糊精介质中西酞普兰的毛细管电泳手性分离与定量测定

以糊精作为毛细管电泳手性分离选择剂,对药物西酞普兰对映体的分离进行研究.考察了糊精浓度、缓冲液体系离子强度和pH及分离电压对对映体分离的影响.在糊精7.0%(m/V)、磷酸盐80 mmol/L(pH 5.4)的运行缓冲液中,分离电压20 kV时,西酞普兰对映体分离度达3.9,同时对拆分机理进行了初步探讨.测定S-(+)-西酞普兰原料药中R-(-)异构体的含量,在0.05～4.00 g/L浓度范围内线性关系良好,R-(-)-西酞普兰与S-(+)-西酞普兰的检出限分别为25.3 mg/L和27.3 mg/L,线性相关系数均在0.9970以上;RSD低于3.2%.

毛细管电泳法同时测定血浆中茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平的浓度

目的:建立同时测定血浆中茶碱、苯巴比妥、苯妥英钠和卡马西平浓度的毛细管电泳法。方法:取血浆0.5 mL,用醋酸乙酯提取后吹干,用40 μL运行缓冲液溶解,进样于毛细管电泳仪进行分离测定。毛细管电泳条件:缓冲液为30 mmol·L^(-1)磷酸氢二钠(pH=8.0)含75 mmol·L^(-1)十二烷基硫酸钠(SDS),温度:30℃,运行电压:30 kV,紫外检测波长:200 nm,压力进样10 s。结果:本法线性关系和精密度良好。结论:本法简便、快速、灵敏,适用于常规监测。

龙眼胚性培养物APX同工酶的分析方法建立及其在龙眼体胚发生过程中的变化

以龙眼胚性培养物为材料,进行抗坏血酸过氧化物酶(APX)同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法研究,建立一套适合分离龙眼胚性培养物中不同类型APX同工酶的垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法;进一步研究了APX同工酶在龙眼体胚发生过程中的变化,发现在胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚3个阶段APX同工酶存在差异.

细胞凋亡率检测方法的探索

目的探索可用于全面准确评价细胞凋亡率的检测技术。方法选取地塞米松诱导胸腺细胞凋亡模型,用流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法对处于不同凋亡阶段的胸腺细胞凋亡率进行检测分析。结果流式细胞分析对于早期凋亡胸腺细胞的检测不仅具有高度灵敏性,而且可有效区分凋亡与坏死细胞,但对于凋亡晚期细胞膜严重受损乃至破碎的细胞,单纯流式细胞仪检测不能有效反映真实凋亡率;借助琼脂糖凝胶电泳法可检测破碎后释放到胸腺组织或培养基内的DNA碎片;当凋亡严重导致大量细胞破碎降解时,对样本进行细胞计数比较亦有重要参考价值。结论为全面和准确地评估细胞凋亡率,需选择多种检测方法结合分析,细胞学及寡核苷酸片段检测技术是一个相当不错的选择。

毛细管区带电泳法测定白藜芦醇与白藜芦醇苷

建立了以苄基三甲基碘化铵为内标测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的毛细管区带电泳方法,在优化的分离条件下,两者在7 min内可基线分离,检出限均为1.25×10-4g/L,线性动态范围分别是4.88×10-4g/L^0.31 g/L和5.37×10-4g/L^0.34 g/L,样品的加标回收率为95.44%和97.75%.

全自动毛细管电泳仪在血红蛋白分析中的应用

目的探讨全自动毛细管电泳仪在血红蛋白分析中的临床应用价值。方法使用全自动毛细管电泳仪及配套试剂进行血红蛋白电泳(法国Sebia公司Capillarys2),检测了5088例标本,分析异常发生频率;选出229例同时进行毛细管电泳和地贫基因分析,比较其符合率。结果全自动毛细管电泳仪测定5088例标本,发现异常1042例,其中β地贫757例(HbA2>4.0%),HbF增高23例,异常Hb262例。229例同时进行毛细血管电泳与地贫基因检测比较,与β地贫符合率100%,与HbH病和HbCS的符合率分别是97.83%和95.00%。结论全自动毛细管电泳仪检测Hb电泳精密度及准确度较好,能够分离和量化出HbA2、HbF异常增高及HbE、HbH、HbBart's、HbCS等异常血红蛋白条带,可为地中海贫血及血红蛋白病筛查及诊断提供快速准确的诊断依据。

