陈英 伍宁丰 黄敏仁 范云六 王明庥 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第4期491-496,共6页
利用根癌农杆菌介导法将广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入新疆杨 (Populusal bavar pyramidalis) ,经筛选获得了大量转基因植株。对转基因植株经PCR鉴定、PCR Southern和点杂交分子检测结果证实CpTI基因已整合进杨树基因... 利用根癌农杆菌介导法将广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入新疆杨 (Populusal bavar pyramidalis) ,经筛选获得了大量转基因植株。对转基因植株经PCR鉴定、PCR Southern和点杂交分子检测结果证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。部分转基因植株的饲虫实验表明 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 抗虫基因 新疆杨 转基因 根癌农杆菌 CPTI基因
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基因枪法转化水稻(Oryza sativaL.)获得可育的转抗虫基因水稻再生植株 被引量:16
4
作者 安韩冰 朱祯 +6 位作者 李慧芬 吴茜 周兆澜 徐鸿林 徐军望 安利佳 李向辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第2期12-16,11,共6页
应用基因枪 ( particlebombardment)转化技术成功地将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpeatrypsininhibitor,CpTI)基因分别导入三个水稻粳稻栽培品种 (OryzasativaL .,japonica)中花 8、中花 10和中作 32 1的幼胚和胚性愈伤组织中 ,并由此获得了... 应用基因枪 ( particlebombardment)转化技术成功地将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpeatrypsininhibitor,CpTI)基因分别导入三个水稻粳稻栽培品种 (OryzasativaL .,japonica)中花 8、中花 10和中作 32 1的幼胚和胚性愈伤组织中 ,并由此获得了可育的再生植株 ,抗性植株的筛选频率为 6.1%~ 12 .2 4 %。经PCR、Southernblot分子检测和ELISA检测等证实所获得的潮霉素抗性植株为转基因植株。抗虫性分析结果表明 ,部分转基因水稻植株对玉米螟虫 (Ostrinianubilalis) 展开更多
关键词 胰蛋白酶抑制剂 抗虫基因 转基因水稻 生物检测 基因枪法
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豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究 被引量:10
5
作者 赵强 赵志文 +2 位作者 张廷婷 崔德才 王斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期54-58,共5页
本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进... 本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。 展开更多
关键词 豇豆 胰蛋白酶抑制剂 CPTI 基因转化 欧美杨 转基因植株
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转CpTI基因毛白杨的获得 被引量:18
6
作者 郝贵霞 朱祯 朱之悌 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第z01期116-119,共4页
In this study,cowpea trypsin inhibitor (CpTI) gene, an insecticidal gene,was introduced into two Populus tomentosa clones by gene transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens. The transformed regeneration shoo... In this study,cowpea trypsin inhibitor (CpTI) gene, an insecticidal gene,was introduced into two Populus tomentosa clones by gene transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens. The transformed regeneration shoots were obtained directly by leaf discs.In order to established selection condition,leaf discs were cultured in the medium with increasing concentration kanamycin.Kanamycin resistant(km r)plantlets were obtained by 3~4 cycles screening in selective condition.Then transformed shoots were rooted in the medium containing kanamycin 50?mg/L and transferred to greenhouse.The presence of CpTI gene in transgenic plants were confirmed by PCR and PCR\|Southern blot. 展开更多
