丹蛭降糖胶囊通过LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护线粒体功能减轻血管钙化的机制

目的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样分化是血管钙化(vascular calcification,VC)细胞学基础。线粒体功能障碍在VSMCs成骨样转化中起重要作用。本研究旨在探讨丹蛭降糖胶囊(Danzhi Jiangtang capsules,DJC)通过调节LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护VSMCs线粒体功能减轻血管钙化的机制。方法使用β-甘油磷酸盐来诱导血管平滑肌细胞的钙化模型,并采用维生素D 3+高脂饲料来诱导糖尿病大鼠的血管钙化模型。Von Kossa染色检测细胞和血管组织钙化;用邻甲酚酞络合物比色法测定钙含量;采用对硝基苯磷酸盐比色法测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;采用RT-qPCR分析VSMCs成骨样转化相关基因骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein2,BMP2)、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin alpha,ɑ-SMA)及长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long noncoding RNA taurine up-regulated1,LncRNA TUG1)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Western blot分析BMP2、ɑ-SMA及β-catenin的蛋白表达;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体结构。结果DJC降低β-甘油磷酸盐诱导的VSMCs中LncRNA TUG1的表达,下调β-catenin的表达,降低ALP活性和钙沉积,保护线粒体功能,恢复膜电位,减少VSMCs成骨样转化。重要的是,DJC通过下调糖尿病下肢血管组织LncRNA TUG1、β-catenin的表达,上调ɑ-SMA的表达来减轻糖尿病下肢VC。结论DJC对糖尿病下肢VC有明显的改善作用,机制是通过LncRNA TUG1/β-catenin信号保护线粒体功能减少VSMCs成骨细胞转化。

长链非编码RNA-TUG1在胃癌发生和发展中的作用及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)TUG1在胃癌发生和发展中的作用及其机制。方法收集2018年10月—2020年9月于上海健康医学院附属嘉定区中心医院普外科行胃癌根治术的60例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织标本。选取其中3例存在淋巴结转移的患者组织样本进行lncRNA芯片检测,筛查胃癌和癌旁组织样本中的差异表达lncRNA。采用qRT-PCR技术检测TUG1基因在胃癌组织和细胞中的表达水平,分析其表达水平与临床及病理因素之间的关系。采用慢病毒Lenti-TUG1、Lenti-TUG1-shRNA转染胃癌细胞NCI-N87和MGC-803。根据慢病毒转染分为Lenti-TUG1处理组与Lenti-TUG1-shRNA处理组,设计不加慢病毒的细胞为对照组。采用细胞增殖实验和动物模型实验检测TUG1基因在体外和体内对NCI-N87和MGC-803生长的影响;采用细胞迁移和侵袭实验检测TUG1基因对NCI-N87和MGC-803细胞迁移和侵袭的影响;采用细胞凋亡实验检测TUG1基因对NCI-N87和MGC-803细胞凋亡的影响;采用蛋白质印迹法检测TUG1基因对凋亡及上皮间质转化(EMT)相关蛋白质表达的影响。结果lncRNA芯片检测结果显示,与癌旁组织比较,胃癌组织中有11种lncRNAs表达上调,有7种lncRNAs表达下调。根据患者胃癌组织中TUG1的中位相对表达量,将胃癌患者分为高表达组(30例)和低表达组(30例)。TUG1高表达组肿瘤体积≥5 cm^(3)、有淋巴结转移、有远处转移、TNM分期为Ⅲ期的患者构成均显著高于TUG1低表达组(P值均<0.05)。细胞增殖实验结果显示,与对照组比较,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的光密度(A)值均显著增高,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的A值均显著降低(P值均<0.01)。细胞迁移和侵袭实验结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞与MGC-803细胞的迁移数量和侵袭数量均显著增多,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞与MGC-803细胞的迁移数量和侵袭数量均显著减少(P值均<0.01)。细胞凋亡实验结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的凋亡比例均显著降低,Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞的凋亡比例均显著增高(P值均<0.01)。小动物活体成像仪检测结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组的NCI-N87细胞和MGC-803细胞的相对荧光强度均显著增高(P值均<0.01),Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞相对荧光强度均显著降低(P值均<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组相比,Lenti-TUG1处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞中Bax、caspase-3和E-cadherin的蛋白质相对表达量均显著降低,RAB2A、MMP-14和Bcl-2的蛋白质相对表达量均显著增高;Lenti-TUG1-shRNA处理组NCI-N87细胞和MGC-803细胞中Bax、caspase-3和E-cadherin蛋白质相对表达量均显著增高,RAB2A、MMP-14和Bcl-2蛋白质相对表达量均显著降低(P值均<0.01)。在229例胃癌组织中,TUG1与RAB2A相对表达量呈正相关(r=0.180,P=0.006);miR-186与RAB2A相对表达量呈负相关(r=-0.147,P=0.026)。结论TUG1可能通过调控凋亡、EMT相关信号通路参与胃癌的发生、发展,针对TUG1的靶向治疗设计可能为胃癌治疗提供新的思路。

