肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白在暴发型肝衰竭肝组织中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白 (TRADD)在暴发性肝衰竭小鼠动物模型肝组织中的表达、分布及在发病机制中的作用。方法 尾静脉注射肿瘤坏死因子α(TNFα)于D 氨基半乳糖 (GalN)致敏的BALB/c小鼠 ,造成暴发性肝衰竭模型 ,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记 (ISEL )技术、琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA梯带观察肝细胞凋亡 ,Envision两步免疫组织化学方法检测TRADD蛋白在肝组织中的表达及分布。结果 对照组、GalN组和TNFα组肝细胞各时点基本没有或有少量TRADD蛋白表达 ,而GalN +TNFα组在 3 .5h时点就有明显表达 ,此时肝细胞凋亡不明显 ,6h时点TRADD蛋白表达最为明显 ,9h时点 ,肝细胞凋亡和坏死非常明显 ,而TRADD蛋白表达虽然很明显 ,但低于 6h时点。TRADD蛋白阳性率分别为 1.3 % ( 1.5h)、3 .0 % ( 3 .5h)、2 3 .4% ( 6h)和 18.6% ( 9h)。结论 TNFα介导的小鼠暴发性肝衰竭动物模型中 ,TRADD蛋白表达增加 ,TRADD蛋白表达先于肝细胞凋亡 ,TRADD蛋白表达和肝细胞凋亡在一定程度上呈正相关 ,提示TNFα通过上调TRADD蛋白表达介导肝细胞凋亡和坏死进而诱发暴发性肝衰竭。

以支架为载体的TRADD基因慢病毒转染对食管良性狭窄的抑制作用

目的观察TRADD基因慢病毒涂层食管支架置入后,TRADD基因对犬食管良性狭窄黏膜的转染效果及对食管狭窄的抑制作用。方法采用随机数字表法,将15只实验犬随机平均分为实验组、对照组及空白组,采用氩离子凝固器制作良性食管狭窄模型,分别置入GFP-TRADD基因慢病毒涂层带膜食管支架、GFP-慢病毒涂层食管支架、普通带膜食管支架,1周后观察支架脱落情况,并取出支架,2、3、4周胃镜下观察狭窄程度。4周后处死实验犬,对狭窄食管组织行病理、Masson三色染色法、免疫荧光检查,分别采用Western blot检测TRADD蛋白在3组食管组织中的表达,同时检测collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA 3种蛋白在食管组织中表达情况。结果置入食管支架1周后,胃镜检查见实验组实验犬带膜支架全部移位进入胃,对照组和空白组实验犬分别有2、3只实验犬其带膜支架移位进入胃中,胃镜取出所有实验犬未移位食管支架。此后每周测量其食管狭窄处直径,可见对照组及空白组实验犬再次出现食管明显狭窄,而实验组再狭窄较轻。采用重复测量设计的多因素方差分析具有统计学差异(P<0.01)。食管狭窄组织HE染色结果表明空白组及对照组肉芽组织及纤维组织增生,而实验组肉芽组织及纤维组织增生较不明显。Masson染色结果表明实验组胶原纤维较空白组、对照组明显减少(P<0.05)。免疫荧光镜检查可见绿色荧光蛋白在黏膜下组织,表明TRADD基因慢病毒及慢病毒均在食管黏膜下生长。Western blot检测实验组可检测GFP-Tradd-Flag蛋白,而空白组和对照组未检测出该蛋白。Western blot检测显示实验组collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA 3种蛋白较其他两组明显降低(P<0.05)。结论以支架作为载体可成功将TRADD慢病毒转入食管黏膜组织中,可抑制狭窄部位组织增生,减少食管狭窄部位再狭窄发生。

大鼠脑缺血再灌注损伤过程中TRAF6的表达变化

目的观察肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法将40只成年健康SD大鼠按照随机对照的原则,分成5组,每组8只:假手术组,缺血组,缺血再灌注2h组(R2h组),缺血再灌注12h组(R12h组),缺血再灌注24h组(R24h组)。构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,RT-PCR和Western blot检测TRAF6的表达变化。免疫组化检测定位TRAF6蛋白。结果与假手术组比较,缺血组和R2h组、R12h组、R24h组TRAF6表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。TRAF6主要定位于神经元细胞细胞质。结论大脑遭受缺血再灌注损伤时,活化的TRAF6参与脑细胞死亡。

