类蛋白Tubby基因家族研究进展

综述了TLP基因家族的研究进展,结果发现有多个TLP基因参与植物对多种生物胁迫和非生物胁迫的应答,这些TLP基因可以作为植物抗逆育种的候选基因,应用于植物抗逆遗传育种工作中。

兔抗小鼠Tubby样蛋白2(TULP2)多克隆抗体的制备与应用

目的制备兔抗小鼠Tubby(Tub)样蛋白2(TULP2)多克隆抗体并检测TULP2蛋白在小鼠睾丸中的表达情况。方法分别将TULP2蛋白编码序列全长和TULP2蛋白含Tub结构域的羧基端(TULP2-C)插入pET-30a(+)质粒中,构建pET-30a(+)-TULP2和pET-30a(+)-TULP2-C原核表达重组质粒。将两种质粒分别转化入大肠杆菌E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核蛋白表达。利用组氨酸(His)融合蛋白纯化柱纯化TULP2和TULP2-C原核蛋白,用梯度浓度的尿素复性。分别以复性后的TULP2和TULP2-C原核蛋白为抗原免疫成年雄性新西兰大白兔,获得两种类型的TULP2多克隆抗体。应用ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法及免疫荧光技术确定自制多克隆抗体的有效性及特异性。结果成功构建了pET-30a(+)-TULP2以及pET-30a(+)-TULP2-C重组质粒,并且通过IPTG诱导,表达出TULP2和TULP2-C原核重组蛋白。ELISA检测两种抗体滴度均达到1∶1000000。Western blot法、免疫荧光染色结果显示,利用TULP2-C原核蛋白为免疫原制备的抗体特异性较差。而利用TULP2全长蛋白为免疫原制备的多克隆抗体可以特异识别成年野生型小鼠睾丸中内源性的TULP2蛋白,而且可用于免疫荧光组织化学染色,结果显示TULP2在成年野生型小鼠的圆形精子细胞及其后变形期的精子细胞中表达。结论应用TULP2全长蛋白为抗原可成功制备兔抗小鼠TULP2多克隆抗体,可同时用于Western blot法及免疫荧光组织化学染色。

水稻类Tubby蛋白质在叶片生长和白叶枯病抗性反应中的表达

类Tubby蛋白质(Tubby-like protein,TLP)在动植物中广泛存在,暗示其在生命过程中发挥重要的作用。水稻(Oryza sativa)基因组中有14个TLP家族成员,首先制备了这些蛋白质的抗体,用免疫印迹方法检测了它们在水稻叶片不同生长时期的表达情况,揭示其表达模式;然后对Xa21介导的水稻白叶枯病抗性反应不同时间点进行检测,发现OsTLP2、OsTLP7、OsTLP8和OsTLP9等4个蛋白质的表达发生了变化;进一步比较它们在抗病、感病反应和对照处理中的表达情况,发现不同反应间的表达也有区别。该研究结果为阐释水稻TLP在叶片生长过程中的功能,尤其是在水稻-白叶枯病菌互作过程中的作用提供了重要线索。