元胡中延胡索乙素的离子液体-毛细管电泳法测定

建立了以离子液体为电解质,测定元胡药材中延胡索乙素含量的毛细管电泳新方法。探讨了离子液体浓度、pH值、分离电压对分离效果的影响以及分离的机理。在以石英毛细管为分离柱,50 mmol/L 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（pH 7.1）为电泳介质,分离电压20 kV的条件下,延胡索乙素可与其它组分在5m in内完全分离。延胡索乙素的线性范围为31.25-500 mg/L,检出限为4.86 mg/L,回收率为95%-102%。

ISO-DALT双向电泳方法的优化与改进

通过对ISO-DALT双向电泳技术进行优化与改进,建立了一套适合于UV-B胁迫下水稻蛋白质组分析的双向电泳技术.用此方法对经低剂量UV-B辐射处理的水稻品种IR64的叶片蛋白进行双向电泳,可以分辨出1200-1300个蛋白(肽)点,等电点(pI)在3.5-9.3之间,相对分子质量在10-120 ku之间,分辨率较高,且重复性较好.

麦芽糖作选择剂西酞普兰手性毛细管电泳分析及拆分机理研究

研究了以麦芽糖为选择剂的毛细管电泳手性拆分方法.以抗抑郁药物西酞普兰对映体的分离和定量测定为实例,考察了分离条件,在40%（m/m）麦芽糖、8.0×10^-2 mol/L磷酸盐运行缓冲液（pH 5.0）中,分离电压20 kV时,西酞普兰对映体分离度达2.3.测定S- （＋）-西酞普兰中R-（-）异构体的含量,在0.05～ 4.00 g/L浓度范围内线性关系良好.R-（-）-西酞普兰与S-（＋）-西酞普兰的检出限分别为0.0453 g/L和0.0473 g/L,线性相关系数均＞0.9978.以荧光光谱法对西酞普兰与麦芽糖的相互作用进行了考察,并较系统地对拆分机理进行了研究.证明麦芽糖的手性识别能力与其浓度有关,当麦芽糖达到一定浓度后将形成聚集体,而麦芽糖的拆分作用就主要体现在其聚集体疏水空腔的立体作用上.

毛细管电泳内标法测定糖果中胭脂红酸

建立了胭脂红酸的毛细管电泳紫外测定方法。以未涂层融硅石英毛细管（55cm×75μm）为分离柱，3mmol／L硼砂（pH=8．92）为电泳介质，在分离电压为20kV，紫外检测波长为280nm的条件下对胭脂红酸进行测定。讨论了缓冲溶液、pH值、检测波长及分离电压的优化选择。以桂皮酸为内标对胭脂红酸进行定量测定，线性范围为3．92．100mg／L；检出限（S／N=3）为2mg／L。将该法应用于糖果中胭脂红酸含量的测定，方法简单可行且结果良好。

高效毛细管电泳安培法测定肉苁蓉中松果菊苷的含量

采用毛细管电泳安培法建立了肉苁蓉中松果菊苷含量的检测方法，探讨了缓冲溶液种类、工作电位、分离电压、进样时间等对分离和检测的影响。在15mmol／L硼砂缓冲溶液（pH9．5），25kV电压，0．6V工作电位的条件下，松果菊苷的质量浓度在0．5—50．0mg／L范围内与峰面积呈良好线性，相关系数为0．9994，检出限（S／N=3）为0．1mg／L，回收率为98％-102％。该法简便、快速、准确，可用于肉苁蓉中松果菊苷的质量控制。

家蚕催青后期胚胎蛋白质双向电泳图谱分析

采用蛋白质双向电泳技术分析了家蚕Bombyxmori催青后期胚胎蛋白质图谱的变化。研究发现:在头胸分化期(戊3)、反转期(己1)、毛瘤发生期(己2)、点青期(己3)、转青期(己4)和孵化期(己5)胚胎蛋白质的双向电泳图谱中共检测到209个特异蛋白斑点,其中己3和己4两个胚胎出现的特异蛋白斑点数在整个催青期胚胎中为最多,分别达55和77个。与催青前期胚胎出现的特异蛋白斑点变化规律相似,这些特异蛋白斑点大多也是在随后邻近的胚胎发育中消失。推测这些特异蛋白可能与相应胚胎的形体特征发育有关。

