基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

脊柱结核术后TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17的变化及与预后的相关性研究

目的分析脊柱结核术后Toll样受体(TLR)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17的变化及与预后的相关性。方法选择2021年1月—2022年12月收治的60例接受手术治疗的脊柱结核患者作为观察组,另选60例非脊柱结核且行脊柱手术的患者作为对照组(部分病例由基金项目中合作医院提供)。检测两组患者血清及病灶组织TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平。根据观察组患者术后6个月的预后情况,分为预后良好组和预后不良组,比较两组术前及术后6个月的血清TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平,使用Pearson相关性分析评价脊柱结核患者术前血清TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平与术后6个月改良巴氏指数(MBI)量表评分的关系,受试者工作特征(ROC)曲线分析术后血清TLR-4、TNF-α、IL-6联合IL-17对脊柱结核术后预后不良的预测效能。结果观察组术前血清及病灶组织的TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良组术前血清TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平均高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后6个月,预后良好组血清TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平较术前明显降低,与预后不良组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析,脊柱结核患者术前血清TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17表达水平与术后6个月MBI量表评分呈负相关(P<0.05);经ROC曲线分析,术前血清TLR-4、TNF-α、IL-6联合IL-17预测脊柱结核术后预后不良的ROC曲线下面积为0.921。结论脊柱结核术后血清TLR-4、TNF-α、IL-6、IL-17较术前明显降低,与预后密切相关,术前血清TLR-4、TNF-α、IL-6联合IL-17预测预后不良的效能较好,值得临床予以重视。

TRAF4促进肿瘤发生发展的研究进展

肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor-associated factor 4,TRAF4)是TRAFs(tumor necrosis factor receptor-associated factors)蛋白家族的成员之一,其作为信号转导的接头分子,具有E3泛素连接酶活性,可激活多种下游信号通路,在神经发生与胚胎发育、免疫调节与炎症反应、氧化损伤及代谢等多种生理过程中发挥着重要的调控作用。TRAF4在多种肿瘤中异常高表达,并调控肿瘤的发生发展。本文根据TRAF4的生理和病理调控功能,对TRAF4与肿瘤发生和发展的关系进行综述,为该基因在肿瘤治疗中的应用提供参考。

出血性脑卒中患者血清miR-4443、TRAF4相对表达量变化的临床意义

目的探讨出血性脑卒中患者血清miR-4443、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)4水平变化,并分析其临床意义。方法选取2020年6—12月保定市第一中心医院出血性脑卒中患者77例(脑卒中组)。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估患者神经功能缺损程度,根据NIHSS评分将77例患者细分为轻度组(<6分,29例)、中度组(6~13分,27例)、重度组(>13分,21例)。对脑卒中患者随访6个月,根据随访结果将77例患者细分为预后良好组(32例)和预后不良组(45例)。另选取同期健康体检者48名(健康对照组)。采用Pearson相关分析评估miR-4443、TRAF4与NIHSS评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-4443、TRAF4单独和联合检测判断出血性脑卒中患者预后的效能。结果与健康对照组比较,脑卒中组miR-4443水平显著降低(P<0.01),TRAF4水平显著升高(P<0.001)。脑卒中组miR4443水平随病情严重程度的升高而降低(P<0.001),TRAF4水平随病情严重程度的升高而升高(P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,出血性脑卒中患者NIHSS评分与miR-4443水平呈显著负相关(r=-0.857,P<0.001),与TRAF4水平呈显著正相关(r=0.805,P<0.001)。与预后良好组比较,预后不良组miR-4443水平显著降低(P<0.05),TRAF4水平显著升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-4443、TRAF4联合检测判断出血性脑卒中患者预后的曲线下面积(AUC)为0.964,显著高于单项指标检测(AUC分别为0.686、0.790,P<0.05)。结论血清miR-4443、TRAF4水平与出血性脑卒中患者病情严重程度明显相关,对患者预后评估也有一定的价值。

肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4的表达与患者免疫功能、炎症反应因子及预后的关系

目的探究肺癌组织中内质网氧化物蛋白(ERO1L)、肿瘤坏死因子受体4(TNFRSF4)的表达与肺癌患者免疫功能、炎症反应因子及其预后的关系。方法选取2018年7月~2020年7月于本院进行手术治疗的108例肺癌患者,收集术中留取的癌组织和癌旁组织标本。采用qRT-PCR检测ERO1L和TNFRSF4的mRNA相对表达量;使用免疫组织化学法检测ERO1L和TNFRSF4蛋白表达情况,分析二者表达水平与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析ERO1L、TNFRSF4蛋白表达水平与患者预后的关系。肺癌患者预后生存率的影响因素采用Cox多因素分析。结果肺癌患者癌组织中ERO1L mRNA表达水平显著高于癌旁组织,TNFRSF4 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中ERO1L蛋白高表达率显著高于癌旁组织,TNFRSF4蛋白高表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。ERO1L蛋白高表达组患者CD3^(+)、CD4^(+)显著低于低表达组(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α显著高于低表达组(P<0.05);TNFRSF4蛋白高表达组患者CD3^(+)、CD4^(+)显著高于低表达组,IL-1β、IL-6、TNF-α显著低于低表达组(P<0.05)。ERO1L高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=6.100,P=0.014),TNFRSF4高表达组患者3年累积生存率显著高于低表达组(Log rankχ^(2)=11.296,P=0.001)。肺癌组织的低分化、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、ERO1L高表达、TNFRSF4低表达是影响患者生存率的危险因素。结论肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4表达与患者免疫功能、炎症因子以及预后具有一定关系。

活心丸(浓缩丸)下调TLR4/TNF-α表达减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的探讨活心丸(浓缩丸)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)的影响及机制。方法选取ApoE^(-/-)小鼠,饲以高脂饮食复制As模型,采用不同浓度活心丸和(或)Toll样受体4(TLR4)抑制剂处理,随机分为对照组、活心丸处理组、TLR4抑制剂处理组、活心丸和TLR4抑制剂共处理组。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察As模型鼠主动脉窦病变情况;油红O(ORO)染色观察As模型鼠主动脉窦及主动脉脂质蓄积情况;免疫组织化学法(IHC)检测As模型鼠主动脉窦TLR4、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达情况。结果与对照组比较,活心丸减轻As模型鼠主动脉窦病变,减少主动脉病变处脂质蓄积,降低主动脉窦狭窄程度,差异均有统计学意义(P<0.05);活心丸还下调As模型鼠主动脉窦TLR4和TNF-α表达(P<0.05),TLR4抑制剂与活心丸作用具有协同性。结论活心丸可以减轻ApoE^(-/-)小鼠As病变,其机制可能与下调TLR4、TNF-α表达以及调控炎症反应相关。

Toll样受体4基因单核苷酸多态性与白内障发病的相关性研究

目的研究Toll样受体4(TLR4)基因单核苷酸多态性(SNPs)与白内障发病的相关性。方法收集皖南医学院第二附属医院2021年1—12月100例年龄相关性白内障(ARC)病例为观察组,86例年龄、性别相匹配的无亲属关系的健康志愿者为对照组,采用单碱基延伸法(SNaPshot)对TLR4两个SNPs位点rs4986790及rs4986791进行基因分型,检验两组2个SNPs基因型与等位基因频率,分离被研究对象外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附法(ELISA)检测其PBMC上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平,分析其与ARC病人TLR4基因SNPs之间的关系。结果Hardy-Weinberg平衡试验结果提示,两组病人TLR4基因rs7986790位点及rs4986791位点的基因型频率分布实际值与理论值符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05);观察组与对照组TLR4基因rs7986790位点基因型及其等位基因占比比较,差异有统计学意义(P<0.05)。rs7986790基因分型为GA及GG者PBMC上清液中TNF-α及IL-6水平[(22.36±4.15)μg/L、(846.69±179.68)ng/L]均高于基因型为AA者[(17.02±2.36)μg/L、(613.45±163.59)ng/L](P<0.05)。结论ARC病人TLR4基因rs7986790位点基因型分布与正常者间存在差异,rs7986790位点等位基因G可能通过促进炎症反应,增加ARC患病风险。

