青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)染色体G类带型研究

以青岛文昌鱼的晚期囊胚和早期原肠胚的胚胎细胞为实验材料,利用低渗处理、空气干燥法制备染色体玻片标本。在此基础上,为进一步探索显示青岛文昌鱼染色体G带的新方法,采用片龄、蛋白酶K和胰蛋白酶显带技术对青岛文昌鱼的染色体进行了初步研究,显示了青岛文昌鱼染色体的G类带型,绘制了青岛文昌鱼染色体的G类带型模式图,并对三种G类带型作了比较,进而提出了文昌鱼染色体的G带带型与片龄的相互关系。

青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheritsingtauense)染色体荧光原位杂交条件研究

采用青岛文昌鱼18SrDNA序列为探针进行荧光原位杂交,根据囊胚晚期细胞上的核杂交信号多少及特异性确立青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的最佳反应条件。结果表明适合于青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的条件为:预处理采用5ng/μl的胃蛋白酶处理3—5min和10ng/μlRNA酶处理1h;100—300倍探针浓度的鲑鱼精DNA进行封闭;50%甲酰胺/2×SSC,1×SSC,2×SSC,42℃的洗脱强度;3%BSA进行抗体封闭;杂交时间可以控制在12—18h;杂交温度保持37℃;PI(1.5μg/ml)的量每片20μl以内。

青岛文昌鱼体征变化及影响因素探究

根据1981年和2004年胶州湾口青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense Tchang et Koo)采集资料,分析了23年来青岛文昌鱼体质量、体长、生物量和栖息密度的变化,发现1981年文昌鱼个体最大体长为55 mm,平均体长为37.63 mm,而2004年个体最大体长仅42 mm,平均体长只有29.82 mm;1981年各月平均体质量范围为0.06～0.14 g,2004年为0.03～0.04 g;1981年平均栖息密度为753个/m2,2004年为1 220个/m2。采用成对数据平均数比较的假设双尾检验法进行数据统计分析结果也表明,文昌鱼的平均体长和体质量在1981年和2004年均有显著的差异,平均分布密度在显著水平a为0.01时,差异不显著,而在a为0.05时,差异显著;说明2004年采集的青岛文昌鱼个体长度和质量都明显变小而分布密度有所增加;而平均生物量,1981年和2004年没有显著性差异。不同体长个体数比例表明,1981年和2004年文昌鱼种群的年龄组成以及各年龄组的生长情况等方面也不相同。引起这些变化的原因初步分析为底质的改变、栖息地萎缩、饵料丰度和组成改变以及人类活动的干扰。

青岛百合复合种群遗传多样性的RAPD分析

对青岛百合（Lilium tsingtauense Gilg）复合种群6个局部种群的遗传多样性进行了RAPD分析.通过11个引物扩增到117个显性位点,其中多态性位点平均为62.86％,各百合群体多态性位点多少顺序为Y5、Y1、Y4、Y6、Y2、Y3.把RAPD多样性指标与样地的基本状况进行相关分析,发现海拔高度、样地坡度和植被类型与各个多样性指标呈正相关,样地坡向与各个多样性指标呈负相关.Nei＇s基因多样度指数（h）和Shannon信息指数（I）的统计结果表明,种群内h和I的平均值分别为0.203 4和0.309 0,这两个指数均为Y5最高,其次为Y1,Y3最低.不同位点在种群间的分化程度差别很大,基因分化度的波动范围为0.016 5～0.942 7,平均为0.378 3.种群间平均基因流为0.821 6,说明有遗传漂变的存在.6个百合种群间遗传一致度与遗传距离的无偏估计表明,最小的遗传距离在Y4和Y6之间,最大的遗传距离在Y3和Y5之间,遗传一致度则相反.种群聚类分析表明,Y1和Y2比较近;Y4和Y6比较近又和Y5联系在一起.Y3比较特殊,单独为一类.

