INF-γ对体外培养的系膜细胞HMGB1和MMP-2表达的影响

目的:探讨INF-γ对体外培养的人肾小球系膜细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响及可能机制,为系统性红斑狼疮(SLE)肾脏损害的治疗提供依据。方法:将常规培养的人肾小球系膜细胞分为正常对照组和INF-γ刺激组,于6、12和24 h收集细胞和上清,RT-PCR和免疫细胞化学法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;双抗夹心ELISA法检测细胞培养上清中HMGB1和MMP-2表达;免疫细胞化学法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和MMP-2表达。结果:与对照组比较,INF-γ刺激组系膜细胞PCNA蛋白表达强度增加,INF-γ刺激12和24 h时系膜细胞中HMGB1 mRNA水平明显增加(P<0.01),HMGB1蛋白表达强度增加;培养上清中HMGB1浓度明显增加(P<0.01);与对照组比较,INF-γ刺激组系膜细胞中MMP-2表达强度增加,培养上清中MMP-2蛋白水平升高(P<0.01);培养上清中HMGB1浓度与MMP-2蛋白表达量呈正相关关系(r=0.915,P<0.01)。结论:INF-γ通过促进系膜细胞合成和分泌HMGB1而上调MMP-2的表达,可能与SLE肾脏损伤有关联。

狼疮肾炎鼠肾组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达和胶原沉积研究

目的 研究前胶原基因表达和胶原沉积与狼疮肾炎进展的关系。方法 狭线印迹杂交方法检测ＢＸＳＢ小鼠肾脏组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原基Ｎ ｍＲＮＡ转录水平。斑点印迹法测定肾组织 Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积情况。结果狼疮肾炎发病较重的 ６月龄雄性 ＢＸＳＢ小鼠肾脏组织表达 Ⅰ、 Ⅲ型前胶原 ｍＲＮＡ的量显著增加（ Ｐ均＜ ０． ０５），分别为 ３月龄雄鼠肾脏表达量的３．２倍和１．５倍，肾内Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积较对照鼠显著增多（Ｐ分别＜０．０１）。结论Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的异位大量表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原在肾脏沉积增加，是狼疮肾炎肾小球细胞外基质病理性积聚的重要原因，可能会引起肾小球结构和功能多方面的改变，在狼疮肾炎的进展和肾小球硬化的形成过程中起重要作用。

重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4^+CD25^+T调节细胞表达的细胞因子的影响

目的:研究重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25+Treg分泌的细胞因子IL-10和TGF-β的影响。方法:10例健康人为正常对照组,20例LN病人随机分为四组:LN对照组(n=5)、重楼干预组1(n=5,接种细胞数为1×105/1.5ml/孔)、重楼干预组2(n=5,接种细胞数为2×105/1.5ml/孔)、重楼干预组3(n=5,接种细胞数为5×105/1.5ml/孔)。分离外周血单个核细胞,利用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Treg。重楼干预组予重楼皂甙Ⅱ干预,正常对照组和LN对照组不予处理,各组培养72h。取各组上清,用ELISA分别检测IL-10和TGF-β的水平。结果:与正常组比较,其余各组TGF-β和IL-10的水平明显降低(P<0.01)。与LN对照组比较,重楼皂甙Ⅱ干预后各组TGF-β和IL-10的水平升高(P<0.05)。重楼干预组之间比较,重楼干预组2的TGF-β和IL-10水平较其他两组明显升高(P<0.01),而重楼干预组1和3的TGF-β和IL-10水平变化无显著性差异(P>0.05)。结论:重楼皂甙Ⅱ可上调LN患者TGF-β和IL-10的水平,上调的幅度受接种细胞数量的影响。