NOD2和TRAF2在结直肠癌中的表达

目的:观察结直肠癌组织中核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)和肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)蛋白的表达,探讨自然免疫在结直肠癌的形成和转移中可能所起的作用。方法:选取结直肠癌患者31例,取癌组织(肠癌组)及其邻近的正常肠黏膜组织(对照组),免疫组化法检测其NOD2和TRAF2蛋白的表达。结果:肠癌组NOD2和TRAF2的阳性表达率(分别为61%和68%)显著高于对照组(分别为32%和35%),均P<0.05;且肠癌组的阳性表达水平(OD值分别为0.186±0.034和0.232±0.041)也显著高于对照组(OD值分别为0.151±0.023和0.148±0.035),均P<0.01。在20例伴有腹腔淋巴结转移的肠癌组中,TRAF2的阳性表达率(75%)显著高于不伴有腹腔淋巴结转移者(55%),P<0.05;而两组NOD2的阳性表达率分别为70%和45%,P>0.05。结论:NOD2和TRAF2在结直肠癌组织中表达增强,它们参与了结直肠癌的形成,TRAF2可能还与结直肠癌的转移有关,自然免疫在结直肠癌的形成中可能起着重要作用。

TRADD慢病毒载体构建及其对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的构建抗食管支架术后再狭窄携人TRADD基因慢病毒表达载体,并检测其对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法以购买的人TRADD基因为模板,采用PCR法扩增目的基因片段,PCR产物经回收纯化后与线性化的慢病毒表达载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro重组。重组质粒转化DH5α感受态细胞。菌落PCR鉴定转化子,阳性克隆测序无误后,质粒共转染293FT细胞制备慢病毒。Real-time定量PCR法检测病毒滴度。Western blot检测TRADD-GFP-FLAG融合蛋白的表达。MTT法检测TRADD基因慢病毒对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。结果菌落PCR扩增产物经凝胶电泳,阳性克隆得到1 200 bp片段,基因测序显示重组质粒中TRADD序列与GenBank中序列一致。包装产生的慢病毒转染293 FT细胞48 h后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,病毒滴度为3.22×108IU/ml,Western blot检测到融合蛋白TRADD-GFP-FLAG在293FT细胞中获得有效表达,MTT法证实该融合蛋白具有生物活性,能有效抑制瘢痕成纤维细胞增殖。结论成功构建并包装了pLVX-TRADD-EGFP-3FLAG-Puro慢病毒表达载体,其可明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。

红芪多糖干预内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎的机制

目的探讨红芪多糖(hedysarum polybotrys saccharide,HPS)在内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎发病中的作用及对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)信号转导通路中关键分子肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)及TIR功能区接头蛋白诱导的干扰素β(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β,TRIF)表达的影响。方法选用SPF级健康成年Wistar大鼠40只,随机分为内毒素诱导的葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型组、HPS组、HPS+内毒素组、正常对照组(normal control,NC)组,每组10只。EIU模型组大鼠采用皮下注射1 mg·kg-1内毒素的方法建立大鼠急性前葡萄膜炎动物模型。HPS+内毒素组在内毒素注射前1 h给予腹腔注射HPS 400 mg·kg^-1。HPS组大鼠只注射HPS 400 mg·kg^-1。每2 h用裂隙灯观察大鼠眼前节炎症反应,注射后的0 h、6 h、12 h、18 h、24 h对各组眼部临床炎症反应进行评分。注射后24 h组织病理学检查炎症反应水平。RT-PCR检测核因子-κB、TRAF6及TRIF mRNA的表达。结果 NC组大鼠24 h内眼前节未见炎症反应。注射后24 h,EIU模型组可见虹膜血管扩张明显,瞳孔区大量白色渗出,HPS组仅可见虹膜血管扩张,未见其他眼部炎症反应,HPS+内毒素组大鼠可见虹膜血管扩张和瞳孔缘少量渗出。比较不同组间的大鼠眼部临床炎症反应评分可见,NC组与EIU模型组、HPS+内毒素组、HPS组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001);EIU模型组与HPS+内毒素组、HPS组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);HPS+内毒素组与HPS组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。RT-PCR结果显示,HPS可降低核因子-κB mRNA和TRAF6 mRNA的表达(P<0.001),HPS对TRIF的表达无明显影响(P=0.236)。结论 HPS可能通过抑制TRAF6核酸的表达缓解EIU的炎症反应,HPS对TRIF的表达无明显影响。

