基于HPLC-QQQ-MS技术探讨炮制对肉苁蓉中5个活性成分的含量影响

炮制一般会对中药材的成分及药效产生重要作用,本文为了探讨炮制加工对肉苁蓉成分的影响,建立了同时测定炮制前后肉苁蓉中肉苁蓉苷F、毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷和松果菊苷的含量的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法(high-performance liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometry,HPLC-QQQ-MS)的检测方法。采用50%甲醇溶液提取药物粉末,在Agilent Zorbax Eclipse Plus C 18(2.1 mm×150 mm,1.8μm)的色谱柱上,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,选取负离子多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式,以木通苯乙醇苷为内标成分,以进样量1μL,流速0.3 mL/min,柱温35℃,样品管理器温度8℃于HPLC-QQQ-MS进行同一批次炮制前后肉苁蓉中这五种成分的含量测定。结果显示5种成分在各自范围内线性关系良好,相关系数(r)在0.9929~0.9985之间,平均加样回收率在98.15%~100.2%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于4.6%。所建立的研究方法简便准确,可用于肉苁蓉的质量控制,并用于评价炮制对肉苁蓉含量及药效的影响。

管萼山豆根总黄酮的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

以管萼山豆根的叶为原料,采用微波-超声波辅助低共熔溶剂(DES)提取总黄酮,筛选出较优的DES体系,在单因素试验的基础上,运用Plackett-Burman和响应面试验优化其提取工艺;并考察了最佳提取工艺下总黄酮对DPPH·、·ABTS^(+)和·OH的清除作用。研究结果表明:较优的DES溶剂体系为n(氯化胆碱)∶n(三乙二醇)=1∶3,总黄酮的最佳提取工艺条件为提取时间45 min、提取温度74℃、料液比1∶45(g∶mL)、微波功率300 W、DES含水量25%、超声波功率300 W,在该条件下叶中总黄酮得率为3.460%;分别采用乙酸乙酯、热乙酸乙酯(_(50)±1)℃、大孔吸附树脂AB-8、NKA-9和D101分离总黄酮,其回收率分别为23.40%、28.09%、88.66%、71.55%和41.86%;AB-8大孔树脂分离所得总黄酮对DPPH·、·ABTS^(+)与·OH的半数抑制质量浓度(IC_(50))值分别为0.01705、0.01835和0.12330 g/L;总黄酮对DPPH·、·ABTS^(+)的清除率显著高于维生素C(V_(c)),而对·OH的清除率略低于V_(c)。进一步分析发现:优化条件下叶总黄酮得率(3.460%)高于茎(2.059%)和根(1.875%),高于单一微波提取(3.377%)和超声波提取(3.390%),低于加热回流提取(3.635%),但所需时间仅为加热回流提取的1/4。

大叶铁线莲组(Sect.Tubulosae)植物在陕西的分布订正

本文对大叶铁线莲组(Sect.Tubulosae Decne.)植物在陕西的分布做了订正,本组植物陕西仅产1种。原分布在陕西的大叶铁线莲(Clematis heracleifolia)实际为狭卷萼铁线莲(Clematis tubulosa var.ichangensis),现予以报道。

肉苁蓉和管花肉苁蓉种子萌发及质量研究

以肉苁蓉种子和管花肉苁蓉种子为研究对象,采用赤霉素、氟啶酮、氟草敏处理种子,探索两种肉苁蓉种子快速萌发的条件,并制订肉苁蓉和管花肉苁蓉种子质量检验规程。结果表明,以赤霉素预处理种子后,经氟啶酮或氟草敏培养,可显著提高种子的发芽率和发芽势。肉苁蓉种子的最佳萌发条件为25℃黑暗下,种子在蒸馏水中吸胀24 h,以1 000 mg/L赤霉素预处理72 h, 0.01 mg/L氟啶酮培养21 d;管花肉苁蓉种子的最佳萌发条件为25℃黑暗下,种子在蒸馏水中吸胀24 h,以1 mg/L赤霉素预处理72 h, 100 mg/L氟啶酮培养21 d。

