QuEChERS-液相色谱-串联质谱法检测鲜蛋中4种大环内酯类抗生素残留

目的建立QuEChERS-液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)测定鲜蛋中泰乐菌素A、泰万菌素、红霉素A、替米考星的残留方法。方法样品经80%乙腈水溶液超声涡旋提取,分析液经QuEChERS方法净化,乙腈饱和正己烷去除脂肪,以乙腈与0.1%甲酸水(含5 mmol乙酸铵)为流动相进行梯度洗脱,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱进行分离,在电喷雾正离子(electrospray ionization,ESI+)模式,多反应离子监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式下检测,基质匹配内标法进行定量。结果对于鲜蛋基质,泰乐菌素A、泰万菌素、红霉素A在0.25~50.00μg/kg,替米考星在0.50~50.00μg/kg的浓度与其相对应的峰面积之间线性关系良好,r^(2)均大于0.999,在3种不同浓度添加水平下,泰乐菌素A、泰万菌素、红霉素A、替米考星的平均回收率为89.05%~109.82%,相对标准偏差为4.59%~11.46%。结论该方法具有较高的准确度、精密度和灵敏度,适用于检测鲜蛋中的泰乐菌素A、泰万菌素、红霉素A、替米考星。

围产期使用抗菌药物对PRRSV阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响

旨在评估围产期使用抗菌药物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响。从广西某规模化PRRSV阳性猪场挑选280头临产母猪随机分为5组,在其围产期分别用替米考星、泰妙菌素、多西环素和泰万菌素等兽医常用抗生素,对照组不使用抗菌药物。采集各组断奶仔猪前腔静脉血进行PRRSV核酸和抗体检测,以评估各药物对防控仔猪PRRSV感染的效果;统计各组断奶仔猪腹泻窝数及比率,以探究常用抗生素对仔猪腹泻的防控效果;统计各组断奶母猪的断配间隔及断奶7、10 d内发情配种率,统计各组仔猪的窝均断奶数、断奶存活率和断奶重等生产指标,以评估围产期常用抗生素使用对母猪和仔猪生产性能的影响并计算使用药物所带来的经济效益。结果表明:泰万菌素、替米考星组断奶仔猪PRRSV核酸阳性检出率为0%,且PRRSV抗体水平显著高于对照组;泰万菌素组仔猪的腹泻率低于其它用药组及对照组;相关生产指标统计显示,与其他组相比,泰万菌素组仔猪断奶存活率及断奶均重最高,母猪的断配间隔最短,窝均损失资产更低。综上,本研究评估了围产期使用兽医临床常用抗生素对PRRSV阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响,发现使用泰万菌素可以有效阻断PRRSV垂直传播,提升仔猪抗体水平,显著改善断奶仔猪腹泻率;使用泰万菌素显著提升了仔猪断奶存活率及断奶均重,缩短了母猪的断配间隔,降低了窝均损失资产。本研究的开展为规模化PRRSV阳性猪场的有效药物使用提供了重要试验数据和理论支持,为在PRRSV大流行背景下实现规模化猪场降本增效提供了必要的补充措施。

泰万菌素兽用国家标准品的研制

旨在研制首批泰万菌素兽用国家标准品,用于酒石酸泰万菌素及其制剂中泰万菌素的效价测定。采用精制后的泰万菌素酒石酸盐为原料进行本批泰万菌素标准品的研制,原料分装后按照酒石酸泰万菌素质量标准及《中华人民共和国兽药典》2015年版中的规定对其进行质量检测及均匀性评价,采用紫外-可见分光光度法测定最大吸收波长,60℃减压干燥法测定干燥失重,高效液相色谱法测定泰万菌素A组分,并以原始发明厂的标准品为基准,采用抗生素微生物检定法中三剂量管碟法进行协作标定,对标定结果进行合并计算,作为本批标准品的效价赋值。结果显示,分装后的标准品经60℃减压干燥至恒重后减失重量为2.0%,均匀性评价符合要求,在289 nm的波长处有最大吸收,抗生素微生物检定法测定的泰万菌素效价为822 U·mg-1。本研究研制的首批泰万菌素兽用国家标准品各项检测指标均符合规定,可作为国家标准品发放,用于酒石酸泰万菌素原料及制剂中泰万菌素的效价测定,便于生产企业和质量检定部门进行酒石酸泰万菌素原料及制剂的质量控制,对于提高和保证兽药质量具有重要意义。