NLRP3炎症小体参与Ⅱ期特发性膜性肾病发生的研究

目的观察特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy, IMN)患者肾活检组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptors family, pyrin domain containing, NLRP3),肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor6,TRAF6)以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK1/2)、p38、JUN氨基末端激酶(Jun n-terminal kinase, JNK)信号通路蛋白的表达,分析尿蛋白与NLRP3以及TRAF6与NLRP3之间的相关性。方法收集未行肾上腺皮质激素及免疫抑制剂治疗且肾活检诊断为Ⅱ期IMN患者38例,应用免疫组化方法检测各样本肾组织TRAF6、NLRP3及核因子κB(nuclear factor, NF-κB)、磷酸化ERK1/2MAPK、磷酸化p38MAPK、磷酸化JNK等因子的表达情况,并对正常组与Ⅱ期IMN患者各因子表达情况进行分析,同时收集患者的血液和24 h尿液,分析24 h尿蛋白定量、血肌酐、肌酐清除率、尿素氮等一般临床资料,对尿蛋白与NLRP3以及NLRP3与TRAF6进行相关分析。以10例因肾结核及肾肿瘤行肾切除的患者肾脏组织作为正常对照组。结果 (1)Ⅱ期IMN患者24 h尿蛋白定量、血肌酐明显高于正常组(P<0.01);(2)Ⅱ期IMN患者肾脏中TRAF6、NLRP3蛋白表达明显高于正常组(P<0.01);(3)24 h尿蛋白定量与NLRP3呈正相关(r=0.689,P<0.01),TRAF6与NLRP3呈正相关(r=0.490,P<0.01);(4)NF-κB、磷酸化ERK1/2、磷酸化p38、磷酸化JNK在Ⅱ期IMN均高于正常组(P<0.01)。结论 NLRP3和TRAF6可能参与Ⅱ期IMN的发病,并与NF-κB和ERK1/2、p38、JNK信号通路的激活相关。

TRAF6调控NLRP3炎症小体信号通路的机制研究

目的:研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路调控作用的机制。方法:利用免疫共沉淀和免疫印迹在HEK-293T细胞中研究TRAF6与NLRP3的相互作用;通过检测乳酸脱氢酶(LDH),在THP-1细胞中研究TRAF6对NLRP3炎症小体信号通路活性的影响。结果:TRAF6通过与NLRP3的相互作用增加NLRP3的稳定性,进而促进NLRP3炎症小体信号通路介导的LDH的释放。结论:TRAF6通过增加NLRP3的稳定性正调控NLRP3炎症小体信号通路。

引发细胞凋亡受体的死亡结构域

死亡结构域是存在于肿瘤坏死因子受体Ｉ型和Ｆａｓ等能引起细胞凋亡的细胞膜表面受体胞浆区的一段氨基酸序列，它通过聚合作用将这些膜表面受体与胞浆信号蛋白联系起来，成为引起细胞凋亡或活化的信号转导通路中重要的一个环节。本文综述了死亡结构域及其在细胞信号转导过程中所起作用的最新进展。

