Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究

目的：利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法（TUNEL染色检测纳米二氧化硅（nm-SiO2）对神经细胞凋亡的影响，比较两种检测方法的优缺点。方法：以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象，15和30 nm粒径的nm-SiO2（剂量为2.5、5、10μg/mL）分别处理细胞24 h，另设1-5 m SiO2组和溶剂对照组，采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果：与对照组相比，两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加（P〈0.05），且具有尺寸、剂量依赖性，而微米级SiO2对凋亡的影响不显著（P〉0.05）。结论：nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高，简单易行；TUNEL法灵敏度高，能检测少量的细胞凋亡，但成本较高，两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。

TUNEL法检测类猪圆环病毒2型因子P1诱导猪免疫器官细胞凋亡的研究

研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。猪感染P1后21和35 d的扁桃体、脾脏和腹股沟淋巴结等免疫器官细胞出现了凋亡。P1可能引起猪的免疫抑制。

TUNEL技术方法的探讨

探讨末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口标记技术 (TUNEL)的染色方法 ,以期提高特异性与敏感性。采用以去势 (经手术切除睾丸 )后天数不同的大白鼠前列腺 ,用 TUNEL 法染色 ,观察不同时期的细胞凋亡水平 ,对经典的 TUNEL 法进行改良 ,将染色结果与 TU NEL 经典法和 HE染色法进行对比。结果表明 :采用改良法后 ,阳性细胞明显增加 ,而且着色深 ,凋亡指数明显增高 (P<0 .0 1)。

TUNEL技术原位检测肝癌细胞凋亡──激光共聚焦显微镜观察

目的：用缺口末端标记技术（TUNEL）对肝硬变、肝细胞肝癌及培养肝癌细胞系的细胞调亡进行形态学观察．方法：采用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒对福尔马林固定、石蜡包埋的肝组织和培养肝癌细胞进行TUNEL染色，激光共聚焦显微镜观察肝细胞凋亡的形态特征．结果：TUNEL阳性信号为黄绿色或黄色强荧光，位于胞核，呈环行、小圆形或颗粒状，提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集、核浓缩以及有大量微核体的形成．在阿霉素诱导的HCC-9204细胞系还可见调亡细胞的出泡现象．TUNEL阳性细胞大多HE染色表现为调亡的细胞．结论：TUNEL技术加激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞是目前原位观察调亡的理想方法，特别适用于调亡细胞的早期检测．

TUNEL法检测乳酸杆菌对小鼠宫颈鳞癌的凋亡诱导作用

目的应用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法———TUNEL法,检测乳酸杆菌(Lactoba-cillus,LB)对小鼠宫颈鳞癌的凋亡诱导作用。方法建立615近交系小鼠U14移植瘤动物模型,并随机分组,TUNEL法检测各组细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果乳酸杆菌实验组的AI为(11.25±4.06)%,与对照组的差异有非常显著性(P<0.01),与抗癌药顺铂组的差异有显著性(P<0.05)。结论乳酸杆菌可诱导U14移植瘤细胞凋亡,这可能是其抑癌机制之一。

TUNEL法检测PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的研究

为了研究PRRSV诱导Marc-145细胞凋亡的动态变化规律,收集PRRSV-SC1株感染Marc-145细胞后0h、24h、48h、72h、96h、120h、144h和相同时间点未接种病毒的细胞样品,采用TUNEL法进行细胞凋亡的检测。结果表明,PRRSV能诱导Marc-145细胞发生凋亡;在PRRSV感染后24h开始出现凋亡,48h凋亡更加明显,72h达到高峰,随后细胞凋亡水平又有所下降,在感染后144h,细胞的凋亡水平低于正常组。