关键词 毛白杨 根农杆菌介导法 转基因植株 CPTI基因
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SKTI)研究进展 被引量:8
7
作者 赵洪锟 李启云 +1 位作者 王玉民 庄炳昌 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期218-222,共5页
大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种... 大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 (SKTI)是一种典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,主要集中在大豆的子叶中。近 60年来 ,对其生化特性及结构已有较多研究 ,通常认为这种蛋白酶抑制剂具有贮藏、调节内源蛋白酶活性及植物防御等作用。研究表明 ,这种蛋白酶抑制剂抗虫谱广 ,能显著抑制幼虫的生长发育不易产生抗性 ,对人畜无害 ,因此对其进行研究及开发利用具有重要的经济和社会效益。迄今为止 ,至少已有 4种基因被克隆 ,通过转基因技术在烟草、水稻、小麦等作物获得了抗性植株 .本文从SKTI的类型、基因克隆及生理功能等方面作一简单综述。 展开更多
关键词 类型 基因克隆 生理功能 分布频率 大豆 Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 SKTI
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外源基因在不结球白菜转基因植株后代中的表达 被引量:8
8
作者 佘建明 蔡小宁 +5 位作者 朱卫民 张初贤 朱祯 袁希汉 苏小俊 李彬 《江苏农业学报》 CSCD 2002年第1期33-36,共4页
应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因和新霉素磷酸转移酶基因的重组质粒导入不结球白菜地方品种———“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”中 ,获得抗虫转基因植株。卡那霉素抗性和抗虫性在转基因植株自交后代T1代植株中发生分离 ;在... 应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因和新霉素磷酸转移酶基因的重组质粒导入不结球白菜地方品种———“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”中 ,获得抗虫转基因植株。卡那霉素抗性和抗虫性在转基因植株自交后代T1代植株中发生分离 ;在T2 代中出现 3种不同类型的株系 :抗性纯合、杂合型和敏感性纯合株系。卡那霉素抗性和抗虫性在转基因植株自交后代中的表现基本符合孟德尔显性单基因的分离规律。从T2 、T3 、T4代中选择出抗虫性纯合株系 ,并获得一批对 1~ 2龄鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫的校正死亡率达 6 0 展开更多
关键词 不结球白菜 转基因植株 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 新霉素磷酸转移酶基因 抗虫性
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豇豆胰蛋白酶抑制剂cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达 被引量:38
9
作者 刘春明 朱祯 +2 位作者 周兆斓 孙宝林 李向辉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期152-157,共6页
从即将成熟的豇豆子叶中分离出总RNA,逆转录合成cDNA第一条链。参照已知的几种Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列,设计并合成了两段寡核苷酸引物,以单链cDNA为模板,进行PCR扩增,得到320bp的均一扩增产物,克隆到pBluescrip SK(+)的Ec... 从即将成熟的豇豆子叶中分离出总RNA,逆转录合成cDNA第一条链。参照已知的几种Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列,设计并合成了两段寡核苷酸引物,以单链cDNA为模板,进行PCR扩增,得到320bp的均一扩增产物,克隆到pBluescrip SK(+)的EcoRV位点上并转化大肠杆菌JM101。酶切图谱及DNA序列分析表明克隆到的片段含有编码完整80个aa的豇豆胰蛋白酶抑制剂结构基因和一段编码27aa的前导序列。利用限制酶NcoI对其前导序列进行缺失,只保留成熟蛋白结构基因上游第一个ATG密码子并克隆到大肠杆菌表达载体pKK233-2中进行表达研究,从转化细菌的提取物中检测到了外源CpTI基因表达产物对胰蛋白酶的抑制活力。 展开更多
关键词 豇豆 胰蛋白酶 抑制剂
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜及抗虫鉴定 被引量:6
10
作者 杨朝辉 宋洪元 何凤田 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期731-735,共5页
用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进... 用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进行了喂虫试验 ,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 转化 芥菜 抗虫鉴定 农杆菌介导