基于lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路探讨肾炎止血丸治疗IgA肾病的作用机制

目的:观察肾炎止血丸对IgA肾病(IgAN)模型大鼠的治疗作用及其对lncRNA TUG1介导miR-320-5p调控PTEN/Cosmc通路的影响。方法:采用“牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖”联用法构建IgAN大鼠模型,32只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯沙坦钾片组[20 mg/(kg·d)]、肾炎止血丸组[3.6 g/(kg·d)],每组8只,均连续给药6周。留取血液、肠黏膜及肾组织标本,分别应用ELISA法检测血清磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、核心1β1,3半乳糖基转移酶伴侣蛋白(Cosmc)、半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)水平;采用Real-time PCR、Western blot检测肠黏膜组织、肾脏组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA及蛋白表达。结果:①血清PTEN、Cosmc、Gd-IgA1:与模型组比较,各给药组PTEN、Cosmc升高明显(均P<0.01)、Gd-IgA1减少明显(P<0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN、Cosmc升高及Gd-IgA1减少明显(均P<0.01)。②RT-PCR法检测肠黏膜组织、肾组织lncRNA TUG1、miR-320、PTEN、Cosmc mRNA表达:与模型组比较,氯沙坦钾片组肠黏膜组织及肾组织TUG1升高明显(均P<0.01),miR-320减少明显(P<0.01);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肠黏膜组织及肾组织TUG1、PTEN升高明显,肠黏膜组织Cosmc升高明显(均P<0.01),肾组织miR-320减少明显(P<0.01)。③Western blot检测肠黏膜组织、肾组织PTEN、Cosmc蛋白表达:与模型组比较,各给药组肠黏膜组织PTEN蛋白表达升高(P<0.05),肾炎止血丸组Cosmc表达升高明显(P<0.05);与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸PTEN升高有显著差异(P<0.05),Cosmc表达升高无显著差异(P>0.05)。各给药组肾组织Cosmc表达升高有极显著差异(P<0.01),与氯沙坦钾片组比较,肾炎止血丸肾组织PTEN升高有显著差异(P<0.05),Cosmc表达升高有极显著性差异(P<0.01)。结论:肾炎止血丸能够改善IgAN大鼠肾损伤;其作用机制可能与参与lncRNA TUG1介导miR-320调控PTEN/Cosmc通路有关。