秋水仙素诱导青岛百合四倍体研究

以青岛百合试管苗为试验材料,采用浸泡法和混培法研究了秋水仙素对青岛百合进行染色体加倍的诱导效果。结果表明:以0.05%的秋水仙素浸泡处理24h的诱导效果最佳,诱导频率高达53.3%;经秋水仙素诱导的多倍体与正常二倍体植株比较,植株叶片变大,根系粗壮,气孔显著增大而单位面积气孔数减少。对变异材料的细胞学研究发现,四倍体植株的染色体数目为2n=4x=48。

青岛文昌鱼的生活史──年龄、生长和死亡研究

于1989年8月-1990年7月对青岛文昌鱼的生活史进行研究。结果表明：（1）青岛文昌鱼种群由4个年龄组组成，它至少生活4a以上，甚至可达6a左右。（2）在Ⅰ，Ⅱ龄时生长较快，平均年生长13－15mm，Ⅲ龄后生长速度减慢，即使同一年龄组的文昌鱼，在不同季节其生长速度也不同。（3）在冬春采集的文昌鱼中Ⅲ龄组的峰值较小。（4）繁殖季节过后，老龄文昌鱼因衰老而死亡。

青岛文昌鱼的实验室培育──饵料和沙对幼虫成活的影响

于1991年6月-1992年12月对青岛文昌鱼进行室内培育研究。结果表明：1．沙是青岛文昌鱼幼虫生长发育必需的，但在实验室条件下，细沙比全沙和粗沙更有利于其生存。2．就单胞藻而言，等鞭金藻是青岛文昌鱼幼虫生长和变态较理想的饵料。

雌雄文昌鱼同工酶的表型差异

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合生化染色方法分析了雌雄文昌鱼中苹果酸酶、苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶和酯酶四种同工酶的酶谱。首次发现苹果酸酶、苹果酸脱氢酶和酸性磷酸酶表型在文昌鱼雌性和雄性个体之间存在差异 ,而在同一性别不同个体之间无差异。酯酶表型较复杂 。

珍稀濒危植物青岛老鹳草扦插繁殖研究

对珍稀濒危植物青岛老鹳草扦插繁殖技术进行研究。结果表明:基质、激素及其浓度、浸蘸时间对青岛老鹳草叶插、茎插生根效果有显著影响;叶插最优组合为:珍珠岩作基质,在IBA 100mg/L中浸蘸5s;茎插最优组合为:基质为草炭:素沙(1:1),在国光生根粉200mg/L中浸蘸15s。

青岛百合组织培养研究

以青岛百合叶片为外植体,研究了消毒时间、培养基、生长调节物质对青岛百合叶片不定芽发生、增殖和生根的影响。结果表明:用0.1%氯化汞对青岛百合叶片消毒5min时效果最好,污染率为31%,萌动率为79%,诱导率为65.2%。青岛百合最佳叶片不定芽分化培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L;最佳不定芽增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;最佳生根的培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L,形成了较为完善的组织培养再生体系。

青岛百合生境特点和分布现状研究

青岛百合(Lilium tsingtauense Gilg)是中国百合科植物的特有种,这一物种作为小种群的代表具有一定的普遍意义。根据已有文献资料和野外调查结果,分析了青岛百合的生境特点和分布现状。结果显示,目前青岛百合的集中分布地位于崂山北九水以南海拔400～1000m的区域内,一般生长于阴坡或半阴坡的森林中,具有充足的水分和光照等条件。在这一区域可见到成片呈斑块状分布的种群,斑块之间的距离依地形、地貌及人类活动的强度不同而远近不一。斑块大小各异,以离散斑块形式存在,生境斑块间的连通性较好,推测这一种群是较为典型的植物复合种群的代表。

濒危植物青岛老鹳草种子的硬实与萌发特性

以山东省特有植物青岛老鹳草种子为试验材料,采用不同处理方式进行萌发特性研究。结果表明,青岛老鹳草种子千粒质量为6.759 g,含水量为16.9%,硬实率达95.6%,未经处理的青岛老鹳草种子吸水率明显低于浓H2SO4处理5 min种子的吸水率。青岛老鹳草硬实种子采用浓H2SO4处理,以9 min为宜,发芽率为79.67%;60℃水恒温处理,发芽率达到72.67%;最适萌发温度为20~25℃。

青岛百合有性杂交试验

以青岛百合为亲本,与其他几种百合种(或品种)正反杂交,并测定了各亲本花粉活力。结果表明,各亲本花粉活力差异显著,TTC染色法及萌发法测定结果符合度较高。青岛百合×有斑百合、青岛百合×精粹、精粹×青岛百合3个杂交组合结实率较高,分别达到40%、30%和27%。

青岛文昌鱼LIM类同源框基因反义寡核苷酸对其胚胎发育的影响

研究了青岛文昌鱼LIM类同源框基因Bblim反义寡核苷酸对文昌鱼胚胎发育的影响。根据已克隆的Bblim基因序列 ,设计并合成了对应于该基因同源框区的两条反义寡核苷酸链 ,用电脉冲方法将其导入文昌鱼受精卵。结果表明 :反义寡核苷酸与随机序列寡核苷酸都不影响胚胎细胞分裂 ,而反义寡核苷酸能抑制胚胎细胞Bblim基因的表达。还发现只存在于导入反义寡核苷酸的幼体中的两种畸形———一是在幼体的腹侧近咽部有一圆形突起的结构 ;另一是在幼体色素与尾鳍之间约二分之一处的腹侧有一距状突起。这两种畸形均发生于文昌鱼幼体腹侧的近体表部位 。