NF-κB信号通路抑制结肠炎及炎症相关结肠癌的研究

当前,炎症相关结肠癌的分子机制已受到人们的广泛关注,但其潜在的基因、蛋白及信号通路仍不十分明确,核因子κB(NF-κB)家族成员及其调控基因与恶性肿瘤的转化、肿瘤细胞增殖、存活、血管生成、肿瘤的侵袭转移和治疗的耐药性有关,NF-κB信号通路在结肠炎及炎症相关结肠癌中也发挥着重要作用,探究NF-κB信号通路作用于结肠炎及炎症相关结肠癌发生发展的机制对提高疾病的治疗效果和改善患者的生存质量都具有重要意义。

KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。

外胚层发育不良受体EDA2R的研究进展

外胚层发育不良受体EDA2R(ectodysplasin A2 receptor)是肿瘤坏死因子受体超级家族(tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRSF)中的一个较新的成员,在发育中的胚胎里有很高的表达,在成年人和动物的多个器官组织中也有表达。与其它TNFRSF成员不同,尽管EDA2R蛋白在胞内没有死亡结构域(death domain,DD),但它仍可激活NF-κB和JNK通路,并介导细胞的凋亡。本文广泛回顾了近年来与EDA2R有关的文献,就该蛋白分子的相关研究进展进行综述,以期为与该蛋白相关的分子功能或其介导的相关疾病的研究提供新的思路。

CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1在脑膜炎感染类型鉴别中的应用价值

目的 分析肿瘤坏死因子相关激活蛋白(CD-40L)、白细胞介素-17(IL-17)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及转化生长因子β1(TGF-β1)在脑膜炎感染类型鉴别中的应用价值及其受试者工作特征(ROC)曲线。方法 将2020年1月-2022年9月常州市第四人民医院收治的脑膜炎患者107例纳入研究,其中病毒性脑膜炎52例纳入病毒性脑膜炎组、55例细菌性脑膜炎纳入细菌性脑膜炎组,将同期疑似为中枢神经系统感染但被排除,确诊为躯体化形式障碍的113例患者纳入对照组,回顾性收集研究对象临床资料。分析三组临床资料、脑脊液CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1水平,绘制ROC曲线分析CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1单独及联合检测对细菌性脑膜炎的诊断价值,比较治疗1周后病毒性脑膜炎组、细菌性脑膜炎组脑脊液CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1水平。结果 细菌性脑膜炎组脑脊液CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1水平高于对照组、病毒性脑膜炎组,病毒性脑膜炎组高于对照组(P<0.05);绘制ROC曲线分析CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1联合检测曲线下面积(AUC)为0.922,敏感度为84.39%,特异度为94.36%。结论 脑膜炎患者脑脊液CD-40L、IL-17、NLRP3及TGF-β1水平升高,单独及联合检测均对病毒性脑膜炎、细菌性脑膜炎具有良好的鉴别价值,联合检测的诊断价值更高,可作为临床诊治的靶点。

肿瘤坏死因子α介导肝细胞凋亡其相关死亡区蛋白及mRNA的表达

目的 研究凋亡调节基因 Ｆａｓ相关死亡区蛋白（ＦＡＤＤ） ｍＲＮＡ及蛋白在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ α）介导的凋亡肝细胞中的表达及意义。方法 尾静脉注射ＴＮＦα于Ｄ－氨基半乳糖（ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ／小鼠，造成暴发性肝衰竭模型，用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术、电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ观察肝细胞凋亡，分别用免疫组织化学和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＦＡＤＤ ｍＲＮＡ和蛋白的表达情况。结果ＴＮＦ α可介导ＧａｌＮ致敏小鼠肝细胞凋亡、坏死，最终肝功能衰竭死亡，细胞凋亡率分别为 ０（１．５ｈ）， ０．３％（３．５ｈ），３．１５％（６ｈ）和３．１９％（９ｈ），肝组织中ＦＡＤＤ蛋白表达阳性率分别为０、２％（１．５ｈ），３．３％（３．５ ｈ），１４．２％（６ｈ）和１６．７％（９ｈ），各时间点ＦＡＤＤ ｍＲＮＡ表达的相对单位（ＦＡＤＤ积分值／β－ａｃｔｉｎ积分值）不同，分别为０．４８（正常对照组）、０．６４（３．５ ｈ），０．５９（６ｈ）和０．６５（９ｈ）。结论 ＴＮＦα可通过上调ＦＡＤＤ表达引发肝细胞凋亡的级联过程。