原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用

目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。

TUNEL法和Annexin V-FITC流式细胞分析法检测成纤维细胞凋亡的对比研究

目的通过Annexin V-Fitc流式细胞分析法和TUNEL法检测凋亡,比较两种方法的优缺点。方法以成纤维细胞为对象构建细胞体外培养-力学刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统,分别给予周期性张应力(频率为10个循环/min,每一循环包括3 s收缩/3 s舒张,力值定为12%)刺激6、12、24 h,并设立正常对照组。采用TUNEL染色法和Annexin VFitc流式细胞法检测成纤维细胞凋亡。结果 TUNEL染色结果显示,实验组较对照组的细胞核固缩,边界清楚,胞质淡染,染色质呈特异的棕黄色着染,而正常细胞的胞核不着染。流式细胞仪实验结果显示,实验组的G0/G1期的细胞比例明显增多,相对应的S期细胞比例明显减少,而在G2/M期较对照组却出现了明显的变化,6、12h组DNA含量分别为352.0±1.0、301.1±1.1,较未加力组255.2±1.7有显著延长,而24 h加力组DNA含量303.4±10.6与6 h组比较细胞周期却出现了缩短。结论Annexin V-Fitc流式细胞分析法特异性高,TUNEL法灵敏度高,两种方法相结合检测细胞凋亡更准确。

TUNEL法检测复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用

目的研究复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用。方法 40只大鼠随机分为正常组、模型组(生理氯化钠10ml·kg-1)和复方葛根片低、中、高剂量组[200、400、800mg(生药)·kg-1],每组8只。除正常组外,其他各组大鼠每天9∶00腹腔注射D-半乳糖溶液250mg·(kg·d)-1复制衰老模型,每天15∶00灌胃注射相应药物,连续给药8周。计算肝脏指数,采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测衰老大鼠肝脏组织的细胞凋亡情况。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数显著增加(P<0.01);肝脏组织中红色荧光明显增多,凋亡指数显著增加(P<0.01);与模型组比较,复方葛根片高、中、低剂量组中大鼠肝脏指数显著减小(P<0.05或P<0.01);肝脏组织中红色荧光明显减少,亮度降低,凋亡指数显著减小(P<0.05或P<0.01)。结论复方葛根片能抑制衰老模型大鼠肝细胞凋亡,减少凋亡细胞的产生,起到保护肝脏细胞的作用。

TUNEL法原位检测凋亡细胞的某些改进

目的 :探索避免TUNEL法检测凋亡细胞出现的假阳性和消除非特异性反应的方法。方法 :脑和心肌组织石蜡切片 ,改进的TUNEL染色。选用多聚甲醛固定 ,蛋白酶K修复抗原 ,将H2 O2 封闭内源性过氧化物酶放在反应液标记DNA片段之后 ,先后用小牛血清或羊血清两次封闭非特异性反应。结果 :证实本实验方法避免了假阳性 ,背底十分清亮。结论

用TUNEL法原位检测高血压大鼠心肌细胞凋亡

目的：探讨并建立原位检测在体心肌细胞凋亡的方法学。观察心肌细胞凋亡是否参与了高血压左室重构过程。方法：运用ＨＥ染色及ＴｄＴ介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡。结果：１２周龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）左室肥厚指数显著升高，心室游离壁可见凋亡的心肌细胞呈散在分布；调整ＴＵＮＥＬ程序可获得与ＨＥ染色相似的阳性率，阳性细胞多具有凋亡的形态特征。结论：应用ＴＵＮＥＬ法检测心肌细胞凋亡应根据特定的组织优化实验程序。高血压左室重构过程中心肌细胞以凋亡方式死亡。

用TUNEL法检测植物原生质体的凋亡

TUNEL是近年来发展的一种对凋亡细胞进行原位检测的方法 ,可以特异性地标记完整的凋亡细胞核或凋亡小体的染色体 3’_OH断裂末端 ,但在植物细胞中的应用还不多。本文报道应用TUNEL法检测胡萝卜原生质体的凋亡 ,并与DNA电泳、彗星电泳等方法进行了比较 ,结果表明它是一种适用于植物原生质体凋亡检测的灵敏度较高的方法。