重症急性胰腺炎患者外周血TLR4、TRAF6的表达及与并发肝损伤的关系

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)水平在重症急性胰腺炎(SAP)外周血中的表达及与并发肝损伤的关系。方法选取2018年10月—2021年10月厦门长庚医院收治的187例SAP患者,依据是否发生肝损伤分为肝损伤组和无肝损伤组。对比肝损伤组和无肝损伤组临床资料、TLR4和TRAF6 mRNA相对表达量。采用多因素Logistic逐步回归模型分析SAP患者发生肝损伤的相关因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA及两者联合检测对SAP患者肝损伤发生的预测价值。结果187例SAP患者并发肝损伤62例,未并发肝损伤125例。肝损伤组急性胰腺炎床旁严重度指数(BISAP)评分、脂肪酶、淀粉酶(AMY)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA相对表达量高于无肝损伤组(P<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:BISAP评分[OR=2.892(95%CI:1.482,5.645)]、TLR4 mRNA[O^R=3.334(95%CI:1.710,6.512)]、TRAF6 mRNA[O^R=3.059(95%CI:1.567,5.970)]均为影响SAP患者肝损伤发生的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA及两者联合预测SAP患者肝损伤发生的敏感性分别为80.65%(95%CI:0.621,0.872)、77.42%(95%CI:0.546,0.824)、75.81%(95%CI:0.534,0.819),特异性分别为73.60%(95%CI:0.503,0.796)、80.80%(95%CI:0.617,0.863)、99.20%(95%CI:0.725,0.998),曲线下面积分别为0.792(95%CI:0.727,0.848)、0.824(95%CI:0.762,0.876)、0.856(95%CI:0.797,0.903)。结论外周血TLR4、TRAF6表达均与SAP患者并发肝损伤有关,且外周血TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA联合检测对SAP患者发生肝损伤的预测效能较高。

基于TLR4/MyD88/TRAF6信号通路探究电针对类风湿关节炎大鼠滑膜组织的影响

目的观察电针干预通过调控Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)通路对类风湿关节炎大鼠滑膜组织的影响,探究TLR4/MyD88/TRAF6信号通路作为电针干预新靶点的可能性。方法将48只Wistar大鼠随机分为健康组、模型组、电针组和电针通路激活组,每组12只。制备类风湿关节炎大鼠模型,术后采用关节炎指数评分将符合类风湿关节炎诊断标准的大鼠进行后续实验,同时采用关节炎指数评估干预前后关节炎的改善情况。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法检测4组大鼠关节损伤及滑膜组织状况,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测关节液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和滑膜组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的含量,用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率。采用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白印迹(Western blot,WB)法检测4组大鼠滑膜组织TLR4、MyD88、TRAF6 mRNA蛋白的表达。结果健康组关节结构完整无病变;与健康组比较,模型组大鼠关节结构不完整,出现滑膜增生,关节炎指数评分显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β和PCNA的含量、软骨细胞凋亡率及滑膜组织中TLR4、MyD88和TRAF6 mRNA蛋白的表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,电针组关节结构相对完好,关节炎指数评分显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-1β和PCNA的含量、软骨细胞凋亡率及滑膜组织中TLR4、MyD88和TRAF6 mRNA蛋白的表达均显著降低(P<0.05);与电针组比较,电针通路激活组关节炎指数评分显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β和PCNA的含量、软骨细胞凋亡率及滑膜组织中TLR4、MyD88和TRAF6 mRNA蛋白的表达均显著升高(P<0.05)。结论电针干预可通过调控TLR4/MyD88/TRAF6信号通路,改善类风湿关节炎,并保护滑膜组织。

基于TLR4/MyD88/NF-kB信号通路探讨追风透骨胶囊减缓兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用机制