珍稀濒危植物青岛老鹳草形态解剖学研究

[目的]为了解青岛老鹳草濒危的原因,为其资源利用、引种驯化和新品种培育等提供理论依据。[方法]分别以青岛老鹳草的根尖、茎段、叶片、叶柄为材料,采用常规石蜡法制片,对其进行形态解剖学观察。[结果]青岛老鹳草根的初生结构由表皮、皮层和中柱组成,初生木质部为二原型;次生结构由周皮、薄壁组织和次生维管组织构成,薄壁细胞中含有大量淀粉粒;茎呈类方形,由表皮、皮层和维管柱组成,为外韧维管束;叶为典型异面叶,表皮具有大量表皮毛,叶及叶柄均具厚角组织。根茎叶细胞中均含有大量簇晶。[结论]青岛老鹳草营养器官具有一般多年生草本双子叶植物的结构特点,在形态结构方面未体现出濒危的特点。

青岛百合扦插繁殖技术的研究

以野生的青岛百合鳞茎为扦插材料,将鳞茎分为内中外三层剥取其鳞片,观察鳞片在不同温度、不同基质中扦插的效果。结果表明:影响扦插效果的重要因子是温度和基质,在温度为25℃,珍珠岩基质中,内层鳞片扦插效果最好。

青岛老鹳草花粉和花芽扫描电镜制样条件探讨

为了探究与老鹳草相关类型花粉花芽的样品电镜制备,采用直接观察法和戊二醛固定冷冻干燥法对青岛老鹳草花粉扫描电镜制样条件进行了研究。结果表明:直接观察法制备的青岛老鹳草花粉颗粒在扫描电镜下形态饱满,结构清晰,花粉表面的纹饰和突起微观结构清晰完整;改进的FAA单固定冷冻干燥法处理的青岛老鹳草花芽形态学结构完整,层次丰富,立体感强,细胞失水皱缩得到明显改善。通过对不同制样方法进行比较,最终得到可靠简单易行的样品制备方法,对牻牛儿苗科植物的研究及相关类型花粉花芽的样品制备有重要的指导意义。

文昌鱼胚胎整装荧光原位杂交技术的建立

文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)是进化发育生物学研究的重要模式生物,文昌鱼胚胎整装荧光原位杂交(WFISH,whole-mounted fluorescent in situ hybridization)技术将有助于鉴定文昌鱼胚胎发育过程中具有重要调控作用的功能基因。报告了文昌鱼胚胎整装荧光原位杂交技术,用以快速灵敏分析特定基因在文昌鱼胚胎发育过程中的时空表达图式。用体外转录合成的地高辛标记文昌鱼FGFR基因的反义RNA探针,检测到FGFR在文昌鱼原肠胚中表达于发生内陷的中内胚层细胞中,而预定发育为外胚层的细胞不表达FGFR。

文昌鱼鳃骨条的透射电镜观察

应用透射电子显微镜观察了文昌鱼 (BranchiostomabelcheritsingtauenseTchangetKoo)鳃骨条的结构。发现其鳃条骨条横切面的外部 ,有时可见两个相连的细胞密集区 ,细胞排列紧密 ,核质比大。除此之外的基质区 ,由平均直径 2 8 3nm的粗纤维构成。在该区域的外围 ,粗纤维与边缘平行排列成薄层。在内部 ,粗纤维交错排列。而鳃条骨条横切面内部及整个舌条骨条则是由平均直径分别为 13 8nm和 13 9nm的细纤维构成的。细纤维排列规则 ,与鳃骨条的长轴平行。且彼此间由横向的细丝状交联连接成为直角的方格结构。两种纤维在形态上与胶原纤维不同。显示文昌鱼的鳃骨条是一种特殊的、非胶原为基质的支持组织。这使得继无颌类七鳃鳗和盲鳗中已发现的至少 4种非胶原为基质的软骨家族又增添了新的成员 ,且文昌鱼鳃骨条与七鳃鳗和盲鳗的非胶原为基质的软骨结构都不相同 ,提示文昌鱼与无颌类可能有着长期独立的进化历史。

青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。