小柴胡汤对CFA大鼠滑膜组织NF-κB信号通路作用的探讨

目的:观察小柴胡汤治疗后弗氏完全佐剂(CFA)大鼠滑膜组织核转录因子(NF)-κB信号通路中肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TARDD),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),IκB激酶-α(IKKα),NF-κB p65蛋白的表达。方法:将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤低、中、高剂量组、雷公藤多苷组。各组于造模后7 d开始灌胃给药,正常组及模型组均予注射用水,小柴胡汤低、中、高剂量组(5. 94,11. 88,23. 76 g·kg-1),雷公藤多苷片(0. 006 3 g·kg-1),分别2 mL/次,每天3次灌胃,连续给药28 d后观察实验大鼠踝关节组织病理学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠右后踝关节组织病理评分显著增加(P <0. 01),NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达显著增高(P <0. 01)。与模型组比较,随着小柴胡汤剂量的增加,实验大鼠右后踝关节组织病理评分显著减少(P <0. 01),在大鼠踝关节组织标本NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65关键蛋白的表达上,小柴胡汤低剂量组蛋白表达明显减低(P <0. 05),而小柴胡汤中剂量组、小柴胡汤高剂量组、雷公藤多苷组蛋白表达显著减低(P <0. 01)。结论:研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以有效地改善滑膜炎症,抑制NF-κB炎症信号通路中关键蛋白的表达,从而阻止炎症而抑制骨侵蚀。