LncRNA TUG1调控miR-142-5p/PD-L1轴促进非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学行为的影响及分子机制。方法采用qRT-PCR、Western blot分别检测组织(NSCLC癌组织、癌旁组织)和细胞(人正常气管上皮细胞HBE及NSCLC细胞A549、H2009、H1975)中TUG1、miR-142-5p及PD-L1的表达。将pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-142-5p mimics、si-TUG1+anti-miR-142-5p分别转染于A549,qRT-PCR、Western blot分别检测细胞中TUG1、miR-142-5p及PD-L1表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶基因实验分别检测TUG1和miR-142-5p、miR-142-5p和PD-L1的关系;RNA免疫共沉淀检测miR-142-5p与TUG1的相互作用。结果NSCLC组织中TUG1(2.28±0.23 vs 1.00±0)、PD-L1(0.93±0.11 vs 0.25±0.01)表达高于癌旁组织,miR-142-5p(0.31±0.02 vs 1.00±0)表达低于癌旁组织(P<0.05);与人正常气管上皮细胞HBE比较,NSCLC细胞A549中TUG1(3.21±0.27 vs 1.00±0)、PD-L1(1.12±0.12 vs 0.24±0.01)表达水平最高,miR-142-5p(0.23±0.02 vs 1.00±0)表达水平最低(P<0.05);过表达TUG1促进A549细胞增殖、迁移、侵袭;下调TUG1或上调miR-142-5p表达均对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力发挥抑制作用;TUG1负调控miR-142-5p,miR-142-5p负调控PD-L1;下调miR-142-5p减弱了沉默TUG1对A549细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论TUG1在NSCLC组织和细胞中高表达,沉默TUG1通过miR-142-5p/PD-L1轴抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭。

LncRNA TUG1靶向调节miR-21/PTEN轴抑制糖尿病肾病大鼠肾纤维化的作用机制研究

目的:探索LncRNA TUG1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化中的作用及其潜在分子机制。方法:应用链脲佐菌素构建DN大鼠模型,LncRNA表达谱芯片筛选DN大鼠肾脏组织中LncRNA的差异表达。应用慢病毒试验过表达LncRNA TUG1,苏木精-伊红(HE)染色检测过表达LncRNA TUG1对DN大鼠肾脏组织形态学的改变;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测过表达LncRNA TUG1对miR-21及纤维连接蛋白(FN)、人Ⅳ型胶原(Col-4)和转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA表达水平的影响;Western blot检测FN、Col-4、TGFβ1、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂肌醇3激酶(p-PI3K)及磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达水平。应用生物信息软件预测miR-21与LncRNA TUG1的作用关系,双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与LncRNA TUG1的相互作用关系。构建高糖诱导的肾小球系膜HBZY-1细胞模型,应用慢病毒试验方法过表达LncRNA TUG1或应用miR-21 mimic处理细胞,采用CCK-8试验检测他们对细胞增殖的影响,使用RT-qPCR实验检测其对HBZY-1细胞FN、Col-4、TGFβ1 mRNA表达水平的影响。结果:DN大鼠肾脏组织中LncRNA TUG1的表达水平显著降低。过表达LncRNA TUG1抑制DN大鼠FN、Col-4、TGFβ1 mRNA以及蛋白表达水平,肾组织病理形态学明显改善。双荧光素酶报告基因实验结果显示,LncRNA TUG1通过直接靶向方式与miR-21结合。过表达LncRNA TUG1能够抑制miR-21表达,上调PTEN并可能抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路。过表达LncRNA TUG1抑制HBZY-1细胞增殖,抑制FN、Col-4、TGFβ1 mRNA在细胞中的表达水平;应用miR-21 mimic处理能够逆转LncRNA TUG1过表达产生的增殖抑制和纤维化抑制效应。结论:LncRNA TUG1靶向调节miR-21/PTEN轴抑制DN大鼠肾纤维化。

lncRNA TUG1在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:探讨lncRNA牛磺酸上调基因1(taurine upregulated gene 1,TUG1)与结直肠癌临床病理因素的相关性及临床意义,以及其促进结直癌细胞增殖和侵袭的生物学功能。方法:实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测结直肠癌组织TUG1的表达水平,并采用卡方检验分析TUG1表达水平与临床资料的相关性。Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验分析TUG1表达水平与结直肠癌预后的相关性。CCK8实验和Transwell实验检测过表达和敲低TUG1后的结直肠癌细胞增殖或侵袭能力的变化。结果:TUG1在结直肠癌组织中表达水平明显升高(P<0.05);TUG1表达水平与肿瘤大小、CEA水平、淋巴结转移、远处转移以及TNM分期密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验提示,TUG1表达水平越高,结直肠癌患者预后越差(P<0.05)。CCK8和Transwell实验结果表明,与对照组相比,pcDNA3.1-TUG1组结直肠癌细胞中TUG1表达水平明显增高(P<0.05),细胞增殖活性和侵袭数目增多(P<0.05);而siRNA-TUG1组结直肠癌细胞中TUG1表达水平明显降低(P<0.05),细胞增殖活性和侵袭数目减少(P<0.05)。结论:TUG1在结直肠癌组织中呈高表达,且TUG1表达水平越高,患者预后越差。并且,lncRNA TUG1促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力。