泰万菌素对猪繁殖与呼吸综合征的防控效果试验

为检验泰万菌素对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的防控效果,用2种泰万菌素制品(A、B)和黄芪多糖饲喂妊娠母猪,通过统计临床生产指标、母猪和仔猪抗体水平、病毒检出率以及细胞因子IL-2、IFN-γ表达水平等,综合评价泰万菌素的PRRS防控效果。结果显示:泰万菌素的PRRS防控效果明显优于黄芪多糖,其中泰万菌素A、B组母猪的产健仔率由试验前的84.98%分别提高到94.44%、91.89%,产弱胎、死胎或木乃伊胎率相应降低;泰万菌素A、B组母猪流产率降低,体内抗体下降速率减缓,所产仔猪抗体稳定性和整齐度提高,母猪血液中的PRRS病原检出率和浓度降低,IL-2表达水平下降,IFN-γ表达水平上升。结果表明,泰万菌素可降低妊娠母猪因PRRS造成的繁殖障碍率,同时可通过调控细胞因子水平增强机体免疫力,从而起到防控PRRS的作用。本研究为PRRS防控提供了一种新思路。

饲粮添加抗生素和植物精油对母猪生产性能、免疫功能和乳成分的影响

本文旨在考察妊娠后期母猪饲粮添加酒石酸泰万菌素(TT)与植物精油(PEO)对其生产性能、免疫功能和乳成分的影响。试验选用24头体重相近的3~4胎次"长×大"繁殖母猪,随机分为3组:1)对照组:基础饲粮;2)TT组:基础饲粮+100 mg/kg TT;3)PEO组:基础饲粮+200 mg/kg PEO。每组8个重复,每个重复1头猪。试验期为妊娠第96天至断奶。结果显示,饲粮添加TT和PEO可改善母猪生产性能;与对照组和TT组相比,PEO组死胎率分别降低了71.43%和53.33%(P>0.05),断奶存活率分别提高了1.17%和1.60%(P>0.05),木乃伊率较对照组降低了50.00%(P>0.05);PEO组母猪分娩第1、14和21天、TT组母猪分娩第21天血清免疫球蛋白(Ig)A含量均显著高于对照组(P<0.05);PEO组母猪分娩第14天乳清Ig G、Ig M含量也显著高于其他2组(P<0.05),同时其分娩第21天乳清Ig G含量显著高于对照组(P<0.05);PEO组母猪分娩第21天乳脂含量显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,饲粮添加TT和PEO均能在不同程度上改善母猪生产性能与免疫功能,但与TT相比,PEO效果更好,具有替代TT在妊娠母猪上应用的潜力。

抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素预混剂的有效含量

对抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素预混剂进行了方法学验证,确定了最适菌悬液加入量和超声时间。结果表明,泰万菌素浓度在2~10 IU/mL范围内线性关系良好;平均回收率为100.24%,RSD为1.21%,准确度良好;精密度RSD为1.15%,精密度良好;辅料对含量测定无影响,专属性良好;不同培养时间和不同厂家的培养基测定结果RSD分别为1.94%和0.20%,方法耐用性良好。该方法适用于酒石酸泰万菌素预混剂的含量检测。

使用泰万菌素治疗鸡胚中鸡滑液支原体的效果试验

为了解泰万菌素对鸡胚中鸡滑液支原体(MS)的治疗效果,本试验将鸡滑液支原体分别以106.0变色单位(CCU)和105.0 CCU感染15日龄SPF鸡胚,并对感染后鸡胚注射泰万菌素和泰妙菌素,统计入孵蛋健雏率和孵化雏鸡肺脏感染情况。结果显示,无论MS以高剂量或低剂量感染SPF鸡胚,用药组入孵蛋健雏率均高于MS对照组,且MS+泰万菌素组效果优于MS+泰妙菌素组。对雏鸡肺脏支原体含量进行检测,MS对照组为24.8±0.84 CCU/0.1 mL,用药组为21.6~22.0 CCU/0.1 mL,二者差异显著。表明使用泰万菌素对被感染的种蛋进行治疗,可增加健雏率,减少雏鸡肺脏支原体含量,对种鸡场的净化有重要意义。

酒石酸泰万菌素对特定畜禽疫病防治功效研究进展

酒石酸泰万菌素(简称泰万菌素)系大环内酯类动物专用抗生素。本文综述了泰万菌素防治敏感细菌感染、支原体病、猪痢疾以及猪繁殖与呼吸综合征等畜禽疫病的功效研究成果,证实泰万菌素对于防治上述畜禽疫病功效显著。近年来研究发现,泰万菌素活性不同于其他类抗生素,可作为抗病毒药物使用,特别适用于对猪繁殖与呼吸综合征的治疗。泰万菌素可抑制病毒复制,缩短病毒血症周期,降低死亡率,减轻临床症状;同时还可通过降低母猪流产率,提高产健康仔猪数以及改善母猪、仔猪病毒血症等,达到控制病毒垂直传播的目的。在当前日益关注兽药残留、动物源细菌耐药性的社会背景下,泰万菌素制剂能很好满足畜禽养殖场用药需求。