不同上样方式对蛋白质组双向电泳图谱质量的影响比较

蛋白质组技术难点之一是如何获取尽可能多的细胞或组织的蛋白信息.双向电泳蛋白斑点数目直接反映了实验蛋白质组信息的完整性.除样品制备外,蛋白上样方式对双向电泳图谱的质量和完整性有直接的影响.实验论文从以下3个方面考察不同的蛋白上样方式对双向电泳图谱的影响;即:水化上样与杯上样;一次上样与重复上样;以及酸性端加样与碱性端上样.实验结果发现;蛋白上样量较大时,杯上样方式的图谱斑点数目较水化上样方式明显增多;样品蛋白浓度较高时,稀释多次上样明显优于一次性浓缩蛋白上样;蛋白裂解液(MCF-7乳腺癌细胞)在酸性端加样对偏碱性蛋白的分离未发现明显优势.相反,在等电聚焦伏小时(Vh)足够的前提下,碱性端加样对偏碱性端蛋白反而有利,表现为斑点数目较多,而且等电点方向拖尾减轻.实验结果对提高双向电泳的质量以及相关蛋白质组信息的完整性提供了有益的技术参考.

本周氏蛋白电泳在M蛋白检测中价值的探讨

目的通过对与免疫固定电泳、血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量和热沉淀反应法这4种方法的比较,评价本周氏蛋白电泳在M蛋白检测中的价值。方法对178份尿标本同时采用热沉淀反应法和本周氏蛋白电泳检测本周氏蛋白;对25份多发性骨髓瘤患者的血清标本,同时进行本周氏蛋白电泳、血清蛋白电泳、免疫球蛋白定量和免疫固定电泳检测,比较其M蛋白的检出率和对M蛋白分型的作用;对29例出现M蛋白的患者的血和尿本周氏蛋白电泳结果进行了比较分析。结果本周氏蛋白电泳检测尿本周氏蛋白的敏感性远高于热沉淀反应法;免疫固定电泳和本周氏蛋白电泳检测血M蛋白的敏感性最高,血清蛋白电泳次之,透射比浊法免疫球蛋白定量再次之;同一患者血和尿标本的M蛋白出现情况并不一致。结论本周氏蛋白在M蛋白检测方面具有敏感性高,反映M蛋白成分全面的优点,最适合于M蛋白的筛查。血和尿标本中M蛋白出现并不一致,应同时检测。

二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的毒性作用

目的探讨二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的影响。方法对妊娠初期的雌性小鼠采用静式吸入染毒法进行二甲苯染毒,观察胎鼠体重变化;原子吸收分光光度测定法(atomic absorption spectroscopy,AAS)检测妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量;单细胞凝胶电泳法(single cell gel electrophoresis,SCGE)检测妊娠母鼠外周血有核细胞DNA损伤程度。结果染毒各组妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量下降(P<0.01,P<0.05),并具有统计学意义;染毒组妊娠母鼠外周血有核细胞发生DNA断裂并形成彗尾图像;染毒各组胎鼠体重较正常组相比均显著下降,且存在显著性差异(P<0.05);部分胎鼠表现为胚胎被吸收、脑膜脑膨出、椎骨发育不全等。结论二甲苯可造成妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量下降、外周血有核细胞DNA损伤并致使流产发生;二甲苯引起胎鼠体重下降,并影响生长发育。

毛细管电泳与MFOLD软件研究单链脱氧核糖核酸分离二级结构

从Gene Bank数据库中下载质粒基因序列,用DNAssist软件分析并最终建立了单点碱基突变模型,并以此为研究对象对单链DNA分离机理进行研究探讨。采用高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)方法,以线性聚丙烯酸胺为筛分介质对模型进行分离分析,并与MFOLD软件所预测的单链二级结构进行对照分析。分离条件为:线性聚丙烯酸胺浓度为6%,负极进样,13kV分离,温度为19℃,λem=488nm、λex=520nm。结果发现毛细管电泳实际分析结果有4个单链峰,而MFOLD软件预测的只有3种二级结构,预测的准确度为75%,MFOLD软件虽然有局限性,但预测DNA二级结构仍有一定的参考价值。