脓毒症患者血lncRNA PVT1、lncRNA TUG1、HMGB1的表达及临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、lncRNA TUG1、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达及临床意义。方法 选取脓毒症患者87例为脓毒症组,按是否休克将其分为非休克组(54例)和休克组(33例);随机选取同期健康人群50例为对照组。比较各组血清HMGB1、lncRNA PVT1、lncRNA TUG1表达情况,并分析其相关性。结果 与对照组比较,脓毒症组血lncRNA PVT1、HMGB1升高,lncRNA TUG1降低;且休克组较非休克组更为显著(P<0.05)。脓毒症患者HMGB1与lncRNA PVT1呈正相关,与lncRNA TUG1呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析表明,lncRNA PVT1、lncRNA TUG1和HMGB1联合检测对脓毒症的诊断效能最高。结论 lncRNA PVT1、lncRNA TUG1和HMGB1与脓毒症病情严重程度密切相关,三者联合检测对脓毒症患者的诊断有一定预测价值。

长链非编码RNA TUG1对鼻咽癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

目的对长链非编码RNA TUG1进行泛癌分析,并评估其对鼻咽癌生物学行为及放射敏感性的影响。方法基于TCGA数据库检测TUG1在泛癌中的表达情况和预后价值。用qPCR方法检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中TUG1的表达情况。用TUG1 siRNA或阴性对照siRNA转染鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞。采用MTS法、transwell实验和划痕实验检测鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果基于TCGA数据库的分析发现,在12种癌症类型中TUG1的表达上调。TUG1表达增加与多种癌症类型的较差预后相关。体外实验研究发现lncRNA TUG1在鼻咽癌细胞系和组织中也显著上调。TUG1高表达与TNM分期恶化有显著相关性。TUG1的高表达与鼻咽癌患者不良预后有显著相关性。下调TUG1的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进鼻咽癌细胞凋亡,提高鼻咽癌细胞放射敏感性。结论TUG1在多种癌症类型中发挥重要作用,并与鼻咽癌的不良预后相关。TUG1可能作为鼻咽癌治疗的潜在治疗靶点。

长链非编码RNA TUG1在宫颈癌中的研究进展

长链非编码RNA (lncRNA)是长度大于200 bp且无编码蛋白功能的RNA。研究发现lncRNA在转录、表观遗传学以及转录后水平等方面发挥重要的调控作用,调节机体的病理和生理过程。一些lncRNA在宫颈癌组织中异常表达,且在宫颈癌的发生过程中起到重要作用。而lncRNA TUG1也发现参与多种恶性肿瘤的发生发展,本文就lncRNA TUG1在宫颈癌发生、发展中的作用机制、治疗及预后进行综述。

