TNF-α对大鼠Leydig细胞的作用及机制研究

目的 观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制。方法 通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养。HE染色进行细胞形态学观察。Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α，使其终浓度达到0．1、1、10、100ng／ml，分别在培养的第1、2．3、4天取上清，通过放免法测定上清液中睾酮的含量，应用MTT法测定细胞增殖情况，流式细胞术与丫啶橙（AO）染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况。结果 原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70％～80%。HE染色后可见细胞胞质含量丰富，含有分泌颗粒，胞核圆。TNF-α在0．1～100ng／ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌。0．1、1、10、100ng／ml TNF-α作用24h后，对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22．03％、34．98％、52．95％、74．83％。各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势，但除100ng／ml组外，其他各组各时间点比较差异无统计学意义。高浓度TNF-α（10、100ng／m1）组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用，其增殖抑制率分别达到38．35％±4．17％、76．35％±8．65％，而凋亡率分别为13．23％±1．11％、26．43％±5．82％，与对照组比较有统计学意义（P〈0．01）。AO染色见高浓度TNF-α（10、100ng／ml）组出现明显的细胞凋亡。结论TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用，在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关。