目的 观察追风透骨胶囊对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)模型关节软骨退变的干预作用,并基于Toll样受体4(Toll like receptor 4, TLR4)/髓细胞分化初级反应蛋白88(myeloid differentiation primary response protein 88, MyD88)/核因子kappa-B(nuclear factor kappa-B, NF-κB)信号通路探讨追风透骨胶囊的可能作用机制。方法 从50只6月龄雄性新西兰兔中随机选取10只作为正常组,其余40只为KOA造模组,用改良Videman造模法制备兔KOA模型。模型验证后,从正常组中随机选取6只作为空白组(A组),KOA造模组抽取30只随机分为模型组(B组)、硫酸氨基葡萄糖组(C组)、追风透骨胶囊低剂量组(D组)、追风透骨胶囊中剂量组(E组)、追风透骨胶囊高剂量组(F组),每组6只。A、B组予蒸馏水灌胃,C、D、E、F组予相应药物灌胃,疗程均为6周。给药结束后,取造模侧膝关节软骨,予大体及HE染色观察,并用Pelletier评分及Mankin评分评估;以Western blot、RT-PCR法检测软骨中TLR4、My D88、NF-κB蛋白及其mRNA的表达;免疫组化法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的含量。结果 与A组比较,B组膝关节软骨破坏明显,Pelletier评分及Mankin评分均升高(P<0.01),软骨中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及其mRNA表达水平均上调(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高(P<0.01)。与B组比较,C、D、E、F组的软骨损伤程度轻,软骨Mankin评分均降低(P<0.01),软骨中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及m RNA表达水平均下调(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低(P<0.01),此外,F组软骨Pelletier评分较B组降低明显(P<0.05)。结论 追风透骨胶囊能延缓改良Videman造模法诱导的兔KOA模型关节软骨退变,其作用机制可能与下调软骨中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及m RNA的表达,抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的活化,降低IL-1β、IL-6、TNF-α在软骨中的含量,从而减轻炎症反应相关。

柚皮素对过敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜组织TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的探究柚皮素对过敏性鼻炎(AR)模型大鼠鼻黏膜组织Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子α(TNF-α)信号通路的影响。方法建立AR大鼠模型,48只大鼠以随机数字表法平均分为4组:模型组、柚皮素低(100 mg/kg)剂量组、柚皮素高(200 mg/kg)剂量组、柚皮素高(200 mg/kg)剂量+脂多糖(LPS)(TLR4通路激活剂,0.4 mg/kg)组,另取12只SD大鼠设为对照组。以药物分组干预治疗后,观察大鼠鼻炎症状并进行评分;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠鼻黏膜组织病理形态改变;试剂盒测定大鼠血清IgE及炎性因子白细胞介素(IL)-17、IL-18水平;免疫组织化学染色检测大鼠鼻黏膜组织CD19、CD23表达;免疫印迹法检测大鼠鼻黏膜组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠鼻黏膜组织发生严重病理损伤,鼻炎症状评分、血清IgE、IL-17及IL-18水平、鼻黏膜组织CD19、CD23阳性细胞比例、鼻黏膜组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,柚皮素干预组大鼠鼻黏膜组织病理损伤均减轻,鼻炎症状评分、血清IgE、IL-17及IL-18水平、鼻黏膜组织CD19、CD23阳性细胞比例、鼻黏膜组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达水平均降低,且柚皮素高剂量组大鼠各指标改变程度更强;与柚皮素高剂量组相比,柚皮素高剂量+LPS组大鼠鼻黏膜组织病理损伤加重,鼻炎症状评分、血清IgE、IL-17及IL-18水平、鼻黏膜组织CD19、CD23阳性细胞比例、鼻黏膜组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论柚皮素可通过抑制TLR4/NF-κB/TNF-α通路表达而减轻超敏反应及炎症,从而缓解鼻黏膜组织损伤,改善AR大鼠症状。

脑络欣通降低局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质TLR4及TRAF6和TNF-α蛋白的表达