超声波辅助DES提取肉苁蓉多酚的工艺优化、动力学及抗氧化活性研究

为了研究超声波辅助低共熔溶剂(Deep eutectic solvents,DESs)提取肉苁蓉多酚的最佳工艺条件,以新疆管花肉苁蓉为原料,首先筛选得到脯氨酸-丙三醇(摩尔比2:5)为最佳DES。进一步在单因素实验的基础上采用响应面法优化了超声波辅助DESs提取肉苁蓉多酚的最佳工艺,并对其提取动力学和抗氧化活性进行了研究。结果表明,肉苁蓉多酚的最佳提取工艺为:超声温度40℃、液料比45 mL/g、含水率40%、提取时间28 min,在此条件提取率为37.76 mg/g DW。UAE-DES过程符合二级反应动力学。肉苁蓉多酚提取物对DPPH和ABTS+自由基清除率的IC50值分别为0.875和0.501 mg/mL。研究结果为新疆管花肉苁蓉多酚的绿色提取和应用提供了理论依据。

NIRS快速测定管花肉苁蓉提取物中四种苯乙醇苷的含量

建立管花肉苁蓉提取物中四种苯乙醇苷(松果菊苷、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷)的近红外光谱定量分析模型,以快速评价管花肉苁蓉提取物的质量。以HPLC法测定管花肉苁蓉提取物中四种苯乙醇苷的含量作为参考值,采用近红外光谱法(NIRS)结合偏最小二乘法(PLS)建立管花肉苁蓉提取物中四种苯乙醇苷成分的定量分析模型,并对模型进行验证。结果表明:松果菊苷、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷定量分析模型的最佳光谱预处理方法分别为:SNV+SG+FD、MSC+FD、SNV+SD、MSC+SD,校正相关系数(R2c)分别为0.9937、0.9945、0.9954、0.9948;预测相关系数(R2p)分别为0.9094、0.9222、0.8812、0.8529;校正均方根偏差(RMSEC)分别为0.3681、0.0376、0.1944、0.0524;预测均方根偏差(RMSEP)分别为1.426、0.1448、1.002、0.2821。近红外模型预测值与真实值(HPLC测定)无显著性差异。该方法操作简便、准确、分析速度快、无污染,可用于管花肉苁蓉提取物中四种苯乙醇苷含量的快速测定。

基于分子对接和表面等离子体共振技术筛选肉苁蓉复方制剂中AChE抑制剂的研究

目的:虚拟筛选肉苁蓉复方制剂中潜在的乙酰胆碱酯酶(AChE)小分子抑制剂,为发现新型AChE抑制剂提供参考。方法:基于中药系统药理学技术平台(TCMSP)及文献检索建立肉苁蓉复方制剂即肉苁蓉、人参和黄芪虚拟筛选的数据库,运用Rosetta软件进行Glide分子对接,利用围绕AChE受体活性位点的氨基酸残基形成一个大范围的Box,应用不同类型的成分作为探针进行扫描,计算格点能量进行能量排名,之后对配体在Box范围内进行构象搜索,根据配体的不同构象、方向、位置及能量进行评分,对结果进行排序,并最终采用表面等离子共振(SPR)技术对主要活性成分和AChE蛋白进行结合力验证。结果:AChE蛋白与肉苁蓉、人参和黄芪中挑选出来的典型性先导化合物结合模式以及结合能量均较好。在所有化合物分子对接体系中,肉苁蓉能量评分在-9.397~-0.858 kcal/mol之间;人参能量评分在-9.929~-0.211 kcal/mol之间;黄芪能量评分在-9.408~-1.555 kcal/mol之间;所有化合物对接小分子能量均小于-7.0 kcal/mol。SPR亲和力验证结果发现,槲皮素、山奈酚和染料木素均可与AChE蛋白显示出较好的结合力。结论:基于分子对接技术筛选出肉苁蓉复方制剂中潜在的AChE抑制剂,结合SPR技术验证了AChE蛋白与活性成分之间良好的亲和力。