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豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因在转基因水稻中的表达特性研究 被引量:10
11
作者 柳武革 薛庆中 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第2期187-192,共6页
以豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)转基因水稻自交品系和其衍生的花培品系为实验材料 ,通过PCR扩增和CpTI表达蛋白活性的测定 ,研究了CpTI基因的遗传稳定性和表达特性。结果表明CpTI基因在转基因自交后代可以稳定遗传 ,而在部分花培品系中发... 以豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)转基因水稻自交品系和其衍生的花培品系为实验材料 ,通过PCR扩增和CpTI表达蛋白活性的测定 ,研究了CpTI基因的遗传稳定性和表达特性。结果表明CpTI基因在转基因自交后代可以稳定遗传 ,而在部分花培品系中发生丢失。同时CpTI基因的表达表现出一定的时空特性 ,同一转基因品系中叶片CpTI蛋白的表达活性通常高于茎杆 ,而不同发育时期的CpTI蛋白的表达活性以分蘖期最高。除花培品系DH4 0 1外 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 CPTI基因 水稻 转基因植株 基因表达
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新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达 被引量:5
12
作者 梁文星 范在丰 +3 位作者 李永 宋丽敏 李怀方 田国忠 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2006年第4期446-451,共6页
杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘C... 杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。 展开更多
关键词 蛋白酶抑制剂基因 新疆杨 损伤诱导
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抗虫转CpTI基因植物定性PCR检测技术的建立 被引量:4
13
作者 朱珠 王永 +4 位作者 兰青阔 赵新 余景会 郭永泽 程奕 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期56-60,共5页
为建立CpTI基因定性PCR检测方法,通过数据库查询和测序获得CpTI基因序列,设计特异性定性PCR引物,对引物、PCR反应条件和反应体系进行优化,并对检测方法的特异性、灵敏度等进行分析试验。结果表明,CpTI基因特异性定性PCR检测方法选择退... 为建立CpTI基因定性PCR检测方法,通过数据库查询和测序获得CpTI基因序列,设计特异性定性PCR引物,对引物、PCR反应条件和反应体系进行优化,并对检测方法的特异性、灵敏度等进行分析试验。结果表明,CpTI基因特异性定性PCR检测方法选择退火温度为58℃,引物浓度为0.4μmol/L较好,该方法能够特异性检测样品中CpTI基因,检测灵敏度达0.05%(质量比)。该方法符合农业转基因生物产品成分检测标准对特异性、灵敏度、重复性的要求,可为抗虫转CpTI基因植物生物安全管理提供技术支撑。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 基因特异性检测 定性PCR
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农杆菌介导抗储粮害虫转基因小麦(Triticum aestivum L.)的获得及分析 被引量:10
14
作者 毕瑞明 贾海燕 +1 位作者 封德顺 王洪刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期431-437,共7页
以本实验室选育的小麦优良品系的胚性愈伤组织为材料,采用农杆菌介导将抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI转入小麦培养细胞,经筛选获得抗卡那霉素的愈伤组织并再生植株。经PCR和实时PCR检测、PCR-Southern和Southernblot验证,确定了3... 以本实验室选育的小麦优良品系的胚性愈伤组织为材料,采用农杆菌介导将抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI转入小麦培养细胞,经筛选获得抗卡那霉素的愈伤组织并再生植株。经PCR和实时PCR检测、PCR-Southern和Southernblot验证,确定了3株独立再生植株为含有CpTI的转基因植株。农杆菌菌浓度、侵染时间及转化处理方式对小麦转化率均有明显影响。3株转基因植株正常可育并结籽,形成转基因株系。外源基因在转基因植株T1代中的分离呈多样性,部分株系(转基因株系T-Ⅰ、T-Ⅲ)表现出孟德尔遗传规律。抗虫试验表明,3株转基因植株T2代籽粒对储粮害虫麦蛾具有一定的抗性,转基因株系T-Ⅰ、T-Ⅱ、T-Ⅲ及非转基因植株的T2代籽粒虫蛀率分别为19·8%、21·9%、32·9%和58·3%。转基因植株T1代群体农艺性状调查显示,3个株系具有良好的农艺性状,为小麦的遗传改良提供了新的种质抗虫材料。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 CpTI基因 储粮害虫 转基因小麦
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胰蛋白酶抑制剂的研究进展 被引量:3
15
作者 谭竹钧 沈明才 +1 位作者 张峰 胡华平 《广东工业大学学报》 CAS 2007年第3期6-10,共5页
胰蛋白酶抑制剂是对胰蛋白酶具有抑制作用的一类物质.综述了近几年来,用不同原料制备胰蛋白酶抑制剂的研究进展及临床应用.