电镜与TUNEL技术检测银屑病皮肤细胞凋亡的比较研究

目的 评价银屑病皮肤中细胞凋亡的情况。方法 采用电镜与TUNEL法对银屑病表皮及真皮的细胞凋亡情况进行了观察并比较其结果。结果 电镜下银屑病表皮颗粒层中细胞凋亡并不常见 ,在棘细胞层与基底层则更少 ,但TUNEL染色见阳性细胞广泛分布于表皮各层。结论 认为电镜与TUNEL所见不同的原因除了TUNEL法评价细胞凋亡的局限性以外 ,还有两种可能的解释 :①银屑病中角质形成细胞凋亡在早期 (可被TUNEL染色 )即受到抑制而不能继续发展到具有典型形态学改变的中晚期被电镜识别 ;②TUNEL阳性的角质形成细胞 (含凋亡早期的DNA断链 )在发展到具有典型形态学改变之前就已从皮表脱落。

对凋亡细胞TUNEL染色操作中的体会

凋亡细胞的TUNEL染色已在科学研究中广泛应用。由于TUNEL染色的步骤多,操作精细,影响DNA断裂的因素多,实验结果往往不够准确致使实验失败。总结多年实践经验,拟从组织的取材方式、取材大小、固定剂选择、组织离体后缺血时间、组织在固定剂内的固定时间以及实验操作中的诸多细节等方面进行介绍。

介绍一种细胞凋亡TUNEL检测与Ki-67 DAPI三色荧光染色操作流程

肿瘤生物治疗基础研究中,对不同小分子靶向治疗药物进行疗效评估时,除可以测量肿瘤大小外,还需利用TUNEL技术检测肿瘤细胞凋亡程度及行免疫荧光染色检测Ki-67蛋白肿瘤细胞增殖程度。凋亡细胞增多,增殖的肿瘤细胞减少,可以初步推测肿瘤治疗有一定疗效。本文首次采用细胞凋亡TUNEL技术检测Ki-67 DAPI三色荧光染色在同一张肿瘤石蜡切片上同时检测凋亡的肿瘤细胞及增殖的肿瘤细胞,结果较稳定,现介绍如下。

AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法和TUNEL法检测肝细胞凋亡的对比研究

目的通过AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法和TUNEL法检测肝细胞凋亡,比较两种方法的优缺点。方法以体外培养人肝细胞株HL-7702为研究对象,分别设立TGF-β1组(加入TGFβ-1至终浓度为20 ng/ml,作用72 h后收集细胞进行检测)和正常对照组(加入等量PBS),采用AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法和TUNEL法检测肝细胞凋亡。结果AnnexinⅤ/PI流式细胞分析显示,TGFβ-1组与正常对照组相比肝细胞的早期凋亡率和总凋亡率均显著增加[(10.55±4.71)%vs(5.98±2.97)%,P<0.01;(19.94±3.68)%vs(13.27±4.62)%,P<0.05]。TUNEL法检测显示,细胞核中有棕黄色着染者为阳性细胞,细胞呈典型的凋亡形态学改变,即表现为变小、变圆、核固缩;而正常细胞的胞核不着染。经Iimage-Pro Plus图像分析软件处理,显示TGF-β1组与正常对照组相比肝细胞凋亡率显著增加[(30.25±6.43)%vs(4.75±0.96)%,P<0.01]。结论AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法特异性高,TUNEL法灵敏度高,两种方法相结合检测细胞凋亡更准确。

实验性衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶、TUNEL的改变

目的探讨D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶(β-gal)表达及凋亡细胞的改变。方法通过β-gal活性的检测,观察下颌下腺衰老细胞数目的改变;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,观察下颌下腺凋亡细胞数目改变。结果β-gal阳性表达以模型组最高,正常组最低;TUNEL阳性表达以模型组最高,正常组最低。结论D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-gal表达增加,凋亡细胞数较正常组明显增多。