维格列汀联合格列美脲对2型糖尿病患者血糖水平、氧化应激及Atg7、lncRNA TUG1表达的影响

目的观察维格列汀联合格列美脲对2型糖尿病(T2DM)患者血糖水平、氧化应激及自噬相关蛋白7(Atg7)、长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)表达的影响。方法选取160例北京市通州区中西医结合医院于2019年2月至2021年2月期间收治的T2DM患者,采用随机数字表法分为对照组和研究组,各80例。对照组给予格列美脲治疗,研究组在对照组的基础上联合维格列汀治疗,对比两组疗效、血糖、氧化应激指标、Atg7、lncRNA TUG1表达,观察治疗期间不良反应发生情况。结果研究组临床总有效率95.00%(76/80),高于对照组76.25%(61/80),数据差异有统计学意义(P<0.05)。研究组FBG(6.37±0.48mmol/L)、2hPG(7.88±1.95mmol/L)、HbA1c(6.63%±0.92%)水平相较于对照组FBG(7.39±0.44mmol/L)、2hPG(9.45±2.13mmol/L)、HbA1c(7.56%±1.08%)水平均较低,数据差异有统计学意义(P<0.05)。研究组SOD(147.64±15.24nU/mg)高于对照组SOD(122.38±14.22nU/mg),MDA(3.46±0.94nmol/mL)低于对照组MDA(5.38±1.74nmol/mL),差异有统计学意义(P<0.05)。研究组Atg7(2.54±0.38)、lncRNA TUG1(6.15±1.34)表达水平相较于对照组Atg7(3.37±0.61)、lncRNA TUG1(10.38±1.23)表达水平均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论维格列汀联合格列美脲治疗T2DM患者,可有效控制血糖,减轻机体氧化应激反应,调节Atg7、lncRNA TUG1表达水平,疗效肯定。

干扰长链非编码RNA TUG1上调miR-26a缓解LPS诱导的脓毒症大鼠线粒体损伤和免疫紊乱

目的脓毒症(sepsis)是由感染引起的全身炎症反应综合征。本文主要研究干扰长链非编码RNA TUG1对LPS诱导的脓毒症大鼠线粒体损伤和免疫紊乱影响。方法体内实验选取SD大鼠分为Control组、LPS组、LPS+shRNA-NC组和LPS+sh-TUG1组,LPS+shRNA-NC组和LPS+sh-TUG1组大鼠每周分别尾静脉注射shRNA腺病毒和特异靶向TUG1的shRNA腺病毒1次,连续2周,Control组、LPS组注射等量生理盐水,2周后,LPS组、LPS+shRNA-NC组和LPS+sh-TUG1组大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS;体外实验选取10 ng/ml LPS诱导的THP-1细胞分为Control组、sh-TUG1组、miR-26a inhibitor组和sh-TUG1+inhibitor组,分别用sh-TUG1和miR-26a inhibitor单独或联合转染;RT-PCR检测TUG1和miR-26a mRNA表达水平,HE染色观察肺组织纤维化情况,Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3和caspase-9蛋白表达,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-4和IL-10的含量。结果LPS诱导脓毒症大鼠TUG1表达显著上调,miR-26a表达显著下调;sh-TUG1转染后,LPS诱导脓毒症大鼠肺组织纤维化明显减轻,Bax表达显著下调、Bcl-2表达显著上调,TNF-α和IL-6含量显著减少、IL-4和IL-10含量显著增加;LPS诱导的THP-1细胞,sh-TUG1+inhibitor组miR-26a表达比sh-TUG1组显著下调、比miR-26a inhibitor组显著上调,Bax表达比shTUG1组显著上调、比miR-26a inhibitor组显著下调,Bcl-2表达比sh-TUG1组显著下调、比miR-26a inhibitor组显著上调,Caspase-3和Caspase-9表达比sh-TUG1组显著上调、比miR-26a inhibitor组显著下调,TNF-α和IL-6含量比sh-TUG1组显著升高、比miR26a inhibitor组显著降低,IL-4和IL-10的含量比sh-TUG1组显著降低、比miR-26a inhibitor组显著升高。结论干扰长链非编码RNA TUG1可通过上调miR-26a缓解LPS诱导的线粒体损伤、细胞凋亡和炎症反应。

绞股蓝皂苷调控长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡对ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

