肿瘤坏死因子α对肾小管上皮细胞PPARγ及辅调节因子表达的影响

目的：探讨在肿瘤坏死因子α（TNF-α）介导的炎症反应中PPARγ及其辅调节因子,包括辅激活因子SRC/p160家族（steroid receptor coactivators/p16family,包括SRC-1、SRC-2、SRC-3）、PGC-1（PPARγcoactivator-1）以及辅抑制因子NCoR（Nuclear receptor corepressor）和单核细胞趋化因子（monocyte chemotactic protein,MCP-1）的表达水平变化,分析其中相互作用机制。方法：体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2）。用TNF-α分别在不同浓度和不同时间点刺激HK-2细胞,收集细胞总mRNA和胞核蛋白。应用Real-time QPCR法和Western蛋白印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测PPARγ及其辅调节因子和单核细胞趋化因子（MCP-1）的表达变化。结果：在不同浓度的TNF-α（0~20ng/ml）刺激24h后,PPARγ、SRC-1、SRC-2、SRC-3和PGC-1均呈总体下调趋势（P〈0.05）,同时NCoR和MCP-1呈显著上调（P〈0.05和P〈0.01）。选择10ng/ml TNF-α为最适刺激浓度,作用不同的时间（0~16h）。发现PPARγ、SRC-1和SRC-2的mRNA在刺激2h后出现显著下调（P〈0.05）,分别是37%、35%和41%（P〈0.05）;而SRC-3和PGC-1mRNA水平仅在刺激1h后就出现显著下调（P〈0.05）,分别是53%和46%（P〈0.05）;NCoR则在刺激16h后出现显著上调（约为对照组的2.16倍,P〈0.01）,之后又缓慢下降;MCP-1在刺激0.5h时出现明显上调（为对照组的2.74倍,P〈0.05）,4h时达到高峰（为对照组的11倍,P〈0.01）。West-ern蛋白印迹法观察到PPARγ和SRC-2在10ng/ml TNF-α刺激4h和2h后出现明显下降。结论：TNF-α可不同程度的抑制HK-2细胞PPARγ及几种辅激活因子（SRC-1、SRC-2、SRC-3、PGC-1）的表达,同时上调辅抑制因子（NCoR）和炎症介质MCP-1的表达。提示PPARγ及其辅调节因子积极参与炎症反应,并且可能在炎症过程中对PPARγ的表达发挥共同的调节作用。