管花肉苁蓉田间接种技术的研究

目的:通过对管花肉苁蓉接种技术的研究,提高管花肉苁蓉的田间接种率。方法:用根管接种法,比较分析了不同大小种子、接种介质和接种时间等对管花肉苁蓉接种率的影响。结果与结论:选择宽度大于0.7mm的种子,粗砂为接种介质,于5月份接种,可使管花肉苁蓉的接种率达到92.5%。

药用肉苁蓉的遗传多样性RAPD分析

目的 :荒漠肉苁蓉Cistanchedeserticola和管花肉苁蓉Cistanchetubulosa群体遗传多样性的研究。方法 :对荒漠肉苁蓉 2个野生居群和管花肉苁蓉 4个野生居群进行RAPD分析 ,利用POPGENE1.31版软件分析群体的遗传多样性。结果 :荒漠肉苁蓉平均多态位点百分率 4 7.37% ,2个居群多态位点分别为 39.4 7%和 35 .5 3% ,平均Nei’s基因多样性为 0 .135 8,Shannon’s多态性信息指数为 0 .2 0 72 ,基因分化系数Gst=0 .2 5 4 6。管花肉苁蓉平均多态位点百分率 2 7.5 9% ,各居群多态位点百分率从 19.5 4 %到 2 5 .2 9% ,其中安迪尔居群的最高 2 5 .2 9% ,平均Nei’s基因多样性为 0 .0 82 3,Shannon’s多态性信息指数为 0 .12 5 8,基因分化系数Gst=0 .175 5。结论 :荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉在居群间均有一定的分化 ,荒漠肉苁蓉的遗传多样性明显高于管花肉苁蓉 ,并已明显分化成

管花肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定

目的:采用高效液相色谱法,测定管花肉苁蓉野生种和栽培种以及人工种植不同寄主、不同大小药材的有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷含量。方法:AgilentEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相甲醇-乙腈-1%醋酸(15:10:75),流速0.6mL·min-1,柱温30℃,检测波长334nm。结果:松果菊苷在0.904-9.04μg呈良好线性关系,回归方程为Y=2.000×106X-114800(r=0.9999),毛蕊花糖苷在1.27-12.7μg呈良好线性关系,回归方程为Y=3.000×106X-243200(r=0.9999),加样回收率松果菊苷平均为98.9%(n=5,RSD1.9%);毛蕊花糖苷平均为97.0%(n=5,RSD0.97%)。结论:本法用于管花肉苁蓉的测定简便、快速、灵敏、重复性好,所测样品中有效成分松果菊苷比毛蕊花糖苷的含量均高,野生种的2种有效成分含量均比栽培种的高,将样品以个体长度分成大、中、小3种不同样品,所测结果表示其含量按大、中、小依次增加,不同寄主间的含量差异很大,为评价管花肉苁蓉的药材质量提供一定的依据。

管花肉苁蓉化学成分的研究

目的 :研究国产管花肉苁蓉的化学成分。方法 :采用各种色谱技术包括HPLC分离化学成分 ,根据理化性质和波谱数据鉴定结构。结果 :分离得到 4个环烯醚萜苷、1个木脂素苷和 1个单萜 ,分别为五福花苷酸 (Ⅰ ) ,8 表马钱子酸 (Ⅱ ) ,京尼平苷酸 (Ⅲ ) ,玉叶金花苷酸 (Ⅳ ) ,丁香树脂酚葡萄糖苷 (Ⅴ )和 8 羟基香叶醇 (Ⅵ )。结论 :化合物Ⅰ和Ⅵ为首次从本属植物中分离得到 ,化合物Ⅲ ,Ⅳ和Ⅴ为首次从本植物中分离得到。