为探讨绞股蓝皂苷通过影响长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积防治AS机制,本实验将10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组,20只健康ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、绞股蓝皂苷组(高脂饲料喂养12周),灌胃给药4周。HE染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况,全自动生化分析仪检测血脂水平,实时荧光定量Q-PCR检测长链非编码TUG1、miRNA-26a表达,实时荧光定量Q-PCR及Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测Bcl2、Bax、Cytc、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP基因及蛋白表达。结果显示模型组ApoE^(-/-)小鼠血脂水平发生紊乱,肝细胞体积变大,脂肪空泡明显,小鼠肝脏Lnc-TUG1表达显著升高,miRNA-26a显著下降(P<0.01);Bax、Cyt-c、cleaved caspase-3、cleaved PARP mRNA及蛋白表达显著升高,Bcl2 mRNA及蛋白显著下降(P<0.01或P<0.05);cleaved caspase-9蛋白表达显著升高(P<0.01或P<0.05),cleaved caspase-9 mRNA仅有上升趋势;绞股蓝皂苷干预后血脂紊乱得以改善,肝细胞脂肪变性程度减轻,脂肪空泡明显减少,小鼠肝脏Lnc TUG1表达有所下降,miRNA-26a表达有所上调(P<0.05),小鼠肝脏Bax、Cyt-c、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9 mRNA及蛋白表达显著下调,Bcl2 mRNA及蛋白显著上调(P<0.01或P<0.05),cleaved PARP蛋白表达显著下调(P<0.05),cleaved PARP mRNA仅有下调趋势;研究结果提示绞股蓝皂苷可能通过影响长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积,进而防治动脉粥样硬化。

LncRNA TUG1在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清中的表达及意义

目的探讨检测长链非编码RNA TUG1(long non coding RNA TUG1,Lnc RNA TUG1,TUG1)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血清中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time polymemse chain reaction,QRT-PCR)检测眉山市人民医院收治的106例冠心病阳性患者和98例冠心病阴性对照组的血清TUG1浓度。采用酶联免疫吸附法检测外周血清中胰岛素样生长因子2B(insulin-like growth factor 2B,IGF2B)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)的浓度。分析血清TUG1浓度与血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度的相关性。结果与冠心病阴性组比较,冠心病阳性组血清TUG1浓度维持在相对较低的水平;而血清IGF2B、IL-6、TNF-α浓度在冠心病阳性组明显高于冠心病阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析结果显示,血清TUG1浓度与IGF2B、IL-6及TNF-α浓度呈负相关关系(IGF2B:r=-0.767,P<0.001;IL-6:r=-0.671,P<0.001;TNF-α:r=-0.872,P<0.001)。结论冠心病患者血清TUG1浓度显著降低,可能是潜在的诊断和预测冠心病预后的血清标志物。

抑制lncRNA TUG1靶向上调miR-26a介导VEGF/P38MAPK/Hsp27通路对结肠癌SW480细胞生物学行为影响

目的:探究抑制干扰长链非编码RNA(lncRNA)TUG1靶向上调miR-26a介导VEGF/P38MAPK/Hsp27通路对结肠癌SW480细胞的生长、侵袭和EMT的影响。方法:sh-TUG1分别与miR-26a inhibitor和通路抑制剂SB203580单独或联合转染SW620细胞,以未经处理的SW480细胞为对照组。RT-PCR检测各组细胞TUG1及miR-26a表达,荧光素酶报告基因检测TUG1及miR-26a的靶向关系,BrdU法检测细胞增殖,Tanswell检测细胞侵袭,Western blot检测蛋白表达。将SW480细胞及转染sh-TUG1的SW480细胞分别皮下注射入裸鼠体内,分别设为对照组及sh-TUG1组,正常喂养30 d后取瘤、量体积,RT-PCR检测肿瘤组织TUG1及miR-26a表达,免疫组化检测肿瘤组织中Ki67、VEGF和Vimentin表达。结果:miR-26a是TUG1的靶向基因。相较于对照组,sh-TUG1组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显降低,而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05);miR-26a inhibitor组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显升高,而E-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05)。相较于miR-26a inhibitor组,sh-TUG1+inhibitor组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显降低,而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。SB203580+LV-TUG1组细胞增殖及侵袭数、VEGF、P-P38/P38、P-Hsp27/Hsp27相对表达量高于SB203580组(P<0.05)。sh-TUG1组肿瘤体积,肿瘤组织中TUG1、Ki67、VEGF和Vimentin表达低于对照组,miR-26a表达高于对照组(P<0.05)。结论:抑制TUG1表达可靶向上调miR-26a水平,能通过抑制VEGF/P38MAPK/Hsp27通路抑制结肠癌SW480细胞的生长、运动和裸鼠成瘤。