关键词 胰蛋白酶抑制剂 基因工程 治疗疾病
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大豆脂肪氧化酶及Kunitz胰蛋白酶抑制剂缺失种质的创新 被引量:12
16
作者 韩粉霞 丁安林 +1 位作者 孙君明 李桂英 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期417-423,共7页
脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制剂是大豆蛋白中 2种重要的抗营养因子。以黄淮海主栽品种鲁豆 4号、中品661、豫豆 8号、91D15、潍 8640作母本,美国引进缺失Kunitz胰蛋白酶抑制剂品种P.I.L83 4387和优良品种Century缺失脂肪氧化酶的近等位基因... 脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制剂是大豆蛋白中 2种重要的抗营养因子。以黄淮海主栽品种鲁豆 4号、中品661、豫豆 8号、91D15、潍 8640作母本,美国引进缺失Kunitz胰蛋白酶抑制剂品种P.I.L83 4387和优良品种Century缺失脂肪氧化酶的近等位基因系Century 2、Century 2. 3和Century 1. 3作父本进行有性杂交,利用大豆脂肪氧化酶缺失基因及胰蛋白酶抑制剂缺失基因的生化标记对杂种后代进行多年辅助选择,培育脂肪氧化酶缺失基因 (lx1、lx2、lx3 )、胰蛋白酶抑制剂缺失基因(ti)等优质多基因聚合的大豆新种质,为我国大豆品质育种、生产及加工利用提供优异种质材料。 展开更多
关键词 大豆新种质 脂肪氧化酶 胰蛋白酶抑制剂 生化标记 多基因聚合
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究 被引量:4
17
作者 吕玲玲 雷建军 +3 位作者 宋明 曹必好 陈国菊 曾国平 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期78-82,共5页
通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对... 通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对所获得的转基因植株进行PCR扩增,结果显示大多数为阳;PCR-Southern及Southern分子检测分析,结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中.转基因植株叶片的离体饲虫初步试验结果表明,对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用. 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 基因转化 花椰菜 农杆菌介导
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转CpTI基因不结球白菜的抗虫性表现 被引量:4
18
作者 佘建明 何晓兰 +3 位作者 蔡小宁 苏小俊 袁希汉 李彬 《江苏农业学报》 CSCD 2004年第4期230-232,共3页
通过卡那霉素筛选、目的基因分子检测和生物学抗虫性鉴定 ,从转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因不结球白菜遗传工程植株自交后代中选育出抗虫性可遗传的纯合材料。用室内人工饲喂方法 ,以鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫为靶害虫 ,对转基因植株进行... 通过卡那霉素筛选、目的基因分子检测和生物学抗虫性鉴定 ,从转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因不结球白菜遗传工程植株自交后代中选育出抗虫性可遗传的纯合材料。用室内人工饲喂方法 ,以鳞翅目小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫为靶害虫 ,对转基因植株进行抗虫性鉴定。试验结果显示 ,转CpTI基因纯合材料对 1~ 2龄小菜蛾和斜纹夜蛾幼虫具有抗性 。 展开更多
关键词 CPTI基因 不结球白菜 转基因植株 抗虫性 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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甜荞胰蛋白酶抑制剂cDNA片段的克隆及序列特征 被引量:3
19
作者 张政 李玉英 +1 位作者 史晓儒 王转花 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期46-51,共6页
采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂 buckwheattrypsinin-hibitor,BTI ,经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-R... 采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等方法从甜荞中纯化出荞麦胰蛋白酶抑制剂 buckwheattrypsinin-hibitor,BTI ,经活性鉴定该抑制剂属丝氨酸类蛋白酶抑制剂家族.为了获得BTI的基因序列,并弄清其在体内的表达调控机制,应用RT-PCR和3′-RACE等方法,直接体外扩增该抑制剂基因,首次获得总长为361bp的DNA片段 GenBank登录号为AY335158 ,并命名为BTI-W1.该片段包括一个183bp的开放阅读框,编码61个氨基酸.由该基因推导的氨基酸序列与已报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂BTI-2的氨基酸序列的同源性达100%.BTI-W1基因的获得,对于深入开展荞麦胰蛋白酶抑制剂结构与功能关系的研究具有重要意义,也为荞麦植物资源的开发利用建立了前期研究基础. 展开更多
关键词 养麦 胰蛋白酶抑制剂 RT-PCR 基因克隆 DNA序列分析
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重组质粒BT24的构建 被引量:1
20
作者 熊兴华 刘春林 +2 位作者 吴小月 张家明 郑学勤 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1998年第3期199-202,共4页
用BamHⅠ从植物表达载体pBH19中,酶切回收含35S启动子与Nos终止子的胰蛋白酶抑制因子基因(HRTI)片段,将其克隆到植物表达载体pTHY48的BamHⅠ位点,构建具潮霉素选择标记的植物表达载体pBT24.经... 用BamHⅠ从植物表达载体pBH19中,酶切回收含35S启动子与Nos终止子的胰蛋白酶抑制因子基因(HRTI)片段,将其克隆到植物表达载体pTHY48的BamHⅠ位点,构建具潮霉素选择标记的植物表达载体pBT24.经Agarosegel检测和酶切鉴定,获得具有胰蛋白酶抑制因子基因和潮霉素抗性基因的植物表达载体pBT24. 展开更多
关键词 重组质粒BT24 植物表达载体 载体构建 抗性基因
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