人工栽培管花肉苁蓉的化学成分分析

目的 分析栽培管花肉苁蓉 Cistanche tubulosa的化学成分及其不同生长时间、部位化学成分的变化。方法采用 HPL C法分析不同样品的指纹图谱。结果 不同生长时间、不同部位、栽培品与野生品、花期各部位之间苯乙醇苷类成分的种类基本一致 ,只是各成分的含量有明显的差异。结论 管花肉苁蓉的栽培时间应在 3年以上 ;采挖时间应严格控制在开花以前 ;栽培管花肉苁蓉的质量仍不如野生品 ,应加强栽培技术的研究 。

管花肉苁蓉麦角甾苷对衰老小鼠端粒酶活性和免疫功能的影响

目的观察管花肉苁蓉麦角甾苷(CTWA)对实验性衰老小鼠心、肝和脑组织中丙二醛(MDA)含量、端粒酶活性和免疫功能的影响。方法小鼠sc 10%D-半乳糖10mL·kg-1,每天1次,连续8周,建立亚急性衰老模型。给药组小鼠从造模第9周起,分别ig给予CTWA 10,20和40mg·kg-1,每天1次,连续2周。硫代巴比妥酸比色法检测MDA含量;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;[3H]TdR掺入法测定淋巴细胞增殖反应;中性红实验测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;放射免疫法测定外周血白细胞介素2(IL-2)含量。结果模型组小鼠心、肝和脑MDA含量明显增加,心和肝端粒酶活性明显降低,淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血IL-2含量均显著下降。给予CTWA 2周,小鼠心、肝和脑MDA含量明显降低,CTWA 40mg·kg-1组小鼠心和脑组织端粒酶活性明显升高,淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血IL-2含量明显升高。结论CTWA能拮抗自由基损伤,增强衰老小鼠心和脑组织端粒酶活性和机体免疫功能,这些可能与CTWA的抗衰老作用有关。

华北平原管花肉苁蓉引种试验研究

为充分利用华北平原丰富的中国柽柳资源和人工栽培濒危中药材管花肉苁蓉 ,应用根管接种方法 ,在华北平原中国柽柳上接种管花肉苁蓉成功。探索了适宜的生长调节剂进行浸种处理及适宜的接种融合剂溶液灌注接种管 ,并使管内相对水分含量达到 80 % ,同时选择直径 0 2～ 0 5cm的柽柳根系进行接种。结果表明 :用上述方法可使管花肉苁蓉接种率达到 90 %。

管花肉苁蓉产地适宜性数值分析

目的:应用TCMGIS-Ⅰ系统分析濒危药材管花肉苁蓉产地适宜性,为管花肉苁蓉的科学区划及种植提供依据。方法:应用《中药材产地适宜性分析地理信息系统》(TCMGIS-Ⅰ),以新疆南疆和田地区管花肉苁蓉野生分布区的最适宜生长环境因子为依据,分析管花肉苁蓉的适宜产区及分布面积。结果:新疆、内蒙古、宁夏、甘肃、青海5省区是管花肉苁蓉适宜产区,其中最适宜产区包括新疆、内蒙古、甘肃3省区的56个县市,总面积为190952.1km2,占所在县市总面积的11.45%;适宜产区包含新疆、甘肃、青海3省区46个县市,总面积为41217.37km2,占所在县市总面积的2.71%;次适宜产区包含新疆、内蒙古、宁夏、甘肃4省区56个县市,总面积为421145.2km2,占所在县市总面积的28.38%。在各级别的适宜产区中,新疆包含的县市数最多、总面积最大,其次为甘肃、内蒙古、宁夏、青海省区。结论:应用TCMGIS-Ⅰ系统分析管花肉苁蓉产地适宜性具有一定的科学性和准确性,对濒危药材管花肉苁蓉的引种栽培及科学区划具有重要的参考价值。