长链非编码RNA TUG1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long chain non coding RNA,LncRNAs)近年来成为研究的热点。牛磺酸上调基因1(taurine upregulated gene 1,TUG1)是牛磺酸作用小鼠视网膜细胞后表达上调基因1,与肿瘤的发生、发展密切相关。TUG1在多种肿瘤中表达上调,其主要通过ceRNA模式与转录因子竞争性结合miRNA、调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子及影响肿瘤血管生成等途径参与肿瘤的发生、发展。进一步研究发现,TUG1还可作为肿瘤的预后标志物,在肿瘤的早期诊断、疗效判断及预后评估等方面具有重要的应用前景。

LncRNA TUG1和miR-138-5p在慢性心力衰竭患者中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA TUG1(LncRNA TUG1)及微小RNA 138-5p(miR-138-5p)在慢性心力衰竭患者血浆中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测148例冠心病合并慢性心力衰竭患者(CHF组)及40例健康体检者(对照组)血浆LncRNA TUG1及miR-138-5p的表达,分析TUG1及miR-138-5p的表达与患者临床参数之间的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线分析TUG1及miR-138-5p对CHF早期诊断的潜能。Kaplan Meier生存分析TUG1及miR-138-5p对CHF 2年生存率的影响。结果与对照组比较,CHF组血浆TUG1及脑钠肽(BNP)的表达明显升高(P<0.001);而miR-138-5p表达明显降低(P<0.05)。TUG1的表达与CHF患者血清BNP的表达呈正相关(r=0.682,P<0.001);而与miR-138-5p的表达及左心室射血分数(LVEF)呈负相关系(P<0.05)。LncRNA TUG1作为诊断慢性心力衰竭患者生物标志物的曲线下面积(AUC)为0.868(95%CI 0.590~0.960,P<0.001)。miR-138-5p作为诊断慢性心力衰竭患者生物标志物的曲线下面积(AUC)为0.607(95%CI0.620~0.940,P<0.001)。Kaplan-Meier法分析发现,高表达LncRNA TUG1患者2年中位生存时间短于低表达者(χ^2=19.77,P<0.001)。高表达miR-138-5p患者2年中位生存时间长于低表达者(χ^2=11.97,P<0.001)。结论慢性心力衰竭患者血浆LncRNA TUG1高表达,与miR-138-5p的表达呈负相关,可作为CHF患者早期诊断及预后评估的生物标志物。

长链非编码RNATUG1在膀胱尿路上皮癌中的表达及对细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)中的表达,及其对BUC细胞增殖和凋亡的调控作用。方法:实时定量PCR法检测TUG1基因在62例BUC组织和T24、J82细胞系中的表达。统计分析TUG1基因在BUC组织的表达与BUC临床病理因素的相关性。TUG1抑制剂smart silencer-TUG1(ss-TUG1)沉默T24和J82细胞中TUG1的表达。CCK8法检测T24和J82细胞的增殖活力。流式细胞术检测T24和J82细胞的凋亡率。结果:与癌旁组织及人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1相比,TUG1基因在BUC组织及T24、J82细胞系中的表达显著上调。随着BUC病理分级和分期的增加,BUC组织中TUG1基因表达明显增加。转染ss-TUG1能够显著抑制T24和J82细胞中TUG1的表达,TUG1沉默能够显著抑制T24和J82细胞的增殖活力,并促进其细胞凋亡。结论:长链非编码RNA TUG1在BUC组织及细胞系中高表达,其表达沉默能够抑制BUC细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA TUG1靶向miR-29a-3p调控高糖诱导的人足细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因(TUG1)对高糖诱导的人足细胞损伤的影响及其机制。方法用终浓度为30 mmol/L的高糖溶液刺激HPCs作为高糖(HG)组,同时以终浓度为5 mmol/L的糖溶液处理HPCs作为对照组(Control);将pCDH-NC、pCDH-TUG1、si-NC、si-TUG1分别转染至正常HPCs中,记为pCDH-NC组、pCDH-TUG1组、si-NC组、si-TUG1组。将pCDH-NC、pCDH-TUG1、anti-NC、anti-miR-29a-3p转染至高糖处理的HPCs中,记为HG+pCDH-NC组、HG+pCDH-TUG1组、HG+anti-NC组和HG+anti-miR-29a-3p组。将pCDH-TUG1与miR-NC、miR-29a-3p分别共同转染至高糖处理的HPCs中,记为HG+pCDH-TUG1+miR-NC组、HG+pCDH-TUG1+miR-29a-3p组。qRT-PCR检测miR-29a-3p和TUG1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果高糖处理的HPCs中podocin、nephrin、Bcl-2、TUG1表达水平降低;Bax、miR-29a-3p表达水平升高,细胞凋亡率升高。过表达TUG1和抑制miR-29a-3p表达可降低细胞凋亡率,保护高糖诱导的足细胞损伤。TUG1靶向调控miR-29a-3p,过表达miR-29a-3p能逆转TUG1过表达对高糖诱导足细胞损伤的保护作用。结论TUG1对高糖诱导的人足细胞损伤有保护作用,其机制可能与miR-29a-3p表达相关。

