食管癌组织多种肿瘤抑制基因微卫星多态位点的杂合丢失和不稳定

目的：研究ｐ５３ ，ｐ１６， Ｒｂ ， Ｄ Ｃ Ｃ， Ａ Ｐ Ｃ 等多种已知抑癌基因在食管癌组织中的缺失及与临床病理的关系。方法：采用 Ｐ Ｃ Ｒ 银染技术，检测高发区３６ 例配对的食管癌标本１４ 个微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 多态位点的杂合丢失和不稳定性。结果：分别与ｐ５３ ，ｐ１６ 及 Ｒｂ 连锁的 Ｄ１７ Ｓ２６１ ， Ｄ９ Ｓ１６２ 、 Ｄ９ Ｓ１７１、 Ｉ Ｆ Ｎ Ａ 和 Ｄ１３ Ｓ１７０ 均有高频率的杂合丢失（ ＞ ２５ ％ ） ；两个以上的位点异常者占８６％ ，ｐ Ｔ Ｎ Ｍ Ⅲ期患者微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 多态位点异常的频率显著高于Ⅱ期患者（ Ｐ＜ ０．０１） 。结论：同一病例有多个微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 多态位点异常提示食管上皮癌变涉及多个抑癌基因的失活。

INK4系列抑癌基因(p16、p15、p18、p19)在白血病中的甲基化

目的 探讨 p1 6基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系 ,进一步阐明白血病发病机制 ,监测发病过程。 方法 采用甲基化敏感限制内切酶 Hpa 或 Msp 结合 PCR技术研究白血病患者 p1 6、p1 5、p1 8、p1 9基因甲基化状况 :(1 )研究不同类型、不同阶段白血病 p1 6基因家族外显子 1和 /或外显子 2纯合子缺失 ;(2 )用REP- PCR分别对上述病例中无外显子 1缺失的病例进行甲基化研究 ,探讨甲基化发生频率 ,分析与白血病发病关系。 结果 p1 6、p1 5基因外显子 1在急性白血病 (AL组 )甲基化率分别为 35 .2 9% ,4 8.6 5 % ;急性非淋巴细胞白血病 (ANL L组 )为 2 5 % ,37.5 % ;急性淋巴细胞白血病 (AL L组 )为 6 0 % ,6 9.2 3% ;初治 AL组为 2 9.0 9% ,4 2 .1 0 % ;复发 AL组为 6 1 .5 4 % ,70 .5 9% ;慢性粒细胞白血病 (CML )慢性期、急变期、白血病完全缓解 (CR- AL )、对照组均无甲基化。p1 8、p1 9基因无论在 AL组、AL L组、ANL L组、复发 AL组、初治 AL组 ,或是在 CML的慢性期、急变期、CR- AL、对照组均无甲基化。 结论 (1 )在 p1 6基因家族中 ,p1 6、p1 5基因甲基化在 AL的发生频率较高 ,AL L甲基化率明显高于 ANL L ,以复发 AL L组最高。 p1 8、p1 9基因在 AL组中未见甲基化。 (2 )在 AL L中 。

鼻咽癌中nm23-H_1 mRNA及蛋白的表达

目的：探讨鼻咽癌中ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ和蛋白的表达及临床意义。方法：收集７８例低分化鼻咽癌初治患者新鲜鼻咽部活检标本，用原位杂交检测ｎｍ２３Ｈ１的ｍＲＮＡ表达并用免疫组化检测其蛋白质表达。结果：伴有淋巴结转移的５３例标本中，ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ和蛋白的表达率分别为４０％和３６％；而２５例无淋巴结转移的两者表达率均为９６％。ｎｍ２３Ｈ１阴性表达组的淋巴结转移率显著高于阳性表达组（Ｐ＜０．００１）。结论：①ｎｍ２３Ｈ１基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达与鼻咽癌淋巴结转移潜能呈负相关。②鼻咽癌中ｎｍ２３Ｈ１在ｍＲＮＡ及蛋白层次的表达基本一致。结果提示ｎｍ２３Ｈ１基因的表达在抑制鼻咽癌转移过程中起着一定的作用。

脑胶质瘤抑瘤基因p53、p16缺失、变异与肿瘤恶性程度的相关性

目的：探索肿瘤抑制基因ｐ５３、ｐ１６缺失、变异与肿瘤恶性程度的关系。方法：对３１例脑胶质瘤的原发肿瘤标本行ｐ５３、ｐ１６蛋白检测，用免疫组化ＬＳＡＢ法。结果：星形细胞瘤Ⅰ级１７例中，ｐ１６１０例表达３０％以下，７例不表达，ｐ５３４例表达３０％以下，１３例不表达；星形细胞瘤Ⅱ级９例中，ｐ１６１例表达３０％以下，８例不表达，ｐ５３３例表达３０％以下，１例表达３０％～６０％，５例不表达；星形细胞瘤Ⅲ级２例，ｐ１６均不表达，ｐ５３１例表达３０％以下，１例表达３０％～６０％；星形细胞瘤Ⅳ级３例，ｐ１６均不表达，ｐ５３表达均在３０％～６０％。结论：ｐ５３失活主要见于恶性胶质瘤和恶性发展中的胶质瘤，肿瘤的恶性程度越高，ｐ５３蛋白失活越严重。偏良性的胶质瘤ｐ５３呈轻度阳性表达时，提示肿瘤可能处于早期恶性变过程中。ｐ１６缺失主要见于星形细胞瘤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级等恶性胶质瘤。