肿瘤坏死因子受体相关蛋白1对大鼠缺氧心肌细胞保护作用的机制

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（TRAP1）对大鼠缺氧心肌细胞保护作用的机制。方法取1～3d龄SD大鼠乳鼠，分离培养心肌细胞，用于以下实验。（1）取细胞，按随机数字表法（分组方法下同）分为TRAP1组和对照组，提取细胞总蛋白。TRAP1组细胞总蛋白加入小鼠抗大鼠TRAP1单克隆一抗，对照组细胞总蛋白加入小鼠来源的同型IgG，免疫共沉淀法和蛋白质谱分析检测TRAP1可能作用的蛋白。（2）取细胞，分为常氧空白对照组、常氧＋TRAP1干扰对照组、常氧＋TRAP1干扰组、常氧＋TRAP1过表达对照组、常氧＋TRAP1过表达组，每组1孔。常氧空白对照组细胞常规培养，后4组细胞分别加入TRAP1RNA干扰空病毒载体、TRAP1RNA干扰腺病毒载体、TRAP1过表达空病毒载体、TRAP1过表达腺病毒载体。另取细胞，分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1干扰组、缺氧＋TRAP1过表达对照组、缺氧＋TRAP1过表达组，每组1孔。各缺氧组细胞同前对应的常氧组细胞处理后，缺氧6h。实时荧光定量RT—PCR检测各组细胞中细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ（COXⅡ）mRNA表达。本实验重复3次。（3）取细胞，分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1过表达对照组、缺氧＋TRAP1过表达组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰对照组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰组，每组3孔。前4组细胞的处理同（2），后2组细胞分别加入COXⅡRNA干扰空病毒载体、COXⅡRNA干扰腺病毒载体转染后，再分别加入TRAP1过表达腺病毒载体。细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性，碘化丙啶和Hoechst33342染色检测细胞死亡率。另取细胞，分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1干扰组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达对照组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达组，每组3孔，前4组细胞的处理同（2），后2组细胞均加入TRAP1RNA干扰腺病毒载体转染后，再分别加入COXⅡ过表达空病毒载体、COXⅡ过表达腺病毒载体，同前检测细胞增殖活性和死亡率。本实验重复3次。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果（1）TRAP1组细胞有TRAP1表达，对照组细胞未见TRAPI表达。TRAP1可能作用的3个蛋白是角蛋白、COXⅡ和预测分子量为13×10^3的未知蛋白。（2）与常氧空白对照组比较，常氧＋TRAP1干扰对照组、常氧＋TRAP1过表达对照组细胞COXⅡmRNA表达量无明显变化（P值均大于0．05），常氧＋TRAP1干扰组细胞COXⅡmRNA表达量明显降低（P〈0．01），常氧＋TRAP1过表达组细胞COXⅡmRNA表达量明显升高（P〈0．01）。缺氧空白对照组细胞COXⅡmRNA表达量较常氧空白对照组明显降低（P〈0．01）。与缺氧空白对照组比较，缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1过表达对照组细胞COXⅡmRNA表达量无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1干扰组细胞COXⅡmRNA表达量明显下降（P〈0．01），缺氧＋TRAP1过表达组细胞COXⅡmRNA表达量明显升高（P〈0．01）。（3）常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1过表达对照组、缺氧＋TRAP1过表达组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰对照组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰组细胞增殖活性分别为0．498±0．022、0．303±0．018、0．313±0．032、0．456±0．03l、0．448±0．034、0．335±0．026，细胞死亡率分另0为（4．7±1．5）％、（24．7±3．1）％、（26．0±2．7）％、（13．3±2．5）％、（12．7±2．1）％、（21．0±1．7）％。与常氧空白对照组比较，缺氧空白对照组细胞增殖活性降低、细胞死亡率增加（P值均小于0．01）。与缺氧空白对照组比较，缺氧＋TRAP1过表达对照组细胞增殖活性、细胞死亡率均无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1过表达组细胞增殖活性升高、细胞死亡率降低（P值均小于0．01）。与缺氧＋TRAP1过表达组比较，缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰对照组细胞增殖活性、细胞死亡率均无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰组细胞增殖活性降低、细胞死亡率增加（P值均小于0．01）。（4）常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1干扰组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXII过表达对照组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达组细胞增殖活性分别为0．444±0．025、0．275±0．016、0．283±0．021、0．150±0．009、0．135±0．011、0．237±0．017，细胞死亡率分别为（3．7±0．6）％、（21．0±2．7）％、（20．3±3．1）％、（31．7±2．5）％、（33．3±3．2）％、（19．3±1．5）％。与缺氧空白对照组比较，缺氧＋TRAP1干扰对照组细胞增殖活性、细胞死亡率均无明显变化（P值均大于0．05）。与缺氧空白对照组和缺氧＋TRAP1干扰对照组比较，缺氧＋TRAP1干扰组细胞增殖活性降低、细胞死亡率增加（P值均小于0．01）。与缺氧＋TRAP1干扰组比较，缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达对照组细胞增殖活性、细胞死亡率均无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达组细胞增殖活性升高、细胞死亡率降低（P值均小于0．01）。结论TRAP1能够正向调节COXⅡmRNA表达，COXⅡ是TRAP1保护缺氧心肌细胞的下游效应分子。

泛素连接酶dTraf2依赖环指结构域正调控果蝇Imd固有免疫反应

为探究果蝇肿瘤坏死因子受体相关因子2(drosophila tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,dTraf2)对免疫缺陷(immune deficiency,Imd)信号通路的调控作用,构建dTraf2和dTraf2^(ΔRING)表达载体以及转基因果蝇。利用双荧光素酶报告基因系统、RT-PCR及黏质沙雷菌(Serratia marcescens,SM)感染果蝇的方法,检测dTraf2对Imd信号通路下游抗菌肽表达、果蝇感染病原菌后存活率以及体内病原菌增殖情况的影响。结果显示,过表达dTraf2可显著促进Imd信号下游抗菌肽的表达;dTraf2正调控Imd信号依赖于其泛素连接酶活性;过表达缺失环指(RING finger,RING)结构域的dTraf2对果蝇Imd信号通路下游抗菌肽的表达无明显影响。过表达dTraf2果蝇感染革兰阴性病原菌后抗菌肽表达水平升高,且其存活率亦升高,并抑制了体内病原菌的增殖;在免疫组织里敲低dTraf2可明显抑制Imd信号依赖的果蝇固有免疫反应。该研究提示,dTraf2依赖其RING结构域正向调控果蝇Imd固有免疫反应。