山茱萸种子形态和蛋白电泳分析

目的:建立不同果型山茱萸种子的鉴别方法。方法:对山茱萸7个果型的种子(果核)的性状进行了观察描述,并作了蛋白电泳分析。结果;山茱萸不同果型种子的形状、种形指数(直径/长度)和千粒重都有差别。蛋白电泳图谱显示,不同果型山茱萸种子的电泳谱带非常近似,特别是A区的一级带都是三条,显示出种的一致性。但在B区和C区,谱带的着色度及数量却有区别。结论:实验结果可为山茱萸栽培品种划分及选育种提供理论依据。

非水毛细管电泳法区分蓝色圆珠笔油墨的研究

建立了一种基于非水毛细管电泳法区分蓝色圆珠笔油墨的方法。确定了笔迹中碱性染料(结晶紫、甲基紫、碱性品蓝、罗丹明6G、碱性艳蓝B和碱性艳蓝BO)的分离条件:缓冲溶液为1.00mmol/L醋酸-100mmol/L醋酸铵的甲醇-水(体积比90:10)体系,分离电压和温度分别为25kV和25℃,检测波长为214nm。通过该方法分析了96支蓝色圆珠笔中的油墨,并依据油墨中所含的染料种类对圆珠笔进行分类,同一类笔又通过聚类分析计量学方法再次进行区分。该法重复性好,结果准确可靠,为圆珠笔字迹鉴定提供了一种科学的方法。

90例待产妇血清蛋白电泳图谱分析

目的了解待产妇血清蛋白电泳图谱的改变。方法采用英国Helena Spife2000蛋白电泳仪测定90例待产妇(实验组)、30例育龄非孕健康女性(对照组)的血清蛋白电泳。同时在美国Beckman Array360上采用散射比浊法测定30例实验组和20例对照组的血清铜蓝蛋白(CER)、转铁蛋白(TRF)、补体C3(C3)、C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(Ig M)、α1-酸性糖蛋白(AAG)、α1-抗胰蛋白酶(AAT)、触珠蛋白(HPT)。结果实验组白蛋白百分比[(47.88±5.1)%]较对照组[(54.24±4.2)%]低(P<0.01),α1、α2、β球蛋白百分比较对照组显著增高,分别是α1球蛋白实验组[(6.87±1.78)%]、对照组[(3.96±0.67)%](P<0.01);α2球蛋白实验组[(10.70±2.25)%]、对照组[8.66±2.49)%](P<0.01);β球蛋白实验组[(16.21±3.05)%]、对照组[(11.86±1.90)%](P<0.01);而γ球蛋白百分比[(18.33±3.91)%]与对照组[(21.27±4.86)%]相比则明显降低(P<0.01)。实验组C3、TRF、CRP、CER、AAT较对照组显著增高(P<0.01),IgG较对照组显著降低(P<0.01),Ig M、IgA、HPT、AAG与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论待产妇血清蛋白电泳谱的改变主要表现在白蛋白、γ球蛋白降低,而α1、α2、β球蛋白比例增加。α1球蛋白的增加与AAT、CER的增加有关,α2、β球蛋白比例增加与CRP、TRF、C3增高有关,而γ球蛋白降低与IgG降低有较大相关性。

脉冲场凝胶电泳分子分型追溯霍乱传染源研究

目的了解湖南省2005年霍乱疫情分离菌株与常规监测的外环境和水产品中霍乱弧菌分离株之间的遗传相关性,追溯传染源,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法采用PCR检测霍乱菌毒力基因,以脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株的分子分型。结果所有菌株均具有CT基因,20株菌的PFGE为1个型。结论20株霍乱弧菌均是产毒株,具有致病性;湖南省从甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与同期流行的O139群霍乱弧菌分型的带型一致,分子流行病学分析提示甲鱼可能是湖南省近年霍乱疫情主要传染来源之一。