目的观察脑络欣通对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法采用改良线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠右侧脑缺血模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通心络组和脑络欣通组,每组30只;再分为3、7、14 d三个亚组,灌胃给药。Western blot法检测缺血侧额顶叶皮质TLR4、TRAF6的蛋白水平,免疫组织化学染色法检测缺血侧额顶叶皮质缺血半暗带TNF-α的表达。结果与假手术组比较,模型组3、7、14 d,TLR4、TRAF6蛋白水平显著升高;与模型组比较,各治疗组3、14 d的TLR4、TRAF6蛋白水平显著降低,脑络欣通组7 d显著降低;与通心络组比较,脑络欣通组3、7 d的TLR4的蛋白水平降低,14 d的TLR4蛋白水平升高。与假手术组比较,模型组3、7 d的TNF-α蛋白表达的阳性面积显著升高;与模型组比较,脑络欣通组和通心络组7、14 d的TNF-α蛋白表达的阳性面积显著降低,脑络欣通组3 d的TNF-α蛋白表达的阳性面积显著降低;与通心络组比较,脑络欣通组各时间点TNF-α蛋白表达的阳性面积均无明显差异。结论脑络欣通通过降低TLR4、TRAF6、TNF-α蛋白表达,减轻炎症反应,减轻脑缺血再灌注损伤。

TRAF4蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

背景与目的:对肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor-associated factor4,TRAF4)在乳腺癌中表达的研究存在争议。本研究探讨TRAF4在正常乳腺组织、乳腺癌组织及不同侵袭能力乳腺癌细胞系中的表达情况。方法:应用免疫组化方法检测TRAF4在70例乳腺癌组织和14例正常乳腺组织中的表达。应用Westernblot方法检测TRAF4在乳腺癌细胞系MDA-MA-231(高侵袭)和MCF-7(低侵袭)中的表达。结果:TRAF4在正常乳腺组织中呈浆、核阳性表达。其浆阳性率在正常乳腺组织(78.57%)、非浸润性导管癌(88.57%)和浸润性导管癌(91.43%)中逐渐增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。而核阳性率在正常乳腺组织(64.28%)中显著高于非浸润性导管癌(28.57%,P<0.01),在非浸润性导管癌中高于浸润性导管癌(5.7%,P<0.05)。TRAF4总蛋白在乳腺癌高侵袭细胞系中的表达量高于低侵袭细胞系,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TRAF4在乳腺癌细胞核中表达明显降低,与乳腺癌侵袭性相关。

TRAF6 shRNA对LPS/TLR4信号传导通路的体外干预作用

目的:体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因TRAF6的表达对RAW264.7细胞增殖的影响,初步探讨TRAF6-shRNA对LPS/TLR4胞内信号转导的影响.方法:构建靶向抑制小鼠TRAF6的shRNA的真核表达载体,转染RAW264.7细胞后培养48h,予以终浓度为100ng/mL的LPS刺激,0、4、8h和16h后收集细胞上清,同时设空白对照及地塞米松阳性对照组,ELISA法测定上清液中TNF-α、IL-1β、TGF-β1,Real-timePCR方法检测TRAF6、IL-6、COX-2mRNA,Westernblot检测细胞核内NF-κBp65.结果:转染TRAF6-shRNA48h后,TRAF6mRNA及蛋白表达明显受到抑制,其抑制率分别为79.17%、68.74%.MTT法检测结果显示,重组质粒转染72h内对细胞增殖无明显的抑制.LPS刺激后,TNF-α、IL-1β、TGF-β1表达量都有明显变化(P<0.01),其中TNF-α、IL-1β在8h达高峰,TGF-β1在16h达高峰,TRAF6基因沉默后,以上细胞因子增长率明都显下降(P<0.01).实验结果显示,TRAF6基因沉默明显能下调IL-6、COX-2mRNA表达,并能抑制LPS激活的NF-κB核转位.结论:重组质粒TRAF6-shRNA能有效降低RAW264.7细胞中基因TRAF6mRNA及蛋白的表达,并对内毒素炎症反应具有明显的抑制效应.