骨肉瘤中抑癌基因p33/ING1 mRNA的表达及意义

目的研究骨肉瘤中抑癌基因p33/ING1 mRNA的表达与临床病理特征的关系。方法应用RT-PCR技术对40例骨肉瘤标本及其相邻的正常软组织、2例骨肉瘤细胞株(OS732和SaOS2)和1例原代培养的骨膜细胞中ING1基因的表达进行研究。结果在40例骨肉瘤标本中,27例(67.5%)检测到p33/ING1 mRNA较其相邻的正常软组织高表达。p33/ING1 mRNA高表达患者肿瘤转移发生率明显高于低表达的患者,两者比较差异有显著意义(t=2.52,P<0.05);而在临床分期方面差异无显著意义。2例骨肉瘤细胞株与原代培养的骨膜细胞相比较,1例(OS732)检测到p33/ING1 mRNA的低表达,1例(SaOS2)检测到p33/INC1 mRNA的高表达。结论抑癌基因p33/ING1mRNA的高表达在骨肉瘤的发生发展中起到一定作用,且与肿瘤转移有关。

免疫组化及SSCP法对外阴癌中p53的检测

目的 :研究外阴癌中p5 3的表达及突变情况 ,以探索 p5 3突变与外阴癌发生的相关性。方法 :采用 p5 3单克隆抗体DO 7检测 p5 3的表达情况 ,采用SSCP银染方法检测p5 3第 5 8外显子突变情况。结果 31例外阴癌中 p5 3阳性表达 16例 ,占 5 1.6 %。SSCP银染方法检测 p5 3突变也有 16例 ,占 5 1.6 % ,但与免疫组化结果并不一致。结论 :外阴癌中有较高的p5 3突变率 ,同时应用免疫组化及SSCP银染方法检测可提高突变型 p5 3的检出率。

野生型p14ARF基因转染对人肺癌细胞生长抑制的实验研究

目的 探讨外源性p14ARF基因能否对体内外生长的肺癌细胞起抑制增殖的作用。方法 选择 4株具有不同基因背景的肺癌细胞系 ,转染人的野生型p14ARF基因。通过RT PCR、免疫组化及Westernblot杂交检测 ,筛选出同时表达p14ARFmRNA及蛋白的阳性克隆。以母细胞及转染空载体细胞为对照 ,比较它们的增殖、细胞周期分布、裸鼠体内成瘤性以及形态学上的差异。结果 三株具有野生型p5 3基因的肺癌细胞在转染p14ARF基因后 ,细胞周期被显著阻滞于G1或G1/G2期 ,增殖受到抑制。结论 外源性野生型p14ARF基因转染能抑制人肺癌细胞的增殖 ,p14ARF基因是人肺癌基因治疗的理想候选基因。

TSC1-mTOR-PLK轴以阶段特异性方式调节从施旺细胞增殖到髓鞘形成的内稳态开关

恰如其分的外周髓鞘形成取决于雪旺细胞增殖与分化进程间的平衡。丝氨酸/苏氨酸激酶(mTOR)整合多种环境因素,是细胞生长、代谢、发挥作用的中枢调节者。本文报道了一种mTOR的负性调节剂——结节性硬化复合体(TSC1),通过控制细胞增殖和髓鞘稳态,建立了雪旺细胞谱系进展和髓鞘形成的阶段依赖性程序。小鼠雪旺细胞祖细胞中TSC1的解离导致mTOR信号通路激活,继而导致雪旺细胞过量增殖,分化受阻,髓鞘形成减少。转录组分析显示,TSC1突变体中的mTOR活化使得polo样激酶(PLK)依赖性通路和细胞周期调节剂上调。弱化mTOR或者对PLK进行药理抑制部分挽救了因TSC1缺失导致的外周神经发育过程中的髓鞘形成减少。相较之下,成年小鼠成熟雪旺细胞中TSC1缺失可导致髓鞘的过度增殖和过度生长。本文的发现提示了TSC1-mTOR-PLK信号轴在控制雪旺细胞的发育过程中,从增殖到分化和髓鞘内稳态中起到的阶段特异性功能。