结核菌素纯蛋白衍生物刺激人γδT细胞效应分析

目的探讨结核菌素纯蛋白衍生物(pure protein derivative,PPD)对人外周血γδT细胞的刺激效应。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)后,经尼龙毛柱法分离得T细胞。分别以卡介苗和PPD刺激γδT细胞,流式细胞仪分选纯化γδT细胞,并检测其抗原提呈细胞表型。按照T细胞培养基成分将实验分为4组(n=20):①空白组:结核分枝杆菌分泌性抗原(Mtb-Sag)25μg/ml+CFSE标记的T淋巴细胞;②卡介苗(BCG)组:BCG刺激γδT细胞+Mtb-Sag 25μg/ml+CFSE标记T淋巴细胞;③PPD组:PPD刺激γδT细胞+Mtb-Sag 25μg/ml+CFSE标记T淋巴细胞;④树突状细胞(dendritic cell,DC)组:成熟DC+Mtb-Sag 25μg/ml+CFSE标记T淋巴细胞。9 d后检测T细胞及CD4+T细胞的增殖情况。结果与静止期相比,PPD可刺激γδT细胞CD80、CD86和HLA-DR表达水平升高至(39.07±1.26)%、(51.93±1.85)%和(45.74±1.58)%(P<0.05),与BCG刺激效应相似[(42.12±1.72)%,(54.67±2.01)%,(49.79±1.61)%,P>0.05]。PPD组T细胞总数(5.14±0.68)×106和CD4+T细胞所占比例(35.01%)较空白组显著升高(P<0.05),与BCG组[(4.6±0.77)×106,32.00%)]相似,显著低于成熟DC细胞组[(7.50±0.35)×106,58.94%](P<0.05)。结论 PPD可激活γδT细胞CD80、CD86和HLA-DR表达,提示PPD可能具有激活人外周γδT细胞功能。