七氟烷后处理对脑缺血-再灌注大鼠脑组织TLR4、TRAF6表达的影响

目的观察七氟烷后处理对脑缺血-再灌注大鼠脑组织toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达的影响。方法选取健康SD雄性大鼠随机分为假手术组(C组)、缺血-再灌注组(I-R组)、1. 0MAC七氟烷后处理组(S1组)、1. 5 MAC七氟烷后处理组(S2组),根据再灌注时间分为6 h、12 h、24 h、48 h亚组(n=10)。采用线栓法制备缺血-再灌注模型。C组除不插线栓进行缺血操作外,其余步骤同脑缺血-再灌注建模操作。I-R组行脑缺血2 h,并根据分组进行持续再灌注6 h、12 h、24 h、48 h。S1、S2组在I-R组的基础上进行七氟烷后处理。对4组大鼠进行神经功能缺损评分,TCC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织TLR4、TRAF6蛋白表达水平,荧光定量PCR检测TLR4、TRAF6 mRNA表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与C组各亚组比较,I-R组可见明显神经功能缺损、缺血侧大脑半球梗死、脑组织细胞凋亡,七氟烷后处理大鼠神经功能缺损评分显著降低、大脑梗死体积显著减小、细胞凋亡指数(AI)显著降低(P <0. 05),且S2组显著优于S1组(P <0. 05);组内比较,再灌注24 h组脑梗死体积、细胞凋亡指数(AI)显著高于其他亚组(P <0. 05)。与C组各亚组比较,I-R组相应亚组TLR4、TRAF6蛋白及mRNA表达显著升高(P <0. 05),七氟烷处理后有所降低(P <0. 05),且S2组显著低于S1组(P <0. 05);组内比较,再灌注后24 h组TLR4、TRAF6蛋白及mRNA表达显著高于其他亚组(P <0. 05)。结论七氟烷后处理可减轻缺血-再灌注大鼠脑组织损伤及神经功能缺损,降低脑组织TLR4及TRAF6的表达。

TRAF4沉默对食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）靶向沉默肿瘤坏死因子受体相关因子4（TRAF4）基因表达对人食管癌细胞恶性行为的影响。方法选取对数生长期Eca-109细胞并行脂质体法高效转染2条靶向沉默TRAF4的siRNA（siTRAF4-1、siTRAF4-2）,采用实时定量PCR检测转染后的TRAF4 mRNA水平以筛选沉默效果较好的siRNA为沉默组,同时设阴性对照组（转染阴性siRNA序列）和空白对照组。采用噻唑蓝（MTT）法检测转染24、48、72、96h的吸光度值以计算各组增殖抑制率,AnnexinⅤ-FITC/PI双染、Caspase-3FITC单染或PI单染流式细胞术检测转染后的凋亡率、Caspase-3活化率和细胞周期分布情况。结果靶向沉默TRAF4 24-96h内,转染siTRAF4-1、siTRAF4-2的Eca-109细胞中TRAF4mRNA水平均低于未转染或转染对照siRNA的细胞,且转染siTRAF4-1、siTRAF4-2后的沉默率均高于转染对照siRNA的细胞（均P〈0.05）;后续试验选取沉默率较高的siTRAF4-1进行研究。与空白对照组和阴性对照组相比,沉默组的增殖抑制率、凋亡率及Caspase-3活化率均升高,差异有统计学意义（均P〈0.05）;沉默组转染96h的G0/G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组,而S、G2/M期细胞比例低于其余两组,以上差异均有统计学意义（均P〈0.05）;空白对照组和阴性对照组以上指标的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论通过siRNA靶向沉默TRAF4基因表达的效果较好,可抑制细胞增殖并诱导凋亡、Caspase-3活化和细胞周期G0/G1期阻滞,为食管癌靶向治疗提供了方法学基础。

RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究

目的研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4(p90 ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor associated factor 4,TRAF4)在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测RSK4和TRAF4在HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况。用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达。结果 RSK4 mRNA、TRAF4 mRNA在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量最高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231细胞,RSK4 mRNA、TRAF4 mRNA在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性(rRSK4=0.92,P<0.01;rTRAF4=0.82,P<0.01);ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100。在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4表现出负相关(r1=-0.81,P<0.01);在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4同样呈现出高度负相关(r2=-0.84,P<0.01)。结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用。

TRAF4在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)在胃癌发生、发展中的作用.方法:应用组织芯片采用免疫组织化学法检测10例正常胃组织、45例胃癌及癌旁组织中TRAF4的表达,TUNEL法检测TRAF4阳性胃癌及正常胃组织中细胞凋亡.结果:TRAF4在正常胃组织中呈浆、核阳性表达.其浆阳性率在正常胃组织(80%)、不典型增生(93.3%)和胃癌(95.6%)中逐渐增高,但差异无统计学意义.而核阳性率在正常胃组织中高于胃癌(70.0%vs35.6%,P<0.05),在高分化胃癌中高于低分化胃癌(71.4%vs26.1%,P<0.05),在无淋巴转移胃癌中高于伴有淋巴转移(52.4%vs20.8%,P<0.05).TRAF4表达阳性正常胃组织细胞凋亡百分率高于胃癌组织(75vs37.2,P<0.05).结论:TRAF4在胃癌中具有较低核表达,且其核表达与胃癌分化程度呈正相关,与胃癌转移呈负相关,同时可能抑制胃癌凋亡.

组织芯片技术在检测胃癌组织中TRAF4表达中的应用

目的探讨组织芯片技术诊断胃癌的价值。方法采用免疫组化法检测胃癌组织芯片(胃正常组织10份、增生组织45份、胃癌组织45份)中肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)的表达。结果 TRAF4胞质阳性率在正常组织、增生组织和胃癌组织中逐渐增高,但差异无统计学意义。胞核阳性率逐渐降低,正常组织显著高于胃癌组织,P<0.05;胃癌组织中高分化者显著高于低分化者(P<0.05),无淋巴转移者显著高于有淋巴转移者,P<0.05。结论组织芯片可大规模、高效率检测胃癌组织样本,具有快速、方便、经济、准确等特点,可用于胃癌的早期诊断。

针灸调控TNF-α/TLR4/NF-κB改善顺铂小鼠肝损伤的作用机制

目的通过观察针灸对顺铂(Cisplatin,DDP)所致肝损伤小鼠与肝细胞炎症反应相关的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达含量的变化,以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和谷氨酸脱氢酶(GLDH)活性变化,并结合小鼠肝脏病理变化,阐释针灸对DDP引起肝损伤小鼠的作用机制。方法选用SPF雄性KM小鼠,随机分为4组,按照10 mL·kg^(-1)空白组腹腔注射0.9%NaCl溶液,其余3组按照体质量腹腔注射同剂量DDP溶液,24 h后模型成功。干预组采用“大椎”“肝俞”“肾俞”“足三里”,分别给予针刺和艾灸干预,其余两组陪同固定不干预,每天1次,持续5天。断食1天后取材,生化检测血清中ALT、AST、GLDH含量,Western blot测定肝脏中TNF-α、TLR4、NF-κB蛋白表达含量。结果与空白组比,模型组血清中ALT、AST、GLDH活性增高,肝脏中TNF-α、TLR4、NF-κB蛋白表达升高,均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,针刺组和艾灸组ALT、AST、GLDH活性和TNF-α、TLR4、NF-κB蛋白表达均降低,均有统计学意义(P<0.05)。与针刺组比,艾灸组血清中ALT、AST活性降低,GLDH活性升高,TNF-α蛋白表达降低,但均无统计学意义(P>0.05),TLR4、NF-κB蛋白表达降低,有统计学意义(P<0.05)。结论针灸可能通过抑制TNF-α、TLR4的过度表达,从而降低NF-κB过度表达,减少炎症因子的过度释放,从而减轻DDP小鼠肝脏炎症的发生,降低DDP对肝脏产生的毒副作用,对肝脏起到有效的保护作用。