不同产地管花肉苁蓉中有效成分的定量分析

目的建立管花肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷和半乳糖醇的HPLC测定方法。方法采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,体积流量为1.0mL/min,在检测波长330nm、柱温为35℃的条件下对松果菊苷和毛蕊花糖苷的量进行测定;采用Prevail Carbohydrate ES聚合凝胶柱色谱柱,以乙腈-水(77∶23)为流动相,体积流量为0.7mL/min,以ELSD为检测器,在柱温为25℃的条件下对半乳糖醇进行测定。结果松果菊苷的平均回收率为100.29%,RSD为1.32%;毛蕊花糖苷的平均回收率为102.10%,RSD为1.14%;半乳糖醇的平均回收率为99.42%,RSD为2.83%。结论本方法对管花肉苁蓉质量标准的制定和栽培基地的选择具有很好的参考价值。

管花肉苁蓉种子萌发和寄生过程的形态学研究

目的:了解管花肉苁蓉寄生过程.方法:变档体视显微镜观察管花肉苁蓉种子萌发和寄生过程的形态结构.结果:①管花肉苁蓉种子不接触寄主柽柳根,可独立萌发.②种子萌发首先从种孔长出芽管,其顶端与寄主根接触并膨大为吸器,吸器侵入寄主根,使寄主根维管束内充满褐色物质.③管花肉苁蓉幼体撑破芽管而出,其上可见6～7个鳞叶突起的;断裂的芽管、胚乳细胞残留体及种皮脱落.④近茎端的根明显膨大变粗;远茎端的寄主根则逐渐萎缩.结论:寄生过程遵循种子萌发长出芽管,接触寄主根形成吸器并侵入寄主根,管花肉苁蓉幼体出现3个阶段.

鲜管花肉苁蓉加工工艺

目的:建立鲜管花肉苁蓉直接加工饮片的工艺。方法:采用4因素3水平的正交试验对鲜管花肉苁蓉饮片加工过程的主要影响因素,包括切片厚度、加热温度和杀酶时间进行了优化,得到最佳的工艺参数为:鲜管花肉苁蓉切成4 mm厚片,70℃杀酶6 min。另外,将优化后的工艺与鲜管花肉苁蓉切片直接晒干、鲜管花肉苁蓉按传统方法晒干的工艺进行了比较。结果:按照优化后工艺得到的饮片,其松果菊苷的含量是鲜品切片直接晒干方法的7.3倍,是传统晒干方法的12.8倍;毛蕊花糖苷的含量是鲜品切片直接晒干方法的6.5倍,是传统晒干方法的14.9倍。结论:利用本方法加工管花肉苁蓉,可以大大提高饮片中有效成分的质量,节约原料,从而有效地保护野生肉苁蓉资源,提高药物的疗效,将产生很好的经济效益和生态效益。

管花肉苁蓉的苯乙醇苷类成分

采用各种色谱技术主要为 HPL C从国产管花肉苁蓉 Cistanche tubulosa(Schenk) Wight中分离得到 7个苯乙醇苷类化合物 ,根据理化性质和波谱数据鉴定它们的结构为 2′-乙酰基类叶升麻苷 ( )、类叶升麻苷 ( )、crenatoside( )、丁香苷 A3′- α- L-吡喃鼠李糖苷 ( )、异类叶升麻苷 ( )、去咖啡酰基类叶升麻苷 ( )和红景天苷( )。化合物 为首次从本属植物中分离得到 ,其它化合物为首次从本植物中分离得到。

管花肉苁蓉与柽柳试管苗离体接种的研究

用去果皮的种子对柽柳长根实生苗和试管苗进行接种,建立管花肉苁蓉种子与柽柳的离体接种体系,用体视显微镜观察接种情况并用整体透明方法观察侵染情况。结果表明,寄主柽柳的试管苗与管花肉苁蓉种子的共培养能够建立管花肉苁蓉-柽柳接种复合体,这将为研究寄主-寄生物相互关系提供有效的实验体系。