泰万菌素对PRRSV感染的临床调节作用及对猪瘟和口蹄疫疫苗免疫效果的影响

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性不稳定场猪群为试验对象,评价泰万菌素对PRRSV感染程度的调节作用及对猪瘟(CSF)疫苗,口蹄疫(FMD)A型和O型疫苗免疫效果的影响。试验一:将2000头母猪随机等分为A、B两组,分别给药两家泰万菌素产品,对比用药前后母猪抗体水平及各项生产性能指标变化。结果显示:用药后两组猪群PRRSV、猪瘟病毒(CSFV)抗体水平比用药前均得到明显改善。其中A组PRRSV抗体S/P值在0.4~2.0范围内比例由53.6%升至89.3%(P<0.05);母猪群CSFV抗体阳性率由67.9%升至100%(P<0.05),抗体水平由50.8%提升至91.1%(P<0.05)。猪群口蹄疫病毒(FMDV)A/O型抗体阳性率、离散度亦有所改善,且猪群各生产指标均得到提高。试验二:对种公猪实施泰万菌素保健。保健前后各指标对比分析结果显示:保健后种公猪群PRRSV抗体阳性率由100%降至66.1%,S/P值均在2.0以内,离散度降至22.5%。综上,泰万菌素能有效缓解猪群PRRSV的感染程度,提升猪群的健康水平,同时使猪群在免疫CSF、FMD疫苗后获得更好的免疫应答。

分散固相萃取法结合液相色谱串联质谱法检测鸡可食性组织中泰万菌素及3-乙酰泰乐菌素残留量

建立了检测鸡肉、鸡皮脂、鸡肝和鸡蛋中泰万菌素以及其主要代谢产物3-乙酰泰乐菌素残留量的液相色谱串联质谱方法。前处理使用分散固相萃取法,选择使用50%(V/V)乙腈提取,无水MgSO_4进行脱水和盐析,正己烷脱脂,酸性氧化铝粉末进行样品净化。将离心后的上清液以如下方法进行上机检测:使用反相色谱柱进行分离,流动相为0.1%甲酸和乙腈,采用梯度程序进行洗脱,三重四级杆质谱进行定性定量分析。实验结果表明,方法的最低检出限为2.5μg/kg,最低定量限为5μg/kg,在5~200μg/kg范围内线性关系良好(r>0.995),添加回收率在60%~110%,RSD<20%,表明该方法具有较好的准确度与精密度。

增强型脂质去除固相萃取-液相色谱串联质谱法测定畜禽产品中泰万菌素和3-O-乙酰泰乐菌素残留量

建立了增强型脂质去除固相萃取-液相色谱串联质谱法测定畜禽产品中的泰万菌素和3-O-乙酰泰乐菌素残留量。通过比较多种类型固相萃取柱对泰万菌素和其代谢物3-O-乙酰泰乐菌素测定结果的影响,最终选用甲酸-乙腈-水溶液提取,Captiva EMR-Lipid柱净化。利用单因素实验优化了乙腈-水体积比、甲酸含量以及振荡提取时间等影响因素,并在此基础上进行L9 (3~3)正交实验。通过方差分析明确主次因素,确定各因素之间最佳组合方式为:采用0.3%甲酸-乙腈-水溶液(90/10, V/V)提取,振荡25 min,Captiva EMR-Lipid柱净化。结果显示,泰万菌素和3-O-乙酰泰乐菌素在0.2~10μg/L线性范围内线性关系良好,线性相关系数R>0.998。在1, 5, 10, 50μg/kg加标水平下,平均回收率为76.5%~93.5%,相对标准偏差为1.6%~7.3%。

泰万菌素肠溶微丸的研制及质量评价

为用挤出-滚圆技术制备100g/kg泰万菌素肠溶微丸,并对其进行初步的质量评价,以泰万菌素、微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠、氯化钠为基础配方制备素丸,以丙烯酸树脂Eudragit L30D-55水分散体作为肠溶包衣材料,单因素与正交试验筛选处方及工艺条件,制备泰万菌素肠溶微丸,采用高效液相色谱法和体外溶出试验测定该微丸的载药量和释放度。结果显示,泰万菌素、微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠、氯化钠在合适的质量比下,包衣增重20%,制备的肠溶微丸圆整度合格,平均粒径过孔径0.350~0.701mm标准检验筛,收率达到90%以上,平均载药量9.96%,在0.1mol/L盐酸溶液中2h释放度低于10%,在pH6.8的磷酸钠缓冲液中45min释放度达到90%以上。结论：该微丸载药量稳定,体外释放度符合《中华人民共和国兽药典》肠溶型标准。