半夏游离块茎诱导及其遗传稳定性SSR鉴定

为探究半夏疏松愈伤组织继代条件,建立半夏游离块茎悬浮培养体系,并验证其组织培养过程中是否发生体细胞无性系变异,以半夏叶柄为外植体,研究不同浓度的蔗糖与激素配比对其疏松愈伤组织增殖的影响,设计单因素试验和正交试验筛选诱导其游离块茎的适宜条件,通过SSR分子标记技术,检测游离块茎的遗传稳定性。结果表明,半夏疏松愈伤组织形成的适宜继代培养基为MS+2,4-D 2.0 mg·L^(-1)+6-BA 0.5 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1)+0.6%琼脂,以此继代可获得大量用于建立悬浮体系的半夏疏松愈伤组织;适于疏松愈伤组织分化形成游离块茎的培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L^(-1)+IBA 0.5 mg·L^(-1)+蔗糖20 g·L^(-1),以此培养可获得大量用于人工种子制作或直接播种的半夏游离块茎;通过SSR标记,发现组织培养诱导形成的半夏游离块茎在DNA水平上未发生变异,仍保持其亲本的遗传稳定性。

三叶半夏丛生块茎途径扩繁及块茎分离技术研究

三叶半夏为传统常用中药材,有超过1 000 a的药用史。自然状态下繁殖效率较低,野生资源不足,因此人工繁殖半夏以满足社会需求就显得尤为重要。为解决以上问题,结合半夏块茎生长特点及传统组织培养操作获得了半夏的"丛生块茎途径",并考查了增殖条件、继代次数、变异情况、诱导分离基质等特性,结果表明:以Ms+6-BA1.0 mg/L+NAA0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L进行继代培养,前22代半夏丛生芽保持约15倍的增殖倍数,可作为扩繁的材料,同时需及时剔除变异组培苗,得到的丛生块茎种植于细沙或蛭石中,60 d后断水促使倒苗,筛除基质后即可得到大量栽培用单颗半夏块茎。

半夏总蛋白提取及其动态变化研究

目的优选出半夏总蛋白提取的最适方法并研究不同生长时期总蛋白量及成分的变化,为半夏药用成分的监控及合理采收提供科学依据。方法采用丙酮沉淀法、95%(NH4)2SO4盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取半夏总蛋白,筛选半夏总蛋白提取的最佳方法。分别于半夏出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰苞期及倒苗期采集样品,分为新鲜组和干燥处理组,提取样品总蛋白,进行SDS-PAGE电泳检测及Bradford浓度测定。结果丙酮沉淀法、95%(NH4)2SO4盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取的半夏总蛋白量分别为0.369、0.678、1.082、0.493 mg/mL;新鲜半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期4.53 mg/g、全苗期2.28 mg/g、珠芽期2.79 mg/g、佛焰苞期7.61 mg/g、倒苗期10.21 mg/g;干燥半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期31.85 mg/g、全苗期18.52 mg/g、珠芽期42.08 mg/g、佛焰苞期28.56 mg/g、倒苗期56.84 mg/g;新鲜半夏块茎中蛋白含有15条蛋白带,干燥处理半夏块茎中蛋白含有5条蛋白带。结论 TCA-丙酮法是半夏总蛋白提取的最佳方法,不同生长时期的半夏块茎中蛋白成分各异,倒苗期总蛋白量最高。