干扰长链非编码RNA TUG1缓解卵清蛋白诱导的哮喘小鼠肺功能损伤和纤维化以及免疫紊乱

目的探讨干扰长链非编码RNA TUG1对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠肺功能损伤、纤维化以及免疫紊乱的影响。方法将小鼠随机分为正常对照组(Control)、模型组(OVA)、阴性对照组(OVA+shRNA-NC)、干扰组(OVA+sh-TUG1),检测肺功能指标;HE染色观察肺组织;Masson染色观察肺纤维化;WB检测肺纤维化指标蛋白表达水平;试剂盒检测HYP含量;统计肺组织炎症评分;检测BALF液中炎症细胞计数情况;ELISA检测BALF液中炎症因子含量,RT-PCR检测炎症因子mRNA表达水平;WB检测肺组织中AKT/NF-κB通路的相关蛋白表达。结果与OVA组相比,OVA+sh-TUG1组肺功能指标、抗炎因子水平显著升高;肺纤维化相关蛋白表达、HYP含量、肺组织炎症评分、炎症细胞计数、促炎因子水平,均显著降低;小鼠肺组织病理状态得到缓解,炎性细胞浸润区域较少,肺组织结构完整,胶原蛋白异常增殖状态减少。结论干扰lncRNA TUG1能缓解OVA小鼠肺功能损伤、肺纤维化程度及免疫紊乱,具有靶向治疗哮喘的潜力,其机制可能与调控AKT/NF-κB通路的相关蛋白有关。

靶向TUG1的mir-29c-3p通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNATUG1影响膀胱癌细胞迁移和侵袭的机制。方法逆转录实时定量PCR检测膀胱癌组织和细胞中TUG1和mir-29c-3p的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用RNA干扰技术下调TUG1的表达后Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力的变化,并检测CAPN7的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用mir-29c-3p类似物过表达mir-29c-3p后在转录及转录后水平检测CAPN7的表达变化。功能回复试验验证CAPN7及TUG1对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响。结果TUG1和mir-29c-3p在膀胱癌细胞和组织中分别表达升高(P=0.01)及减低(P<0.01),同时它们的表达呈现负相关关系(P=0.0109,r^2=0.4295)。TUG1表达下调后可以抑制膀胱癌细胞T24的迁移和侵袭能力(P<0.01)。mir-29c-3p过表达后可以下调CAPN7的表达水平,CAPN7的表达水平与TUG1在膀胱癌中呈正相关关系(P=0.0139,r2=0.4081),荧光素酶报告试验验证了mir-29c-3p可同时靶向调节TUG1及CAPN7,功能回复试验验证了TUG1可以正向调节CAPN7的表达及其对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响(P<0.01)。结论靶向TUG1的mir-29c-3p可通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭。